Q/SY
中国石油天然气集团有限公司企业标准
Q/SY17111—2019
（2019年确认）
油田化学剂、钻井液生物毒性分级及检测方法发光细菌法
Grading and determination of the biotoxicity of chemicals and driming fluids-luminescent bacteria test
2019—12—05实施
2019—12—05发布
中国石油天然气集团有限公司 发布 Q/SY17111—2019
再版说明
本标准于2019年复审，复审结论为继续有效。 本标准在发市复审结论的同时，按照《关于调整集团公司企业标准编号规则的通知》（中油质
[2016】434号】的要求对标准编号进行了修改。
本次印刷与前一版相比，技术内容与前版完全一致。 本次仅对标准的封面进行了如下修改：
标准编号由Q/SY111—2007修改为Q/SY17111—2019，一标准发布单位按照企业公章，修改为“中国石油天然气集团有限公司” Q/SY17111—2019
目 次
前言
范围规范性引用文件·.· 术语和定义原理
2
..
4 5 生物毒性分级 6 生物毒性检测方法
....... ...
.-...
样品的采集，包装。运输与保存···· 附录A（规范性附录） 发光 细菌毒性检测报告格式附录B（规范性附录） 相关系数厂检验表
7
S
0 Q/SY17111—2019
前 言
本标准的附录A附录B为规范性附录。 本标准由中国石油天然气股份有限公司质量安全环保部提出。 本标准由中国石油天然气集团有限公司油田化学剂及材料专业标准化直属工作组归口。 本标准起草单位：中国石油天然气股份有限公司环境监测总站、石油工业油田化学剂质量监督检
验中心。
本标准主要起草人：李秀珍、于晓丽、曹治中，杜卫东。李就莲、范俊欣。
S I
I Q/SY17111—2019
油田化学剂、钻井液生物毒性分级及检测方法 发光细菌法
1范围
本标准规定了陆上油日使用的消用化学剂，钻井液生物毒性分级及检测方法。 本标准适用于陆上油田便用的水溶性消用化学剂、钻非液生物毒性分级及检测：不适用于对细菌
有抑制作用的油田化学剂的测定。 2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新最本。儿是不注 开期的引用文件。 工最新版本适用手本标准。
GB/T5005—2001钻手液料规池 GB/T6679—2003固体化 正品采样通川 GB/T6680—2003液体化工 产品采样通刚国家环保局《水和废水临训分新方法（第四版
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。 生物毒性分级biotoxicitygrading 根据被测物与生物体群接触后导致生物体群死亡的程度，划分生物性的不同等级。本标准是根
3.1
据在一定条件下，导致发光菌的相对发光度被抑制至一半时样品液的浓度不同，来划分生物毒性的不同等级。本方法与其他生物测试方法的测试结果不完全一对！ 3.2
生物毒性检测biotoxicitytesting 通过将生物体在试验条件下施加污染物的影响来判定试验结 苦果的一种方法。
3.3
半有效浓度（ECsm） half effective concentration 发光细菌在一定条件下与被训住品接15mi层，发开细菌的相对发光度被抑制一半时样品液
的浓度。 4原理
根据发光细菌的相对发光度随样品毒性总体浓度的增高而呈线性降低的特性：测定发光细菌在接
触被测样品15min后的相对发光度，得出油田化学剂及钻井液的毒性等级。 5生物毒性分级
生物毒性分级见表1
1 Q/SY17111—2019
表1油田化学剂及钻井液生物毒性分级
单位：mg/L
发光细菌ECso
生物毒性等级
剧毒重毒中毒微毒无毒
<1 1~100 101~1000 1001~25000 >25000
生物毒性检测方法 6.1试剂测试生物和标准物质 6.1.1试剂：
6
3%氯化钠溶液：称氯化钠（化学纯，以下同）30g于烧杯中加蒸馏水至1000mL，溶解后备用。 2.5%氯化钠溶液：称氯化针 2.5g于试剂瓶内 加蒸馅水至100mL 溶解后2℃5℃保存。
6.1.2测试生物：本试验所用测试生物为： 明亮发光杆菌T小种（Photobacteriumphosphoreum T，sPP.）冻干粉，安颜瓶包 ： 每瓶0.5g，在2℃5% C保存，有效保存 期为6个月。 6.1.3标准物质：十二烷基硫酸钠 6.2仪器 6.2.1生物发光光度计：DXY 生物毒性试信 或其他同类产品 6.2.2 高速搅拌器：3000r/min12000r/min。 6.2.3冰箱。 6.2.4试验材料：
测试样品管：2mL或5mL；注射器：1mL：定量加液瓶：250mL；可调微量注射器：2uL～20ml 移液管：2mL5mL10ml 试剂瓶：100mL，200ml 量筒：50mL100mL 烧杯：1000mL 保温瓶：天平：感量0.01g；高搅杯：秒表；测试管架等。
6.3测定前的准备 6.3.1环境条件：实验室必须干净，无污染，避免人为的影响因素，室温控制在20℃～25C。同批样品在测定过程中要求温度波动不超过土1℃。所有测试器血及试剂、溶液测前1h均置于控温的测试室内。 6.3.2稀释液：所有稀释液均为3%氯化钠溶液。 6.3.3 样品液制备： 2 Q/SY17111—2019
6.3.3.1水溶性油田化学剂样品液制备：
a）实验液的配制：将固体的油由化学剂，按常规使用浓度，用蒸留水配制成实验液。 b）按体积比取1份油田化学剂实验液加入9份稀释液，用转速为1100r/min土300r/min搅拌器
