ICS11. 040. 30 CCSC30
中华人民共和国医药行业标准
YY/T1989—2025
人类辅助生殖技术用医疗器械
辅助生殖用液中蔗糖、葡萄糖、
海藻糖、果糖的测定
Medicaldevicesforhumanassistedreproductivetechnology—
Determinationofsucrose,glucose,trehaloseandfructoseinhuman
assistedreproductivemedia
2025-10-30发布
2026-11-01实施
国家药品监督管理局 发 布
YY/T1989—2025
目 次
前言 ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 ……………………………………………………………………………………………… 4 方法一 葡萄糖、果糖含量测定方法 …………………………………………………………………… 5 方法二 葡萄糖、蔗糖、果糖和海藻糖的测定 ………………………………………………………… Ⅲ 1 1 1 1 3
Ⅰ
YY/T1989—2025
前 言
本文件按照 GB/T1. 1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由国家药品监督管理局提出。 本文件由人类辅助生殖技术用医疗器械标准化技术归口单位归口。 本文件起草单位:中国食品药品检定研究院、深圳市药品检验研究院(深圳市医疗器械检测中心)、 湖南省药品检验检测研究院、山东威高瑞生医疗器械有限公司、东蕴医疗科技(上海)有限公司、浙江明 悦医疗科技有限公司、深圳韦拓生物科技有限公司。 本文件主 要 起 草 人:黄 元 礼、彭 俊、刘 磅、柯 林 楠、韩 倩 倩、田 燕、尹 航、韩 晓 萌、林 小 贞、王 书 晗、 周淑梅。
Ⅲ
YY/T1989—2025
人类辅助生殖技术用医疗器械
辅助生殖用液中蔗糖、葡萄糖、
海藻糖、果糖的测定
1 范围
本文件描述了用高效液相色谱法测定辅助生殖用液中蔗糖、葡萄糖、海藻糖和果糖含量的方法。
本文件方法一适用于不含蔗糖或海藻糖的辅助生殖用液;方法二适用于含有蔗糖、葡萄糖、海藻糖、
果糖中一种或几种的辅助生殖用液。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法
YY/T0995 人类辅助生殖技术用医疗器械 术语和定义
3 术语和定义
YY/T0995界定的术语和定义适用于本文件。
4 方法一 葡萄糖、果糖含量测定方法
4.
1 原理
试样经过高效液相色谱柱分离,用示差折光检测器或蒸发光散射检测器或电喷雾检测器检测,外标
法进行定量。
4. 2 试剂和材料 4. 2. 1 水,GB/T6682规定的一级水。 4. 2. 2 硫酸,优级纯。 4. 2. 3 葡萄糖对照品(C6H12O6,CAS号:50-99-7),纯度>99%,经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质或其他有证标准物质。 4. 2. 4 果糖对照品(C6H12O6,CAS号:57-48-7),纯度>99%,经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质或其他有证标准物质。 4. 2. 5 磺基水杨酸,分析纯。 4. 2. 6 超滤离心管,30kDa。 4. 3 试剂配制
4%磺基水杨酸:称取4. 0g磺基水杨酸,用水溶解并定容至100mL。 1
YY/T1989—2025
4.
4 对照品溶液配制
4.1 葡萄糖对照品储备液
精密称取葡萄糖对照品约50mg,置10mL 量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度
为5mg/mL的储备液,置于0 ℃~4 ℃密封保存。
4. 4. 2 葡萄糖对照品工作液 分别精密量取葡萄糖对照品储备液200μL、400μL、800μL、1600μL、2000μL 于10 mL 量瓶 中,加水 定 容 至 刻 度,制 成 质 量 浓 度 分 别 为 0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、 1. 0mg/mL的对照品系列工作液,临用现配。 注:若需要,根据供试品实际情况调整线性范围。
4.3 果糖对照品储备液
精密称取果糖对照品约50mg,置10mL 量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为
5mg/mL的储备液,置于0 ℃~4 ℃密封保存。
4.4 果糖对照品工作液 分别精密量取果糖对照品储备液200μL、400μL、800μL、1600μL、2000μL于10mL量瓶中,加 水定容至刻度,制成质量浓度分别为0. 1mg/mL、0. 2mg/mL、0. 4mg/mL、0. 8mg/mL、1. 0mg/mL的 对照品系列工作液,临用现配。 注:若需要,根据供试品实际情况调整线性范围。 4. 5 仪器和设备 4. 5. 1 高效液相色谱仪:配示差折光检测器或蒸发光散射检测器或电喷雾检测器。 4. 5. 2 涡旋振荡器。 4. 5. 3 电热鼓风干燥箱。 4. 5. 4 电子天平:精度为0. 0001g。 4. 5. 5 高速离心机:≥9500g。 4. 5. 6 水系微孔过滤器:0. 45μm。 4. 5. 7 常用玻璃量器:A 级。 4. 5. 8 移液器:标称容量为1000μL、200μL。 4. 6 供试品溶液制备 移取一定量样品,加水稀释至合适浓度,经过0. 45μm 微孔滤膜至样品瓶中,供液相色谱分析。 样品中如有蛋白质,可取样品1mL,加1mL4%磺基水杨酸,混匀后,≥9500g 离心10min,取上 清液用水稀释至合适浓度,经过0. 45μm 微孔滤膜至样品瓶中,作为待测液;也可采用 30kDa规格的超 滤管超滤样品后,作为待测液,供液相色谱分析。 4. 7 分析步骤
4.
