专论与综述
中国酿造
微生物蜜醇酯酶的研究进展
任楠楠12王晓辉12迟乃玉12乔慧12张庆芳12*
2017年第36卷第6期
总第304期
（1.大连大学生命科学与技术学院辽宁大连1166222.辽宁省海洋微生物工程技术研究中心辽宁大连116622）
·9.
摘要猫醇酯醇(EC3.1.1.13)作为一种高活性的生物催化剂在医疗检测、食品、造纸工业及环保等领域具有极其广泛的应用价值。该文综述了留醇醋酶的微生物来源、分离纯化、克隆表达、三维结构与应用方面的研究进展以期为笛醇酯酶的研究开发及产业化应用奠定基础。
关键词留醇醋酶微生物克隆表达分离纯化应用
中图分类号Q556.1
文章编号：0254-5071(2017)06-0009-05
doi:10.11882/j.issn.02545071.2017.06.002
Research advance in sterol esterase from microorganisms REN Nannan'2, WANG Xiaohui, CHI Naiyu'2, QIAO Hui'2, ZHANG Qingfang'2e(I.College ofLife Science and Biotechnology, Dalian University, Dalian J I6622, China,
2.Liaoning Technology of Marine Microbiological Engineering Research Center, Dalian I I6622, China)
Abstract Sterol esterase (EC 3.1.1.13), as a high activity biocatalyst, has extremely broad application value in medical detection, food, paper industry and environmental protection, ete. The research advance of microorganism's origin, separation and purification, cloning and expression, threedimen-sional structure and application of sterol esterase were summarized, which might lay foundation for research, development and industrialization appli-cation of sterol esterase
Key words sterol esterase; microorganism; cloning and expression; separation and purification; application
笛醇酯酶(EC3.1.1.13)又称为胆固醇酯酶广泛存在于生物体内(包括人在内的高等动物与微生物)")。留醇酯酶可在水相条件下催化留醇酯水解生成留醇和脂肪酸,在有机溶剂中通过酯化或醋交换进行催化醋合成反应(2)。备醇醋酶作为一种重要的酶制剂可帮助机体消化吸收油脂类营养物质因其与人体脂质代谢及胆固醇吸收有关留醇酯酶是检测血液中总胆固醇含量的重要酶制剂之一[3]。还有解决机械制浆造纸工艺中树脂障碍问题的潜力间,由于其广泛的底物特异性和稳定性在食品、医药、纸浆工业及化工行业等领域发挥重要作用3。自然界中微生物生产的留醇酯酶具有生产成本低、工艺简单、不易污染、不受季节影响及易形成规模化生产等优点已成为目前研究热点。本文概述了留醇酯酶的微生物来源介绍了酶制剂的分离纯化、基因的克隆表达和蛋白的三维结构方面的研究进展并对其应用前景进行了展望，旨在全面深入地
了解留醇酯为其理论研究与产业化应用提供参考 1葡醇酯酶的微生物来源
对微生物留醇酯酶的首次报道来自UWAJIMAT等的研究之后陆续有科研人员在微生物中检测到留醇酯酶活性。据报道多种微生物都能分泌留醇酯酶在细菌中
收稿日期2017-05-12