搅拌30min静置60min后，取中层混悬液并将其稀释成（通过密度换算所得的）不同浓度的样品液（10°mg/L105mg/L，10mg/L***10mg/L1mg/L）。测定样品液的稀释浓度以接近相对发光度为50%时为宜。
6.3.3.2钻井液添加剂样品液制备：
a）基浆的配制：取350ml靠馅水于转速为11000r/min土300r/min高搅杯中，边搅拌边加人
17.50g钻井液用膨润土。影润要求符合GB/T5005规定。搅拌20min期间至少中断两次，以刮下粘附在客精照上的厨润上。然后转移到密闭的玻璃容器中，在25℃土3℃下老化24h。
b）实验浆的配制：取上注集浆在高追提拌量搅的回时，加人1.g～10.0g钻井液添加剂（加
样量视样品的习惯用量前定，搅拌20min，期间至少中断两次，以刮下粘附在容器壁上的样品。然后立即转移指叫的玻璃容器中，在25℃土3℃下老化24h。记下加样量。
c）实验浆的稀释：按体积比取1份钻井液添加剂实验浆加人9份稀释液，用1100r/min±300r/
min搅拌器搅拌30min 静登hin后， 取中层混是液并将其稀释成（通过密度换算所得的）不同浓度的样品液 Cume/l.umg 1.10'mg/L.10mg/L，1mg/L)。样品的稀释浓度以接近相对发光度为50% 时为宜。
6.3.3.3钻井液样品液制 备：现场采集或实验室内配制的钻井液样品液的制备按6.3.3.1执行。 6.3.4发光菌冻干菌剂复苏 从2℃~5%℃冰箱最山合有0.5g发光细画东干粉的安颜瓶和2.5%氯化钠溶液，置于有冰块的保温瓶，用1.冷的2.5%氯化钠容液注人已开口的冻十粉安颜瓶充分混合。 2min后，菌剂即复苏发光，备用。 6.3.5仪器的预热和调零 接通生物发光光度计电源，预热15min，调零，备用 6.3.6检验发光细菌冻干粉质量：取2mL测试管1
加2mL3%氯化钠，加10mL复苏发光菌液，
盖上瓶塞，用手颠倒5次以达均匀。拔去瓶牢，将该管放人生物发光 光度计测试舱内测试，若发光量立即显示600mV以上，此瓶冻干粉可用于测试，否则更换冻干粉。 6.4测定 6.4.1测试管的排列：于测试管架上按下列顺序排刻测试管。 排放置样品测试管（简称样品管），后排放置对照测试管（简称CK管）同一浓度的样品重复测定3次。 6.4.2加3%氯化钠溶液 用是量 加液瓶给母十cK管加2m3%氧化纳溶液。 6.4.3加样品液：测定前用1mol /LNaOH和1mol/LHCl调节样品液的pH值至6.5~8.5。用 2mL移液管给每个样品管加2mL样品液。 6.4.4加复苏菌液：在发光菌液复苏稳定（约半小时）后，在测试管架上从左到右，按样品管一CK 管一样品管一CK管顺序， 用散量注射器汇确暖取10山复苏菌液，送一加人各管，盖上瓶塞：用手颠倒5次：拔出瓶塞，放回原位。每管在加菌液的同时须精确计时到秒，即样品与发光菌反应起始时间。15min后，记作各管反应终止时间 6.4.5测试与记录：当样品管和CK管内的液体与发光菌反应15min后，按各管原来加菌液的先后顺序，立即将测试管放人仪器测试抢，并读取记录仪器显示的各自发光量（以毫伏表示）。 6.4.6数据处理： 6.4.6.1回归方程法。
a）计算样品相对发光度（%），见式（1）。
T= E显×100
(1) 3
Eck Q/SY17111—2019
式中： T 相对发光度，%； E祥品 样品管发光量，mV： Eck- 对照管发光量，mV。 b）计算样品相对发光度平均值（%），见式（2）。
:
T=ITT
(2)
3
式中： T 相对发光度平均值 T TaT 一个样品浓度三次重复的相对发光度，%。 e）计算EC值，见式（3）求出一元一次线性回归方程的c（截距）b（斜率、回归系数）和r
（相关系数），并列出方程：
ab·C样品
..(3)
查表（见附录B）。查相关系数显著水平（P值），检验所求值的显著水平。若P<0.05，则所求相关方程成立，并将T=50代人月程（3D，则E%=（50一）76 求出样品的ECs值。 6.4.6.2绘制曲线法：若检验相关方程不 成立 刚按曲线法求出EC值。以浓度（C）为横坐标，相对发光度（T）为纵坐标， 箭制（ T曲线： 用C 一1由线，找出与样品相对发光度对应的浓度值。 6.4.7 检测报告格式见附录 7样品的采集、包装、运输与保存 7.1样品的采集与包装 7.1.1油田化学剂：按每种消国化学制产品的标准方法取样。当产品标准没有规定取样方法时，固体产品按GB/T6679-2003执行，液体产品按GB/T668D2 北行 7.1.2钻井液：要求在振动筛后取样。取样时钻井液应处十正常循环状态 为了保证样品的代表性，应在不同的时间分别取样，称为分样，每个分样为500mL。将每次取样的分样合并。混勺、缩分，形成最终检验样品。每个样品至少由6
mL获取分样的时间间隔为
数计代
整个循环周期除以设计的分样个教。钻井液样品必领用高密度墨之奢容器包装，整个包装必须被样品充满，不应留有空间。 7.2标识
所有样品容器上应贴标识。标明样品名称，采样时间，采样电点、 #样方式、采样数量、采样人。生产者或使用者等。 7.3样品的运输与保存
按国家环保局《水和废水监测分析方法》（第四版）第3章水样的采集和保存执行。样品应在 24h内送达实验室；流体样品要求在温度为2℃～5℃的冰箱中冷藏保存，固体样品要保存在阴凉处，并在样品送达实验室后24h内开始试验。
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