1 参考色谱条件
参考色谱条件如下:
a) 色谱柱:H 型磺化交联聚苯乙烯聚合物基质色谱柱或离子排阻色谱柱;
2
YY/T1989—2025
b) 流动相:稀硫酸(取0. 1015mL硫酸,加水定容至1L); c) 流动相流速:0. 4mL/min; d) 柱温:65 ℃; e) 进样量:20μL; f) 示差折光检测器条件:温度40 ℃; g) 蒸发光散射检测器条件:漂移管温度80 ℃~90 ℃,氮气压力350kPa,撞击器关或2. 1mL/min, 不分流; h) 电喷雾检测器条件:雾化温度35 ℃。 4. 7. 2 标准曲线的制作 将葡萄糖、果糖对照品系列工作液依次按上述色谱条件上机测定,记录色谱图峰面积或峰高,以峰 面积或峰高作为纵坐标,以对照品系列工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线,外标法检测。示差折光检 测器和电喷雾检测器采用线性方程绘制标准曲线;蒸发光散射检测器采用幂函数方程绘制标准曲线。 线性相关系数r 应不低于0. 995。
4.
3 供试品溶液的测定
将供试品溶液注入高效液相色谱仪中,记录峰面积或峰高,从标准曲线中查得供试品溶液中葡萄
糖、果糖的浓度。
4.
8 结果计算与表示
4.
1 结果计算
辅助生殖用液中糖的含量按式(1)计算: X =X1 ×f 式中: X ———辅助生殖用液中糖的含量,单位为毫克每毫升(mg/mL); X1———供试品溶液中糖的含量,单位为毫克每毫升(mg/mL); f ———供试品溶液的稀释倍数。 …………………………(1)
4.
2 结果表示
取两次平行测定结果的算术平均值作为测定结果。
4.
3 精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
5 方法二 葡萄糖、蔗糖、果糖和海藻糖的测定
5.
1 原理
试样经过高效液相色谱柱分离,用示差折光检测器或蒸发光散射检测器或电喷雾检测器检测,外标
法进行定量。
5.
2 试剂和材料
5.
1 水,为 GB/T6682规定的一级水。
3
YY/T1989—2025
5. 2. 2 乙腈,色谱纯。 5. 2. 3 葡萄糖对照品(C6H12O6,CAS号:50-99-7),纯度>99%,经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质或其他有证标准物质。 5. 2. 4 蔗糖对照品(C12H22O11,CAS号:57-50-1),纯度>99%,经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质或其他有证标准物质。 5. 2. 5 果糖对照品(C6H12O6,CAS号:57-48-7),纯度>99%,经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质或其他有证标准物质。 5. 2. 6 海藻糖对照品(C12H22O11,CAS号:99-20-7),纯度>99%,经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质或其他有证标准物质。 5. 3 标准溶液配制 5. 3. 1 糖混合标准储备液(10mg/mL):分别精密称取蔗糖、葡萄糖、海藻糖、果糖对照品约500mg,置 50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为10mg/mL的混合标准储备液,0℃~ 4 ℃密封保存。 5.2 对照品系列工作液:分别精密量取糖混合标准储备液50μL、100μL、200μL、300μL、500μL于 10mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,制成质量浓度分别为0. 05 mg/mL、0. 1 mg/mL、0. 2 mg/mL、 0. 3mg/mL、0. 5mg/mL的对照品系列工作液,临用现配。 注:若需要,根据供试品实际情况调整线性范围 。 5. 4 仪器和设备 同4. 5。 5. 5 供试品溶液的制备 移取一定量样品,加水稀释至合适浓度,经过0. 45μm 微孔滤膜至样品瓶中,供液相色谱分析。 样品中如有蛋白质,取样品1mL,加1mL流动相,混匀后,≥9500g 离心10min,取上清液用流 动相稀释至合适浓度,经过0. 45μm 微孔滤膜至样品瓶中,供液相色谱分析。 5. 6 参考色谱条件 参考色谱条件如下: a) 色谱柱:酰胺基柱或糖分析柱; b) 流动相:乙腈∶水=75∶25(体积比),若使用酰胺基柱时需要调节pH=10; c) 流动相流速:1. 0mL/min; d) 柱温:40 ℃; e) 进样量:20μL; f) 示差折光检测器条件:温度40 ℃; g) 蒸发光散射检测器条件:漂移管温度80 ℃~90 ℃,氮气压力350kPa,撞击器关或2. 1mL/min, 不分流; h) 电喷雾检测器条件:雾化温度35 ℃。 5. 7 标准曲线的制作 将葡萄糖、果糖、蔗糖和海藻糖对照品系列工作液依次按上述色谱条件上机测定,记录色谱图峰面 积或峰高,以峰面积或峰高作为纵坐标,以对照品系列工作液浓度为横坐标绘制标准曲线,外标法检测。 示差折光检测器和电喷雾检测器采用线性方程绘制标准曲线,蒸发光散射检测器采用幂函数方程绘制 4
YY/T1989—2025
标准曲线。线性相关系数r 应不低于0.
995。
5.
8 供试品溶液的测定
将供试品溶液按上述色谱条件注入高效液相色谱仪中,记录峰面积或峰高,外标法定量供试品溶液
中糖的浓度。
5.
9 结果计算与表示
5.
1 结果计算
辅助生殖用液中糖的含量按式(2)计算: C =C1 ×f 式中: C ———辅助生殖用液中糖的含量,单位为毫克每毫升(mg/mL); C1———供试品溶液中糖的含量,单位为毫克每毫升(mg/mL); f ———供试品溶液的稀释倍数。 …………………………(2)
5.
2 结果表示
取两次平行测定结果的算术平均值作为测定结果。
5.
3 精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
5