NY/T 3622-2020
马铃薯抗马铃薯Y病毒病鉴定技术规程
Technical code of practice for evaluation of potato resistance to Potato virus Y
2020-11-01实施
2020-07-27发布
5.2 接种体制备
5.2.1 病毒分离、纯化
马铃薯Y病毒的分离、纯化与保存见附录B.
5.2.2 接种体繁殖、制备
针对育种目的，选择 PVY对应株系或混合株系作为接种毒源，PVY 株系鉴定按照 GB/T 36816的规定执行。取少量马铃薯Y病毒供试株系的冻干叶或在繁殖寄主上保存的病叶，加少量 PBS缓冲液在碾钵中碾碎，人工摩擦接种在PVY繁殖寄主幼苗的叶片上，置25℃～28℃的防虫温室内培养约2周后采收病叶。1g鲜病叶加10 mL的0.03 mol/L.PBS缓冲液（pH7.0）.研磨后双层纱布过滤或3000 r/min 离心15 min.其滤液或上清液即为接种悬浮液，用于人工接种。
5.3 接种
5.3.1 接种时期
幼苗生长至4叶~6叶期。
5.3.2 接种浓度
病叶/PBS缓冲液（pH 7.0）为1/10（w/V），配制方法同
5.2.2。
5.3.3 接种方法
接种前1d给植株浇足水分，并将马铃薯幼苗黑暗处理 24h。接种方法主要有以下 2种∶
a） 摩擦接种法;接种前用肥皂将手洗净，选取植株上部3 片复叶的项叶∶在叶面上均匀撒布1薄层600 目金网砂，然后用一只手掌托起叶片，另一只手用手指施取病毒接种悬潭液沿叶脉按愿序轻轻摩感接种.用力程度以接种叶片表面无严重损伤为度。该方法宜用于少量材料鉴定。
b） 咳收接种法∶将混有金钢砂的马管费 Y载群接种悬浮液用略雾检距植株5cT左有处喷射接种。
接种时噬雾枪压力为1.5 kg/crm²～2 kg/cm²。该方法宜用于大量材料鉴定。接种后，具清惠轻好冲洗接种叶片表面的残留物。3 d一5d后重复按种1次。鉴定材料随机排列，每份材料设3个重复，每重复不少于10 株苗。
5.3.4 接种后管理
接种后置于白天混度 24℃一30℃、夜间不低于20℃的防虫日光湿室里培养，常规光照，正常栽培管理。
6 病情调查
6.1 调查方法
接种后25d～30 d 调查每份鉴定材料接种株发病情况，根据表1中的病害症状描述，逐份材料逐株进行调查，记载接种株病情级别，按式（1）计算病情指数（Discase Index，DI）。
6.2 病情级别划分
植株病情分级及其对应的症状描述见表1。