NY/T 3427-2019
棉花品种枯萎病抗性鉴定技术规程
Technical code of practice for identification of cotton variety resistance to Fusarium wilt
2019-09-01实施
2019-01-17发布
前 言
本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。
本标准由农业农村部种业管理司提出并归口。
本标准起草单位∶全国农业技术推广服务中心、中国农业科学院棉花研究所。
4 鉴定条件要求
4.1 病原菌培养所需仪器设备
恒温摇床、恒温培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、培养皿、试管、剪刀、镊子、广口瓶、酒精灯等。
4.2 鉴定温室所需条件
鉴定温室应具备控制温度在20℃～28℃，能够随时通风，不同部位光照一致。
5 鉴定前准备
5.1 病原菌选择与培养
5.1.1 病原菌选择
选用棉花枯萎病菌7号小种;如当地的枯萎病菌小种相对于7号小种为优势小种，则选择当地优势小种作为鉴定用病原菌。
5.1.2 病原菌培养
在超净工作台上，将保存的棉花枯萎病菌试管斜面菌种，转接到马铃薯琼脂培养基（PDA）平板上，置 25℃下培养6d。挑取菌落边缘2 mm²的新鲜菌块，接种到查比克（Czapek）液体培养基中，置 25℃下，150r/min;黑暗培养6d备用。吸取 15 mL上述菌液转接至装有玉米沙粒培养基的聚丙烯菌种袋中，混匀后置 25℃培养箱中静置培养7d，待枯萎病菌的菌丝布满后，取出培养物，自然风干备用。
培养基配制见附录A。
5.2 带菌土准备及纸钵制作
将沙壤土过筛（孔径5mm）后，和泥炭土、沙子分别经0.1MPa、121℃、湿热灭菌30 min，按3∶1∶1 混匀称重，加入总干重0.8%的枯萎病菌玉米沙粒培养物，混合均匀。
用干净的纸做直径6cm、高10cm 的纸钵，均匀排列在塑料盘（30 cm×20 cm×9cm）中，每盘3排4 列，将已混均匀的带菌土装人纸钵中，至 3/4 高度，待用。
5.3 对照品种选择
选用感病对照和抗病对照各 1个。感病对照要求高度感枯萎病的常规棉花品种或材料，选择标准为规定接种量及适宜环境条件下病情指数能达到 50.0左右，且感病性稳定;抗病对照选用抗枯萎病常规品种，规定接种量及适宜环境条件下病情指数在 10.0以下，且抗病性稳定。为减缓抗、感对照的抗性变异，可将对照品种在无病地隔离繁殖，冷库保存，一次繁殖，供5年以上使用。
6 鉴定程序