研究报告
中
国酿造
2012年第31卷第1期
总第238期
辣自菜中分离含内源性质粒的魏斯氏菌及其鉴定
金红星，杨希寅，成文玉
（河北工业大学化工学院，天津300130）
·77·
摘要；为了探讨魏斯氏菌在辣白菜中起的作用和获得与明串珠菌相关乳酸细菌的质粒，从辣白菜中分离了魏斯氏菌。辣白菜是朝鲜民族的传统食品，在低温条件下大白菜经过乳酸细菌发酵而成的。将辣白菜汁液均匀涂布在含2%(m/v)CaCO,的MRS平板上，30℃ 恒温培养箱中培养24h~36h，在中国内地首次分离获得了踪斯氏菌。通过对该菌进行镜检、生理生化特性检测以及16SrDNA序列的系统发育树分析确定其分类地位，结果表明其属于Weissella cibaria，命名为kimshi006，在NCBI.l:的登录号为HM369807。这一魏斯氏
菌菌株含有2条内源性质粒，其人小分别为人约3000bp和8000bp。关键调：辣白菜；魏斯氏菌；内源性质粒；分离；鉴定
中图分类号：TS201.3
文献标识码：A
文章编号：02545071(2012)01~007703
IsolationandidentificationofWeissellacontainingendogenousplasmidsfromkimchi
JIN Hongxing, YANG Xiyin, CHENG Wenyu
(School of Chemical Engineering and Technology,Hebei University of Technology,Tianjin 300130)
Abstract: To research the function of Weissella in kimchi and obtain plasmid of lactic acid bacteria related to Leuconostoc, Weissella was isolated from kimchi. Kimchi is the nation's traditional food in Korean, which is prepared by lactic acid fermentation of Chinese cabbage at low temperature. Weissella was first time isolated in mainland China after plating the kimchi juice on MRS medium containing 2%(m/v) CaCO, and cultured in incu-bator at 30°C for 24h~36h. Microscopic examination, physiological and biochemical characteristics detection and 16S rDNA sequence analysis of the phylogenetic tree were used for its identification. The results showed that the strain belongs to Weissella cibaria and we named it kimshio06 and ob-tained the number HM369807 on NCBL Two endogenous plasmids were identified in the strain and the sizes are about 3000bp and 8000bp, respectively. Key words:kimchi; Weissella; endogenous plasmids; isolation; identification
辣白菜是朝鲜民族的传统食品，在低温条件下大白菜经过乳酸细菌发酵而成的。辣白菜进行二段发酵，首先洗净的大白菜用盐水没泡，然后腌渍好的大白菜中添加辣椒面、大蒜、生姜、芝麻等调味品继续发酵。普通韩国成年人平均每天消耗50g~200g辣白菜。明串珠菌是辣白菜发酵过程的早期起主要作用的微生物，辣白菜的发酵后期因乳杆菌的作用而变得发酸。近年来韩国人在辣白菜中又发现了新的乳酸细菌——魏斯氏菌。
COLLINSMD等(2提出了魏斯氏菌属（Weissella）的名称。GenBank的分类学数据库中有14种魏斯氏菌，其中W.hani和W.salipiscis没有公开报道，认为W.cibaria 和W.kimchii是同一物种。文献报道的还有W.beninensis3 和W.fabaria。
为了了解魏斯氏菌在辣白菜中所起的作用和获得与明串珠菌相关乳酸细菌的质粒，本研究从天津辣白菜中分
离了魏斯氏菌。 1材料与方法
1.1材料与培养基
材料来源：在天津市自制的辣白菜汁液。
培养基：MRS培养基、精氨酸水解培养基、葡聚糖生成培养基、PY基础培养基、糖类发酵试验基础培养基。
收稿日期：2011-09-30
1.2魏斯氏菌的分离纯化与镜检
将辣白菜发酵液作梯度稀释，涂布于MRS固体培养基，置30℃恒温培养箱中培养，挑取单菌落在MRS固体培养基上划线，纯化2次。进行革兰氏染色、镜检，选取革兰
氏阳性的菌株。 1.3生理生化鉴定
生理生化实验方法参照《伯杰氏细菌鉴定手册》第八版闪和《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》围。测定其糖醇利用、产酸产气、生长温度、耐盐试验、过氧化氧酶试验、精氨
酸水解和葡聚糖生成。 1.416SrDNA测序
魏斯氏菌的总DNA提取参照KIMJ等口的方法。以总 DNA为模板，通过PCR扩增菌株的16SrRNA基因序列。PCR 的正向引物为5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3，反向引物为5-GGCTACCTTGTTACGACTT-3'，由上海生工合成。PCR反应体系为50μL，其中buffer（含MgCl）5uL， 2.5mmol/LdNTP2μL，模板2μL，10μmol/L的引物各2μL， TaqDNA聚合酶（鼎国)5μL，去离子水32μL。PCR扩增条件为预变性95℃、10min95℃、60s,50℃、60s，72℃、90s，30 个循环：最后72℃延伸10min。PCR产物送北京华大测序。 1.5系统发育树的构建
基金项目：河北省自然科学基金项日(No.C2011202112)
作者简介：金红星（1968-），男，副教投，研究方向为乳酸细南生理学。