ICS 03.120.10 A 00
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T35656—2017
化学分析方法验证确认和内部质量控制
实施指南 报告定性结果的方法 Guideline for verification and validation of chemical analysis method and internal quality control-Method on reporting qualitative test reports
2018-07-01实施
2017-12-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T35656—2017
目 次
前言引言
范围规范性引用文件 3 术语和定义总则
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2
4.
4.1 化学分析方法分类 4.2 报告定性结果方法的特点 4.3 报告定性结果方法验证确认的要求 4.4 限度测试 4.5 定性广谱筛查方法 4.6 编写标准操作程序对方法性能指标验证和确认的要求 5.1 灵敏度 5.2 选择性和特异性 5.3 阅值 5.4 假阴性率和假阳性率 5.5 检出限 6内部质量控制附录A（资料性附录） 方法的阈值计算示例附录B（资料性附录） 灵敏度特异性能指标确认示例附录C（资料性附录）干扰试验及消除干扰的示例附录D（资料性附录）方法阈值确定示例· 附录E（资料性附录）t检验的临界值表参考文献
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5
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22
23 GB/T35656—2017
前言
本标准与下列标准构成化学分析实验室检测方法验证确认以及建立和实施内部质量控制体系系列标准：
GB/T 32464 化学分析实验室内部质量控制利用控制图核查分析系统： GB/T32465 化学分析方法验证确认和内部质量控制要求； GB/T 32467 化学分析方法验证确认和内部质量控制 术语和定义； GB/T 33464 化学分析标准操作程序编写与使用指南； GB/T35655 化学分析方法验证确认和内部质量控制实施指南 色谱分析； GB/T 35657 化学分析方法验证确认和内部质量控制实施指南 基于样品消解的金属组分分析。
-
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国质量监督重点产品检验方法标准化技术委员会（SAC/TC374)提出并归口。 本标准起草单位：四川省产品质量监督检验检测院、中检华纳（北京）质量技术中心有限公司、四川
理工学院、中检联盟（北京)质检技术研究院有限公司、四川省食品药品检验检测院、安徽省产品质量监督检验研究院、北京颖泰嘉和分析技术有限公司、成都宏亿实业集团有限公司。
本标准主要起草人：郑卫东、张丽萍、胡丹、付大友、谭文渊、黄瑛、余晓琴、林森、范志刚、王俊芳、
林吉柏、丁媛丽、林红、王玥
I GB/T35656—2017
引言
报告定性结果的检测是化学分析中重要的一类分析形式，其特点表现为检测结果以定性的方式报告。定性结果的表述分为两种情况。一是直接使用定性检测的方法，得出并报告定性的结果；二是使用定量的方法检测，得出连续的定量结果，使用特定的方法将定量结果转化为定性结果，最后报告定性结果。二元分类测试是定量分析和定性分析中的特殊情况，检出/未检出试验（presence/absencetest)或阳性/阴性试验（positive/negativetest）是二元分类测试的两种典型情况。限度测试（limittest）和定性广谱筛查［qualitativeBroad-band（non-targeted）analytescreening即为使用二元分类测试技术的两种典型报告定性结果的方法。
实验室要正确掌握和使用定性结果表述方法，除了按照GB/T32465一2015中的规定，实施方法验证确认和建立内部质量控制体系以外，还应关注这类方法在检测和报告结果方面的特殊性
Ⅱ GB/T35656—2017
化学分析方法验证确认和内部质量控制
实施指南报告定性结果的方法
1范围
本标准给出了化学分析中报告定性结果方法验证确认和实验室内部质量控制的要求和实施指南。 本标准适用于化学分析中报告定性结果方法验证确认和实验室内部质量控制。 本标准不适用于采样。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注期的引用文件，仅注目期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 GB/T 14666 分析化学术语 GB/T 19000 质量管理体系 基础和术语 GB/T27025—2008 检测和校准实验室能力的通用要求 GB/T32465—2015 化学分析方法验证确认和内部质量控制要求 GB/T 32467 化学分析方法验证确认和内部质量控制 术语及定义 GB/T 33464 化学分析标准操作程序编写与使用指南 ISO 11843-1 检测能力第1部分：术语和定义（Capabilityofdetection一Part1：Termsanddefi
