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高效液相色谱一蒸发光散射检测法测定黄芪注射
液中黄芪甲苷含量
郭璐
(哈药总厂科研所，黑龙江哈尔滨150000)
摘要：本文用高效液相法对黄芪注射液中的黄芪甲等的进行了含量测定。图定相为：依利特hypersilBDSC18色谱柱(4.6*250*5u 好的线性关系。黄芪甲等的平均回收率为99.5%。本法简便、重现性好、回收率高，可用于黄芪注射液中黄芪甲苷的含量测定。
关键词：黄芪注射液；黄芪甲苷；测定
黄芪注射液.益气养元，扶正祛邪，养心通脉，健脾利湿。黄芪注射波用于心气虑损、血脉瘤阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾度
HPLC,记录色谱图。以峰面积积分值的对数A(μg)为横坐标，进样量为织坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，黄芪甲者对
照品在0.1-2.0mg*mL范围内线性关系良好。
湿困之肝炎。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。
2.5精密度试验
黄芪常用于高血压病、缺血性心脏病、银屑病、糖尿病、慢性鼻炎、急性肾小球肾炎、幽门螺旋杆菌阳性胃溃疡、骨质疏松等。《本草经疏》记载：“功能实表，有表邪者勿用；能助气，气实者勿用；能内塞，补不足，胸服气闭间，肠胃有积滞者勿用；能补阳，阳盛阴虚者忌之；上焦热盛，下焦虚寒者忌之；病人多怒，肝气不和者勿服；痘疮血分热甚者禁用。“本文用高效液相法对黄芪注射液中的黄芪甲苷的进行了含量测定
1仪器与试药
1.1仪器：EASEATECH高效液相色谱仪（广州逸海科技有限公可)；XP52R欧洲瑞德威分析天平(深圳市怡华新电子有限公司)；18L PHS-3C(杭州科晓化工仪器设备有限公司);HH-4A数显电子恒温揽拌水浴锅(江苏省金坛市宏华仪器厂）；BT赛多利斯电子天平（北京五洲东方科技发展有限公司)；上海通微蒸发光散射检测器 ELSD-UM5000(上海通微分析技术有限公司);SHB-(II)循环水式真空泵（(上海楚柏实验室设备有限公司)
1.2试药：乙睛（天津市康科德科技有限公司）、乙醇（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、磷酸（武汉市铭业科技发展有限公司）、冰醋酸（上海思域化工科技有限公司)、三乙胺（东莞市乔科化学有限公司）、甲醇（天津市康科德科技有限公司）、磷酸氢二铵（武汉市
精密吸取黄民甲者对照品落液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.95%。结果表明，本实验精密度良好
2.6重现性试验
分别称取同批黄芪注射液样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.93%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7稳定性试验
取供试品溶液，分别在0.0.5小时，1.0小时，1.5小时，2.0小时， 4.0小时精密吸取供试品溶液注人液相色谱仪，进样测定，供试品黄芪甲苷峰面积积分值的RSD为0.93%。结果表明黄芪甲苷在4.0小时内稳定
2.8回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的黄芪甲昔对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液.测定含量(同时测定样品含量)计算回收率。6 次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.95%。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定黄芪注射液三批样品中黄芪甲昔
的含量，结果三批样品的含量分别为0.12mg/ml、0.13mg/ml、0.12
伟琪博星生物科技有限公司)。
2含量测定
2.1色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypersil BDS C18色谱柱(4.6*250+5u);以乙睛为流动相A，以水为流动相B.按下表进行梯度洗脱，漂移管温度为105摄氏度；载气流速为3.0ml/min:敏大借数为2。理论板数按黄芪甲者峰计算应不得低于2000
时间（分钟) 030
流动相A(%）
20→40
流动相B(%） 8060
2.2供试品溶液的制备
取黄芪注射液适量，用水饱和过的正丁醇振摇提取四次，每次 20毫升，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20毫升，弃去氨液，正丁醇层水浴蒸干，加5毫升水溶解，放凉，通过D101大孔树脂柱（柱高12厘米），以50毫升水洗脱，继用70%乙醇80毫升洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，渣用甲醇溶解，转移至5毫升容量瓶，用甲醇定容，摇匀，过0.45μm的滤膜，即得。
2.3对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品约50mg：置10毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每 1mL溶液中含黄芪甲0.5mg)。
2.4标准曲线的制备
制备浓度为0.1mg*mL-*,0.2mg*mL-*,0.4mg*mL-",0.6mg*mL-" 0.8mg
*mL-′,1.2mgomL-*,1.4mgomL-*,1.6mgomL-1
*mL-',1.0mg
1.8mgomL-、2.0mgomL-*的对照品溶液，分别精密吸取10μL注人
mg/ml。
3讨论
分别考察乙腈和水梯度洗脱，水(0.4%磷酸：0.7%三乙胺)-乙腊(77：23)，水-乙腊（60:40),乙腈-甲醇水-冰醋酸(18:12 70：0.1)，水-甲醇磷酸（30:70:0.01)，水-甲醇-乙腈(50:20: 30)，甲醇-水-三乙胺(70：300.2)不同比例的流动相，结果以乙睛和水梯度洗脱为流动相.供试品各峰分离效果最好，故选用乙睛和水榜度洗脱为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定黄芪注射液含量的方法。黄芪注射液中黄芪甲苷的含量应不少于 0.1mg/ml。
参考文献
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