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2010 No.5 Serial No.218
China Brewing
Analysis and Examination
邻苯二甲醛(OPA)法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量
白利，王瑞雪，王际辉，钱方*
（大连工业大学生物与食品科学工程学院，辽宁大连116034）
摘要：研究用邻苯二甲醛(OPA)法测定蛋黄粉中胆固醇含量。结果表明，OPA法变异系数为2.89%，精密度高，回收率较高，适于胆
固醇含录的快速测定，具有操作简单、方法稳定等特点。同时，用甲醇氯仿法提取胆固醇，方法准确、简单易行，关键调：邻苯二甲醛法；胆固醇：测定
中图分类号：0656.3
文献标识码：A
文章编号：02545071(2010)05016202
Rapid determination of the cholesterol concentration in yolk powder by o-phthaldialdehyde (OPA) method
BAI Li, WANG Ruixue, WANG Jihui, QIAN Fang*
(SchoolofBioandFoodTechnologyDalianPo/vtechnicUniversity.Dalian116034.China)
Abstract: Contents of cholesterol of egg yolk powder was determined by o-phthalalehpyde (OPA) method. The results indicated that the variation coefficient of the method is 2.89%, which has high precision and recovery. The method is simple and stable, and it is suitable for rapid determination
of cholesterol., Extraction of cholesterol by methanol-chloroform is accurate and feasible. Key words: o-phthaldialdebyde; cholesterol; determination
目前，胆固醇的定量分析方法主要有比色法、酶法、气相色谱法和高效液相色谱法。其中酶法技术含量较高，特异性较强，而气相色谱和高效液相色谱法需特殊设备，均难以推广使用"。相比之下，比色法较为快速方便。比色法测定胆固醇含量包括高氯酸显色法、邻苯二甲醛比色法、磷硫铁比色法和硫酸铁铵比色法内。本实验主要研究用部
苯二甲醛法快速准确测定蛋黄粉中的胆固醇含量。 1实验原理
邻苯二甲醛显色法反应即羟醛反应法：邻苯二甲醛有两个醛基(-CHO)，胆固醇的C3位上有一个羟基，二者在浓硫酸作用下产生紫红色物质，在波长550nm处有最大吸收值胃。
2材料和方法 2.1主要试剂
胆固醇：沈阳试剂五厂：邻苯二甲醛：金坛金丰化工有限公司：蛋黄粉：大连生化制品有限公司；冰乙酸：天津天
河化学试剂厂；浓硫酸：公主岭化学试剂厂。 2.2试剂配制
胆固醇标准液（1mg/mL)：胆固醇100mg溶于冰乙酸定容至100mL。
邻苯二甲醛试剂(OPA)：邻苯二甲醛10mg，溶于冰乙
酸定容至100mL，避光保存。
蛋黄粉溶液(10mg/mL)：(1)水溶法：0.1000g蛋黄粉溶解于10mL热水。(2)有机溶剂法：0.0100g蛋黄粉用1mL甲醇氯仿溶液（甲醇：氯仿=2:1)溶解过滤，滤液进行分析检测。 2.3实验仪器
722型光栅分光光度计：山东高密彩虹分析仪器有限
收稿期：2009-12-29
公司。
2.4实验方法
2.4.1胆固醇标准曲线的制作
按表1进行胆固醇标准曲线的绘制。
OPA法测定胆固醇的标准曲线绘制的设计表1
Table 1, Standard curve of cholesterol measured by OPA
胆固醇标准液/uL 冰乙酸/μL OPA/mL 浓磺酸/mL
0 400
10 390
30 370
50 350
1.5 1.0
70 330
90 310
溶液配料时边加浓硫酸边振荡，充分混匀，室温静置 10min，测ODso
2.4.2显色时间的确定
胆固醇标准液60μL，加340μL冰乙酸、1.5mLOPA、 1mLH,SO。混合均匀，分别静置5min、10min、15min、20min、 25min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min 后，取样测定ODss0
2.4.3OPA方法的精密度实验
取蛋黄粉0.100g，水溶法配制10mg/mL蛋黄粉液。平行样品4份，每份3个平行，每组测12例(n=12)。
取蛋粉液100μL，加冰乙酸300uL，OPA1.5mL、浓硫酸1.0mL。充分振荡，混匀，室温静置10min，测定ODsoc 2.4.4OPA方法的回收率实验
取4号样做回收率实验，加入胆固醇标准液，进行胆固醇含量测定。具体操作见表2。
在实验中，充分振荡，混匀，室温静置10min，测定
作者简介：白利(1982-)男，河北人，硕士研究生，研究方向为食品生物技术；钱方*，教授，通讯作者。