nitions)
3术语和定义
GB/T6379.1、GB/T14666、GB/T19000、GB/T32467和ISO11843-1界定的以及下列术语和定
义适用于本文件。 3.1
阳性预测值 positivepredictivevalues;PPV 检测所得到的真实阳性结果与总阳性结果之比。 注：总阳性结果包括真实阳性结果和假阳性结果之和。阳性预测值=真阳性结果/（真阳性结果十假阳性结果）。
3.2
阴性预测值 negativepredictivevalues;NPV 检测所得到的真实阴性结果与总阴性结果之比。 注：总阴性结果包括真实阴性结果和假阴性结果之和。阴性预测值=真阴性结果/（真阴性结果十假阴性结果）。
3.3
定性广谱筛查 qualitative broad-band(non-targeted)analyte screening 使用特定的方法，同时检测多个目标组分，将检测结果与参考数据比较，得出“有”或者“无”目标组
分的结论
1 GB/T35656—2017
4总则
4.1 化学分析方法分类 4.1.1第一类，定量分析方法。主要特征，生成的结果为连续的数字。 4.1.2第二类，报告定性结果的方法，分为以下两种：
a）报告范围的方法，生成的结果为一个范围； b）与关注水平比较报告结果的方法，生成的结果可能是连续数字，但这些连续结果只是一个中
间结果，而不是最终报告的结果。最终报告的结果是设定一个关注水平，将定量的中间结果转换为一个定性结果。
示例：在一系列连续结果中，设定一个关注水平，使用统计学方法计算阅值，大于或等于阅值的样品，报告为大于或等于关
注水平（或报告为阳性结果），小于阅值的样品，报告为小于关注水平（或报告为阴性结果）。 4.1.3第三类，结构分析方法。主要特征是确定某个待测物的特性。 4.2 报告定性结果方法的特点
报告定性结果方法几乎均为将定量分析结果通过检出限或最小检测浓度以及阈值转化为定性结果。报告的典型结果为“检出”“未检出”、“有”“无”、“是”“不是”、“大于或等于”“小于”某一特定值。 4.3报告定性结果方法验证确认的要求 4.3.1实验室选择使用报告定性结果方法应满足GB/T27025一2008中5.4.2和GB/T32465一2015 中第4章的要求。 4.3.2如果实验室选用的报告定性结果方法为定量分析方法，首先应按照GB/T32465一2015中第5章的要求，对所采用的方法，确定验证或确认性能指标的具体内容，实施全面的验证或确认。 4.3.3定量分析方法被作为报告定性结果的方法使用时，在验证或确认中，尤其应重视灵敏度、选择性/特异性、准确度。这类方法特有的性能指标为阈值、假阳性率、假阴性率、最低检测浓度等 4.3.4不管是验证还是确认，实验室都应考察上述性能指标，给出可靠的结果。其中对准确度和耐用性的验证或确认，与GB/T32465一2015中7.3、7.4、7.9的要求一致。 4.4限度测试 4.4.1限度测试是报告定性结果方法的一种特殊类型，其目的是确定待测物是否低于或超过特定的关注水平。此关注水平可以是检出限，结果报告为检出/未检出；也可以是某个特定的值，结果报告为符合/不符合，或小于或等于关注水平/大于关注水平 4.4.2验证或确认新的限度测试方法，其性能指标至少应包括特异性、准确度、阈值、假阳性率、假阴性率、最低检测浓度。尤其应在目标组分特定浓度水平上，确定方法的精密度 4.4.3一般情况下，用限度测试作为筛查方法，假阴性率应控制在5%以内，假阳性率应控制在15% 以内。 4.4.4限度测试中常用的方法是设置阈值（在设定的置信水平上），只有超过该阈值的测试结果才需要进一步分析证实。对于通过仪器响应值转换为结果的限度测试，可设定一个特定的浓度或含量关注水平，多次独立重复检测后，计算关注水平的平均值和标准偏差，阅值即为此关注水平的置信下限。阅值计算方法见5.3，具体计算示例参见附录A。 4.4.5对于酶联免疫吸附检测（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）类方法，除了获得该方法的值以外，还应使用统计学方法，确定空白响应值与國值之间是否存在显著性差异。作为满足要求的方法，其空白响应值与阈值应有显著性差异。
2 GB/T35656—2017
4.5定性广谱筛查方法
