SN ICS 65.020.20 CCS B 16
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 2507—2022
代替SN/T 2507—2010和SN/T 4081—2014
短体线虫属（中国种类）检疫鉴定方法Detection and Identification of Pratylenchus spp.(Chinese species)Filipjev,1936
2022-07-07发布
2023-02-01实施
发 布
中华人民共和国海关总署
SN/T 2507—2022
短体线虫属（中国种类）检疫鉴定方法
1 范围
本文件规定了短体线虫属（中国种类）的检疫鉴定方法。本文件适用于短体线虫属种类的检疫鉴定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成苯文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，反该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样方法SN/T 4643 线虫标本采集分离保存规范
3 术语与定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 符号和缩略语
以下符号和缩略语适用于本文件。n————虫体数量；L———虫体体长（mm）；a——体长/最大体宽；
b——体长/虫体前端至食道与肠连接处的距离；6'——体长/虫体前端至食道腺先端的距离；c——体长/尾长；c′———尾长/肛门处体宽；St.——口针长度（μm）；Sp.———交合刺长度（μm）；Gub.———引带长度（μm）；
V————虫体前端至阴门的距离×100/体长；T————泄殖腔口至精巢末端的距离×100/体长。
5 短体线虫属基本信息
学名：Pratylenchus，Filipjev，1939 英方名：Root-lesion nematode
SN/T 2507-2022
分类地位：线虫门（Namatoda），色矛纲（Chromadorea），色矛亚纲（Chromadoria），小杆目（Rhabo-litida），垫刃亚目（Tylenchina），垫刃总科（Tylenchoidea），短体线虫科（Pratylenchidae）、短体线虫属Pratylenchus Filipjev,1939。
传播途径：寄主植物根、带虫土壤和介质土是远距离传播的主要途径。
截止2019年底，全球报道短体线虫属共计112种，文献记述充分的有84种，为有效种类，文献记述不充分的种类有28种，为待定种类。短体线虫属名录列表参见附录 A.1，84种短体线虫的寄主范围和地理分布相关信息参见附录A.2。
6 方法原理
短体线虫属线虫是植物迁移性内寄生蠕虫形（虫卵除外）线虫，主要在根部皮层、块茎（如马铃薯块茎）外皮层以下、土生种实（如花生钉或壳）皮层或土层附近的芽胚皮层取食，引起取食部位组织坏死腐烂。在植物组织上最明显的症状表现就是在所取食的部位存在明显的病斑。病斑呈淡黄色至褐色，延伸和组织纤维方向平行。危害严重时根全部呈现黄褐色、块茎或种实上布满小的褐色斑或结痂、或突起的小疣。寄主植物受害严重时，会表现出根丛生或比正常植株的根系减少，地上部分表现为矮化、叶褪绿（黄化）、叶片或果实变小，叶片和结果稀疏等症状。从寄主植物根系、块茎、地下种实及周围土壤或介质中分离获得线虫后，在显微镜下观察并鉴定。短体线虫属有效种中，仅有20多种雄虫普遍，因此，分类上以雌虫的形态特征为主要依据，以雄虫的形态特征为辅助依据，结合寄主范围、地理分布和传播途径，以及DNA条形码分子鉴定方法，判定线虫的分类归属。
将在我国有3次报道且亦有较详细描述的，或仅在我国有报道的短体线虫新种确认为检疫意义上的中国种类，截止2019年底，确认检疫意义上的中国种类的短体线虫属共计14种，包括：草地短体线虫Pratylenchus pratensis、艾伦短体线虫P.allemi、艾草短体线虫P.artemsiae、最短尾短体线虫P.brachywrus、咖啡短体线虫P.coffeae、刻痕短体线虫P.crenatus、六裂短体线虫P.hexincisus、卢斯短体线虫 P.loosi、落选短体线虫P.neglectus、拟玉米短体线虫P.parazeae、穿刺短体线虫P.pene trans、斯克里布纳短体线虫P.scribneri、桑尼短体线虫P.thornei和伤残短体线虫P.vulmus。
7 仪器、器具和主要试剂
7.1 仪器
PCR 仪、冷藏箱、体视显微镜（10×以上，具透射光源）、生物显微镜（100×以上）、超低温冰箱、离心机、电泳仪、凝胶成像系统、高压灭菌锅、微波炉、烘箱、加热板、水浴锅。7.2 器具
自封袋、钟面皿或培养皿、载玻片、盖玻片、网筛（20目、100目、500目）、烧杯（500 mL、1000 mL）、漏斗、漏斗架、浅盘、乳胶管或硅胶管、止水夹、小镊子、剪刀、医用解剖刀、线虫滤纸或卫生纸、酒精灯、干燥器、试管、线虫挑针、PCR管、24孔细胞培养板、可调式微量移液器（2μL～1000μL）及相应的吸头。7.3 主要试剂
除特别规定外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682相关规定。包括：福尔马林（4%甲醛）、指甲油、纯甘油、无水乙醇、石蜡、蔗糖、核酸胶染料（GelRed）、2×Tar MasterMix 预混液、蛋白酶K（20 mg/mL）、Taq DNA聚合酶、DL2000 Marker、冰乙酸（C-HO2）、三羟甲基氨基甲烷（Tris-HCD、乙二胺四乙酸二钠（Na：EDTA·2HO）、无RNase无菌水和灭菌双蒸水。