第30卷，第11期 2010年11月
光谱学与光谱分析 Spectroscopy and Spectral Analysis
Vol. 30,No. 11,pp2941-2944
November, 2010
基于傅里叶变换红外光谱和聚类分析的真菌鉴别
柴阿丽，李金萍，石延霞，谢学文，李宝聚”
中国农业科学院葆菜花卉研究所，北京100081
摘要傅里叶变换衰减全反射红外光谱法(FTIR-ATR)应用于微生物的快速鉴定及分类是近儿年发展起来的一门新型技术。该文应用FTIR-ATR光谱法与案类分析方法相结合对重要的植物病原真菌进行鉴别。在PDA玻璃纸平板上培养了来自14个属的17株真菌，用FTIR-ATR光谱法测其红外光谱，获得了分辨率高、重现性好的真菌红外谱图，分析主要吸收峰的归属，确定了1800~1485，1485～1185与1185～900 cm"1三个分析灵敏区，并在此基础上进行了系统聚类分析，使所有测试菌株都得到正确归类。结果表明，傅
里叶变换红外光谱技术具有快速、准确、易操作等优点，将成为微生物研究领域的一个重要工具。关键词傅里叶变换红外光谱；真菌；衰减全反射；象类分析；鉴别
中图分类号：S642.2
引言
文献标识码：A
DOl; 10. 3964/j. issn. 1000-0593(2010)11-2941-04
菌进行鉴别，提出了一种不同于传统真菌鉴别和分类的新方法，探讨了FTIR与ATR结合应用于微生物种类鉴别的潜在作用。
植物病原真菌（Fungi)种类紫多，分布广泛，是引起小
麦、水稻、大豆、蔬菜、花卉等大田作物和园艺作物病害的重要病原物，还有些属能引起人类和一些动物皮肤病等。病害的发生经常造成作物大面积减产和粮食品质下降，因此，快速、准确地对病原菌进行鉴定是研究其多样性与有效防治中不可缺少的一个重要环节。
传统的真菌分类与鉴别主要采用显微镜技术、生理生化方法，或二者相结合的方法。这些方法虽然有效，但操作复杂、费时费力，有时结果的准确度也不是十分理想("]，真菌鉴定依据的有机物特征越多，越容易区分相似种，结果也更为可靠（(），傅里叶变换红外光谱（frouriertransforminfrared spectroscopy，FTIR)分辨率高，不仅可以反映微生物细胞壁、细胞膜、细胞质基至细胞核中的蛋白质、多糖、脂质、核酸及其大分子、水分等混合成分的分子振动信息，而且能敏锐地探测分子基团及其周围环境的变化，为微生物种类和微生物状态的鉴别提供了一个完美的工具]。目前，该技术已成功应用于细菌、真菌、酵母菌、放线菌等微生物的识别+1)，以及不同营养条件下微生物膜结构和组成成分变化的检测等方面(8.9)
本文采用固体培养基培养植物病原真菌，并应用衰减全反射傅里叶变换红外光谱(FTIR-ATR)和聚类分析方法对真收璃日期：2010-03-09，修订日期：2010-06-12
1材料与方法 1.1菌株来源
实验选择了对作物危害严重的来自14个属的17个真菌菌株，分别隶属于7个科，6个目（表1)，所用菌株全部来源于中国农业科学院蔬案花卉研究所染病综防课题组，南株已
上交并保存至中国农业微生物菌种保藏管理中心。 1.2真蕾培养
玻璃纸平板培养真菌()：首先将试管斜面菌种转人马铃薯能帮糖琼脂（potatodextroseagar，PDA）培养基.上进行活化，于26℃培养3～5d；然后将高温混热火菌后的玻璃纸平铺到PDA培养基平板上，再将活化后的病原菌用无菌接种钩转到覆好玻璃纸的平板上面，每皿转人3mm见方的小菌块2块，26℃条件下培养7～15d，待菌丝充足，在无菌操作工作台中，用灭好菌的小铁勺将培养好的菌丝刮下，用锅箱纸包好。
菌丝干燥研磨：将锡箔纸包好的菌丝用真空冷冻干燥机（ThermoSavant公司，Moduly-D冷冻腔）进行干燥，50 C，冻干24h。取出后加人液氮，把病原菌研成粉末，装入2 mLEP管中，然后置于一20C保存备用。
基金项目：国家（863计划)项目(2006AA10Z210)，国家自然科学基金项目(60768002)和农业部园艺作物遗传改良重点开效实验室项目资助
作者简介：荣阿丽，女，1983年生，中国农业科学院炭染花卉研究所博士研究生
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