约几十种菌能产生留醇酯酶,有假单胞菌属(Pseudomonas sp.）、不动杆菌属（Acinetobactersp.）、金黄杆菌属（Chry seobacteriumsp.）、蜡样芽孢杆菌属（Bacillussp.）、红球菌属（Rhodococcussp.）和伯克霍尔德氏菌属（Burkholderia sp.）等放线菌的链霉菌属(Streptomycessp.）的菌株也能分泌留醇酯酶沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)CT149 分泌的留醇酯酶专一水解胆固醇亚油酸酯并在Hela细胞中成功表达围滇菌中的镰刀菌属（Fusariumsp.）、木霉属（Trichodermasp.）和线嘴壳菌属（Ophiostomasp.）等的菌株均可产留醇酯酶。不同的微生物留醇酯酶都易形成多聚体但其结构特点及底物特异性等差异较大。目前对产留醇酯酶菌株的筛选主要采用以留醇酯为唯一碳源的方法，同时以产物中的酸为依据添加指示剂进行筛选。研究表明微生物源的留醇酯酶底物范围广稳定性较好且能通过诱导提高酶产量纯化工艺也相对简单"所以目前主
要针对各种微生物来源的留醇酯酶进行研究和利用0。 1.1细菌来源的笛醇酯酶
UWAJIMAT等于1975年首次报道的具有水解留醇酯活性的酶由荧光假单胞菌(P.fluorescens)KY395分泌分子质量为129ku该酶也具有脂肪酶活性但对长链留
基金项目国家高技术研究发展计划863计划项目（2007AA021306）作者简介任楠楠(1992-）女硕士研究生研究方向为微生物与酶工程*通讯作者张庆芳（1965-）女教授博士研究方向为微生物与酶工程
?1994-2018 China Academic Journal Electronic Publishing Housc, All rights reserved. http://wvw.cnki.net ICS 65.020.01
CCS B 05 15
内
蒙 古 自 治 区 地 方 标 准
DB15/T 3859—2025
优质羊草产地环境要求
Environmental requirements for production area of high-quality
leymus chinensis
2025-01-22 发布
2025-02-22 实施
内蒙古自治区市场监督管理局 发 布
DB15/T 3859—2025
前
言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。
本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。
本文件起草单位：内蒙古农业大学、中国农业科学院草原研究所、国家草业技术创新中心(筹)、内
蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古自治区质量和标准化研究院、内蒙古正时生态农业(集团)有限公司、
内蒙古科塔中科羊草种业有限公司、内蒙古自治区大青山自然保护区管理局呼和浩特分局万家沟管理
站、锡林郭勒盟检验检测中心、呼和浩特市审评查验中心、呼和浩特市园林建设服务中心、内蒙古自治
区乡村振兴促进中心、呼伦贝尔市住建事业发展中心、呼和浩特市植保植检中心。
本文件主要起草人：红梅、贺世龙、聂正英、叶贺、李广德、武振丹、武自念、赵巴音那木拉、王
娟、赵雅茹、殷国梅、赵逸雯、宫文龙、赵宝顺、乌尼尔、沈宏燕、王召明、刘亚玲、马彩娥、付娜娜、
温丽、刘利、包佳力、张宇琼、陆鑫、梁勇峰、杨艳婷、王晓燕、杨寿仓、赵晨光、张丽平、晔薷罕、
义拉勒特、诺民。
I
DB15/T 3859—2025
优质羊草产地环境要求
1 范围
本文件规定了优质羊草生产的适宜区域、气候条件、环境空气质量、灌溉水质量、土壤环境质量和
土壤肥力技术要点。
本文件适用于内蒙古东北部草原、西辽河流域、沿黄流域优质羊草生产。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB 9801 空气质量一氧化碳的测定非分散红外法
GB 11896 水质氯化物的测定硝酸银滴定法
GB/T 16489 水质硫化物的测定亚甲基蓝分光光度法
GB/T 17141 土壤质量铅、镉的测定石墨炉原子吸收分光光度法
GB/T 22105.1 土壤质量总汞、总砷、总铅的测定原子荧光法第 1 部分:土壤中总汞的测定
GB/T 22105.2 土壤质量总汞、总砷、总铅的测定原子荧光法第 2 部分:土壤中总砷的测定
HJ 347.2 水质粪大肠菌群的测定多管发酵法
HJ 482 环境空气二氧化硫的测定甲醛吸收-福玫瑰苯胺分光光度法
HJ 491 土壤和沉积物铜、锌、铅、镍、铬的测定火焰原子吸收分光光度法
HJ 479 环境空气氮氧化物（一氧化氮和二氧化氮）的测定盐酸萘乙二胺分光光度法
