NY/T 3346-2019
马铃薯抗青枯病鉴定技术规程
Technical code of practice for evaluation of potato resistance to bacterial wilt
2019-09-01 实施
2019-01-17发布
前 言
本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。
本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。
本标准起草单位;中国农业科学院蔬菜花卉研究所。
6 材料育苗
育苗包括试管苗培养和盆栽育苗，见附录C。
7 接种体制备
7.1 青枯病菌分离、纯化
按照 SN/T 1135.9的规定进行青枯病菌的分离、纯化、鉴定和保存。
7.2 接种体繁殖、制备
选择马铃薯青枯菌的优势小种生理小种3号作为接种病原菌，小种鉴定方法参见附录D。用接种环蘸取菌液在TTC培养基平板上划线，在 28℃恒温培养箱中培养 48h后，挑取边缘乳白色、中间部位淡红色，流动性好的毒性单菌落，移入青枯菌液体培养基中，28℃ 200r/min振荡培养16h～18h;加适量无菌水配成接种的病菌悬浮液。
8 鉴定方法
8.1 试管苗接种鉴定
8.1.1 接种时期
在组培苗培养基中培养3周的试管苗。
8.1.2 接种浓度
约1×108CFU/ mL（ODoo=0.1）。
8.1.3 接种方法
采用伤根接种法。选用生长一致的马铃薯试管苗3盒，试管苗繁殖见 C.1.3，使用手术刀片于无菌环境下围绕植株根部在培养基划"#"伤根，随后每盒试管苗注入接种菌液5 mL。每份材料设3个重复，每重复不少于10株苗。
8. 1.4 接种后管理
接种后置于（28±1）℃的光照培养箱内，在每日光照16h、黑暗 8h条件下培养。
8.1.5 病情调查
8.1.5.1 调查方法
从接种后第 6 d 开始，每隔 2 d 观察验定材料的发病情况，待感病对照达到相应病级后，调查每份鉴定材料接种株发病情况，根据表1中的病害症状描述，逐份材料逐株进行调查，记载接种株病情级别，按式（1）计算病情指数（disease index，DI）。