NY/T 3258-2018
油菜品种菌核病抗性离体鉴定技术规程
Technical code of practice for in vitro identification of resistance to Sclerotinia Sclerotiorum in oilseed rape
2018-12-01实施
2018-07-27发布
前 言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准由农业农村部农产品质量安全监管司提出。
本标准由农业农村部种植业管理司归口。
本标准起草单位∶中国农业科学院油料作物研究所。
4 试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.1 水
GB/T 6682，三级。
4.2 1mol/L氯氧化钠（NaOH）溶液
称取 40.0g氢氧化纳，溶于800 mL.水中，冷却至室温。
4.3 1mol/L盐酸（HCI）溶液
量取50mL浓盐酸（36%～38%）加入到体积为450 mL，的水中.混匀。
4.4 70%乙醇溶液
量取700 mL 95%乙醇，加水定容至950 mL，混匀。
4.5 1%次氯酸钠溶液
量取10mL.有效氯含量 10%的次氯酸钠原液加入到体积为90 mL.的水中。混匀。
5 仪器设备
5.1 电子天平
感量0.01g。
5.2 恒温培养箱
精度土1℃。
5.3 人工接种鉴定温室
温度可调节至（22±1）℃，相对湿度可调节至95±5）%。
6 核盘菌接种体制备
6.1 核盘菌接种体培养基制备
核盘菌生长培养基用市售马铃薯培养基（PDA，Potato Dextroe Agar》粉剂，按说明书标准用量的一半，并按每升培养基补加7.5g琼脂粉，加水溶解，定容至1000 mL，用1 mol/L. NaOH或1mol/L. HC】溶液调节 pH至5.8。之后，将溶液分装到三角瓶中，包扎好后121℃灭菌 20min取出，按20mL/皿倒平板（直径 90 mm 培养皿》，冷却后储存备用。
6.2 核盘菌菌核的采集和消毒
从田间直立的油菜菌核病发病植株体内剥离核盘菌菌核，选择颗粒饱满、无裂痕、无霉变的菌核放人洁净的容器中，带回实验室置于一20℃冰箱备用。在超净工作台上∶将菌核置于70%乙醇中浸泡1 min，再转人1%次氧酸钠溶液中浸泡3 min，之后用无菌水漂洗3次。
6.3核盘菌菌丝的扩繁
在超净工作台上，将已消毒的菌核切成2mm×2 mm（长×宽）的小块。用镊子取一个菌核切块置于培养皿中心，并使其切面紧贴培养基表而，封皿后（22±1）℃暗培养。萌发菌丝后，4℃保存.并将此培养基用作菌源。离体接种前5d，用直径5mm的打孔器沿菌源培养基菌丝边缘打孔。将打孔得到的菌丝块取出置于新的培养基中心，并使菌丝块有菌丝一面紧贴于新的培养基表面，封且后（22±1）℃暗培养3d。待菌丝正好长至培养基边缘时，取出按上述步骤扩繁，（22±1）℃暗培养约2d后备用。
7 菌核病抗性离体鉴定方法