HJ 504 环境空气臭氧的测定靛蓝二磺酸钠分光光度法
HJ 618 环境空气 PM10 和 PM2.5 的测定重量法
HJ 694 水质汞、砷、硒、铋和锑的测定原子荧光法
HJ 776 水质 32 种元素的测定电感耦合等离子体发射光谱法
HJ 828 水质化学需氧量的测定重铬酸盐法
HJ 908 水质六价铬的测定流动注射-二苯碳酰二肼光度法
HJ 1147 水质 pH 值的测定电极法
NY/T 889 土壤速效钾和缓效钾含量的测定
NY/T 1121.6 土壤检测第 6 部分：土壤有机质的测定
NY/T 1121.7 土壤检测第 7 部分：土壤有效磷的测定
NY/T 1121.24 土壤检测第24部分：土壤全氮的测定自动定氮仪法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
1
DB15/T 3859—2025
优质羊草 high-quality leymuschinensis
禾本科赖草属多年生根茎型禾草，单播种植条件下干草粗蛋白（CP）含量≥7%，干草产量水浇地≥
400 kg/667 ㎡、旱地≥200 kg/667 ㎡。
4 适宜生产区域
根据羊草自然适宜性、区域生产条件及现状，羊草适宜生产区域分为东北部发展区、西辽河流域发
展区、沿黄流域发展区。
其中，东北部发展区包括呼伦贝尔市、兴安盟、锡林郭勒盟等；西辽河流域发展区包括通辽市和赤
峰市等；沿黄流域发展区包括鄂尔多斯市、巴彦淖尔市、乌兰察布市等。
5 气候条件
中温带干旱、半干旱大陆性季风气候；大于等于 10 ℃的年活动积温不小于 1200℃；年均降水量大
于 300 mm，小于 300 mm 地区需有灌溉条件；年平均日照时数不小于 2500 h；无霜期：85 d～155 d。
6 环境空气质量
空气质量应符合表1规定。
表1 环境空气质量指标
项目 时间 浓度限值（指标） 检测方法
二氧化硫（μg/m 3） 年平均 20～60 HJ 482
二氧化氮（μg/m 3） 年平均 40 HJ 479
一氧化碳（mg/m 3） 1 小时平均 10 GB 9801
臭氧（μg/m 3） 1 小时平均 160～200 HJ 504
颗粒物（粒径≤10μm）（μg/m 3） 年平均 40～70 HJ 618
颗粒物（粒径≤2.5μm）（μg/m 3） 年平均 15～35 HJ 618
7 灌溉水质量
灌溉水质量应符合表2规定。
2
DB15/T 3859—2025
表2 灌溉水质量指标
项目 浓度限值（指标） 检测方法
pH 值 6.50～8.40 HJ 1147
化学需氧量/(mg/L) ≤200 mg/L HJ 828
氯化物（以 Cl —记）/(mg/L) ≤350 mg/L GB 11896
硫化物（以 S —记）/(mg/L) ≤1 mg/L GB/T 16489
总铅/(mg/L) ≤0.2 mg/L HJ 776
总镉/(mg/L) ≤0.01 mg/L HJ 776
铬（六价）/(mg/L) ≤0.1 mg/L HJ 908
总汞/(mg/L) ≤0.001 mg/L HJ 694
总砷/(mg/L) ≤0.1 mg/L HJ 694
粪大肠杆菌群数/（MPN/L） ≤40000 MPN/L HJ 347.2
8 土壤环境质量
土壤环境重金属含量应符合表3规定。
表3 土壤环境质量指标
重金属项目 东北部草原 西辽河流域 沿黄流域 检测方法
镉/(mg/kg) <0.3 < 0.6 < 0.6 GB/T 17141
汞/(mg/kg) <2.4 < 3.4 < 3.4 GB/T 22105.1
砷/(mg/kg) <30 < 25 < 25 GB/T 22105.2
铅/(mg/kg) <120 < 170 < 170 GB/T 17141
铬/(mg/kg) <200 < 250 < 250 HJ 491
铜/(mg/kg) <100 < 100 < 100 HJ 491
9 土壤肥力要求
土壤基础肥力应符合表4规定。
3
DB15/T 3859—2025
表4 土壤肥力要求
项目 东北部草原 西辽河流域 沿黄流域 检测方法
有机质 g/kg ＞12 ＞10 ＞3 NY/T 1121.6
全氮 g/kg ＞1.0 ＞0.8 ＞0.8 NY/T 1121.24
有效磷 mg/kg ＞10 ＞5 ＞5 NY/T 1121.7
速效钾 mg/kg ＞80 ＞80 ＞80 NY/T 889
4