SN ICS 65.020.30 CCS B 41
中华人民共和国出入境检验疫行业标准
SN/T 5488—2022
猪衣原体病检疫技术规范Quarantine protocol for swine chlamydiosis
2022-07-07发布
2023-02-01实施
发 布
中华人民共和国海关总署
SN/T 5488—2022
猪衣原体病检疫技术规范
1 范围
本文件规定了猪衣原体病的临床和病理学诊断、病原分离和鉴定（含细胞分离、鸡胚分离、染色观察）和聚合酶链式反应的技术要求。
本文件适用猪衣原体病的监测和检疫。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088 出入境动物检疫采样GB 19489 实验室 生物安全通用要求
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
DMEM：杜尔贝科改良伊格尔培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）；FAM：蓝色羧基荧光素（Carboxy-fluorescein）；FITC：异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate）；PCR：聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction）；SPF：无特定病原（Specific-pathogen-free）。
5 临床诊断
5.1 临床症状及病理变化5.1.1 临床症状
猪衣原体病特征症状包括初产母猪突发流产、旱产、产死胎或弱仔；适繁母猪群不育空怀；种公猪繁育能力下降；仔猪腹泻、跛行或肺炎症状（见附录A）。5.1.2 病理变化
猪衣原体病特征病变包括流产胎儿全身皮肤出血，水肿，肝充血、出血和肿大，下颌淋巴结肿胀，间质性肺炎，关节滑膜炎和回肠末端淋巴结显著增生；种公猪尿道炎、睾丸炎、副睾炎；仔猪肺炎、肠炎、多发性关节炎、脑炎、浆膜炎和结膜炎（见附录B）。5.2 结果判定
根据特征性临床症状和病理变化可以做出初步预判。进一步确诊应采集样品进行实验室检测。
6 样品的采集
6.1 安全要求
按照GB/T18088确定采样动物的数量；涉及到病原分离培养的应在生物安全二级实验室中进行，样品的保存和废弃物应按照GB 19489要求进行。6.2 拭子样品
用无菌棉拭子采集鼻腔、眼眶、直肠或生殖道分泌物，放入1mL采样缓冲液的无菌试管中，加冰袋保鲜，于48h内送到实验室。6.3 组织样品
无菌采集死亡病猪或流产胎儿肺脏、扁桃体、心血、胸水、脑脊液、气管和关节积液等病料适量，用于病原分离的样品浸于足量的采样缓冲液中，加冰袋保鲜或低温冷冻，并于48h内送到实验室；用于切片的组织块应浸于足量的Bouin固定液中，24h内送至实验室。6.4 精液
无菌采集0.5mL以上的猪精液于离心管中，加冰袋保鲜，于48h内送到实验室。
7 病原分离和鉴定
7.1 细胞分离7.1.1 试剂和材料
敏感细胞（Hella 229细胞或McCoy细胞）、胎牛血清（无衣原体抗体）、DMEM培养液、庆大霉素、放线菌酮、链霉素、万古霉素、两性霉素B、庆大霉素、水（符合GB/T 6682中一级水的要求）、细胞培养瓶和细胞培养板。常见试剂配制按附录C执行。7.1.2 仪器和设备
CO2培养箱、Ⅱ级生物安全柜、细胞板离心机（水平转子，3000 r/min）。7.1.3 操作方法
将组织样品按1：10比例研磨于采样缓冲液中（液体样品除外），室温下500g离心20min取上层清液，用450μmol/L～800μmol/L滤器过滤后接种。对于粪拭子等严重污染样品添加链霉素和万古霉素（25μg/mL～100μg/mL）、两性霉素B和庆大霉素（50μg/mL）预处理（5℃，静置24h）。取适量样品加入Hella229细胞（或McCoy细胞）单层表面，室温2500g离心感作60min（37℃更佳），然后静置于37℃5%CO下2h，移走接种液，加入含无胎牛血清的DMEM培养液（添加0.5μg/mL放线菌酮和20 pg/mL庆大霉素），37℃5%CO2下培养5d～7d。期间收集细胞培养物及其上清液用PCR