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高效液相色谱法测定护肝片中绿原酸含量的研究
准艳
（哈尔滨三乐生物工程有限公司，黑龙江哈尔滨150000）
摘要：本文用高效液相法对护肝片中的绿原酸的造行了含量测定。固定相为：依利特hypersilBDSC18色语柱(4.6*250*5u），乙睛一水-磷酸(12：88:0.01)为流动相，检测波长为327nm;螺原酸在10~110μg"mL-范围内呈良好的线性关系。绿原酸的平均回收率为 99.5%。本法简便、重现性好、回收率高，可用于护肝片中螺原酸的含量测定。
关键词：护肝片；绿原酸；测定
护肝片其有疏肝理气.健消食的功效。护肝片常用于慢性肝
纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，绿原酸对照品在
炎及早期肝硬化等。护肝片由柴胡、菌陈、板蓝根、五味子、猪胆粉、
10-110μg*mL-范围内线性关系良好。
绿豆组成。菌陈为护肝片主要成分之一。菌陈是一种菊科植物，别名为芦蓄、白蓄、松毛艾、田耐里等。菌陈蓝经冬不死，春则因陈根而生，故名因陈或菌陈。至夏其苗则变为离，故亦称菌陈蒿。菌陈具有保护肝功能解热，抗炎，降血脂，促进胆汁分泌，降血压,降血脂，抗凝血，改善微循环扩冠等作用-。《本草再新》记载：“泻火，平肝，化痰，止咳发汗，利湿，消肿，疗疮火诸毒。“菌陈含有对-聚伞花素、芦烯、松油醇-4、马鞭草酮、萘、绿原酸、苎烯、桉油精、α-藻烯、茨烯、菌陈炔酮、丁香酚、异丁香酚、龙脑、滨蓄素等。本文用高效液相法对护肝片中的绿原酸的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：ELGA超纯水器（上海润锐仪器科技有限公司)； SK3300HP功率可调台式超声波清洗器（上海垒固仪器有限公司）； 10L-50L大型旋转蒸发仪(北京赛美思仪器设备有限公司)； PHS-550智能型台式酸度计(杭州陆恒生物科技有限公司)；赛多利斯PM2.5分析天平MSA2.7S-0CE-DM（广州市深华生物技术有限公司);BTT小型阵列式紫外可见分光光度计(必达泰克光电科技（上海)有限公司);JMLABOTW系列通用水浴槽（优莱博技术（北京)有限公司);SY-8100高效液相色谱仪(北京北分瑞利分析仪器(集团)公司)。
1.2试药：乙睛（济南市云期化工有限公司）、三乙胺（济南市云郑化工有限公司）、磷酸氢二铵（淄博德聪化工销售有限公司）、甲醇（济南鸿鑫化工有限公司）、冰醋酸（济南鸿鑫化工有限公司）、磷酸（淄博德聪化工销售有限公司）
2含量测定
2.1色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypernilBDSC18色谱柱(4.6*250+5u);乙睛-水-磷酸(12：88:0.01）为流动相；检测波长为327nm；流速 1.0mL·min-"：柱温：30℃。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于 2000。
2.2供试品溶液的制备
取护肝片适量，去除包衣，研细，精密称定至容量瓶内，加适量 50%甲醇超声10分钟，放凉，用流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。
2.3对照品落液的制备
精密称取绿原酸对照品约5mg，置10毫升棕色容量瓶中，用 50%甲醇超声波振荡溶解并用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得(每1mL溶液中含绿原酸0.05mg)。
2.4阴性干扰试验：按方中比例取除菌陈以外的原辅料，接照制备工艺方法制成阴性制剂.按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与绿原酸相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5标准曲线的制备
制备浓度为 10 μg*mL-",20μg*mL-",30 μg*mL-",40 μg*mL-"-Tu, 8 rl06"-Tu, 8 rl08'-Tu. # rloz-Tu, rl09°--Tu, 8l0S 100μg*mL^、110μg*mL-的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC,记录色谱图。以峰面积积分值A(μg)为横坐标，进样量为
2.6精密度试验
精密吸取绿原酸对照品溶液10L重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.88%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7重现性试验
分别称取同批护肝片样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.83%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8稳定性试验
取供试品溶液，分别在0.10分钟.20分钟，30分钟.40分钟精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品绿原酸峰面积积分值的RSD为0.62%。结果表明绿原酸至少在40分钟内稳定。
2.9回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的绿原酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量(同时测定样品含量),计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.68%。
2.10样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定护肝片三批样品中绿原酸的含量，结果三批样品的含量分别为0.82mg/g.0.83mg/g、0.82mg/g
3讨论
分别考察乙睛-水-磷酸(12：88：0.01)乙晴-1%冰酷酸溶液(22：78)，乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸(18:12:70：0.1)，乙水(54：46)(每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠 0.17%磷酸调pH3.0)不同比例的流动相,结果以乙睛-水-磷酸(12：88：0.01)为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙水-磷酸(12：88:0.01)为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定护肝片含量的方法。护肝片中绿原酸的含量应不少于
0.8mg/g
参考文献
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