4.5.1对于要获得准确结论的检测，筛查发现的任何阳性结果都应使用诸如LC-MS/MS或GC-MS/ MS等特定的分析平台进行进一步确证。 4.5.2验证或确认这类方法，评估的性能特征应包括选择性、假阳性率、假阴性率、最低检测浓度， 4.5.3通常可根据样品类型、基质特点和目标组分特点，对样品和目标组分进行适当的分组，从中选择有代表性的样品、基质和目标组分，评估性能指标 4.5.4当方法的适用范围中新增一种检测目标组分时，应首先确定是否属于已经过验证确认的某类目标组分。如果新增检测目标组分与方法适用范围中现有某类检测目标组分的化学特性相近或相同，此时验证确认的目的是确定方法是否适用于该检测目标组分，因此允许进行部分性能指标考察，即选取少量代表基质，通过多次独立重复加标实验，获取回收率数据即可。 4.5.5如果要在定性广谱筛查方法中新增的目标分析物为实验室另一个方法（已经过验证确认）的检测对象，且这种方法的样品前处理步骤与广谱定性筛查方法相同，则不需要复杂的性能指标考察，只需要经过完整的检测过程，适当的评估检测程序即可 4.5.6当方法应用于某种特殊的新的基质，应对方法进行全面的性能指标评估 4.5.7如果主要仪器发生了变更，则至少应重新对方法的最低检测浓度进行评估。 4.5.8定性广谱筛查方法的假阴性率应低于5%。 4.6 编写标准操作程序 4.6.1 应根据方法验证或确认的结果，结合内部质量控制的要求编制标准操作程序。 4.6.2按照GB/T33464的要求编制标准操作程序，用于指导检测工作。
5对方法性能指标验证和确认的要求
5.1灵敏度 5.1.1对于要使用校准直线进行定量的分析方法，灵敏度可用校准直线（y二a十ba）中的斜率b计算。 对不能使用校准直线进行定量的方法，则采用经验的方法获得灵敏度，即分析含有不同浓度待测物的样品进行计算
注：利用校准直线计算定量分析方法灵敏度，参见附录B。 5.1.2对于设定关注水平的阔值的检测，灵敏度的计算同5.1.1。 5.1.3对于二元分类测试，灵敏度等于真阳性结果与假阴性结果加真阳性结果之和的比值，用式（1）计算：
灵敏度三[真阳性结果/（真阳性结果十假阴性结果）×100%
....(1)
还可用阳性预测值和阴性预测值来表征二元分类测试方法的灵敏度。用式（2）和式（3)分别计算：
阳性预测值三L真阳性结果/（真阳性结果十假阳性结果）」×100% 阴性预测值三L真阴性结果/（真阴性结果十假阴性结果）×100%
.....(2) ........(3)
计算二元分类测试方法灵敏度的方法参见B.2。 5.2选择性和特异性 5.2.1定量分析方法的验证或确认中，通常只评估选择性，而较少研究特异性。使用定量分析方法作为报告定性结果的方法，应按照GB/T32465一2015中7.7的要求评估方法的选择性。 5.2.2对于二元分类测试方法验证或确认，特异性为方法能正确识别真阴性的能力。用式（4)计算：
特异性=（确认为阴性的样本数/全部真阴性样本数）×100%
.....(4)
3 GB/T35656—2017
计算特异性的方法参见B.1、B.2.考察选择性的方法参见附录C。 示例：医院使用一种方法诊断病人，在被预先准确确定未患病的100个人中，94人被该医院准确确定为阴性，则该医院此
种诊断方法的特异性为94%。
5.3阅值 5.3.1应根据检测目的设定关注水平，在此基础上考察方法的阅值。阅值的计算参见附录D。 5.3.2通过添加标准溶液，或者通过其他途径获得浓度或含量等于关注水平的样品，在重复性条件下，使用验证或确认的方法独立重复检测样品，至少独立重复检测6次。 5.3.3假定关注水平为a，各次独立检测结果为α；，按式（5）～式（7)分别计算独立重复检测结果的平均值、标准偏差和平均值的标准偏差：
+x2... +x,
r =
·(5)
n
)
(6)
7
S= = S
( 7)
/n
式中：
独立检测结果平均值；独立检测结果，i=1,2,3，，n；独立重复检测次数；标准偏差；平均值的标准偏差。
;
vuonge
7 S
9
S-
设定置信概率P=95%（也可以设定置信概率P=99%），显著性水平α=0.05，自由度f=n-1。 查附录E给出的双尾t分布表，得到t。)的值
此时：
C
阅值=—t。（f）·S
.(8)
在检测工作中，当检测结果小于阈值，则样品中目标组分含量或浓度小于关注水平；当检测结果大于或等于阅值，目标组分含量或浓度可能大于或等于关注水平，需要进一步复查确证。 5.4假阴性率和假阳性率 5.4.1报告定性结果的方法中，不管是哪一类方法，都应确认假阴性率和假阳性率，将假阴性率和假阳性率控制在本标准规定的范围内。 5.4.2使用被验证或确认的方法检测样本，统计阴性结果和阳性结果，再用其他可靠的方法分别确认假阴性结果和假阳性结果。用式（9)和式（10)分别计算：
假阳性率二（假阳性数/确认的总阴性数）X100% 假阴性率=（假阴性数/确认的总阳性数）×100%
....(9) ...(10)
5.4.3对于限度测试，方法的假阴性率应小于5%，假阳性率应小于15%；而对于为确定某种化合物在特定水平上是否存在的免疫学方法，假阴性率应小于5%，假阳性率应小于10%。 5.4.4通常，至少应在三个浓度或含量水平上考察报告定性结果分析方法的假阴性率和假阳性率，这三个水平分别是低于确定的國值、等于和高于确定的國值。实验室最好用已经过验证确认的方法与拟验证或确认的方法比对：如果比对不可行，则可用分析加标样和空白样的方式代替。
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