SC/T 7229-2019
鲤浮肿病诊断规程
Code of diagnosis for carp edema virus disease(CEVD)
2019-11-01实施
2019-08-01发布
5 仪器和设备
5.1 组织研磨器。
5.2 高压灭菌锅。
5.3 普通冰箱。
5.4 超低温冰箱。
5.5 低温离心机。
5.6 生物安全柜。
5.7 黄光PCR仪。
5.8 PCR仪。
5.9 可控温水浴钢。
6 临床症状
发病鱼行动迟缓，有时是昏睡症状。病鱼的症状包括∶烂鳃、眼球凹陷、体表度烂、出血、皮下组织水肿、吻端利精的基部造场等。其中量常见的综状是包括烂舰在内的银丝提害症状。塑组织在低倍憧观察忌示上皮细胞的过度地殖导致螺丝肿胀;高倍镜下表现出鳗细胸水肿、重度增生、鳃小片相互酿合以及上皮细胞脱落。参见附录A的A.
6 7 采样
按 SC/T7103的规定执行。取样数量按 GB/T18088的规定执行。体长≤4 cm 的鱼取整条;带卵黄效的值去掉卵黄燥;体长4cm~6 cm 的鱼苗取怨及所有内脏∶体长大于6 cm 的鱼则取鳃、肾。
8 核酸检测
8.1 DNA抽提
8.1.1 将样品匀紫后按1∶10 比例襟加PBS缓冲液或细胞培养液;冻融1次;1 000 r/min 离心10 min 后，取 450 μl上清液。加入到1.5 mL的离心管中。
8.1.2 加人450 μlCTAB溶液（见附录B的B.1）混匀。25℃处理2 h~2.5 h。
8.1.3 加人600 αl抽提液1（见B2>.混合混匀至少30 s。12 000r/min离心5min.取上层水相（约800 μl）置于新的1.5 mL.离心管中。
8.1.4 加人700 μl.抽提液2（见B3），充分混匀至少30s。12000r/min 离心5min，取上层水相（约600 μl.）置于新的1.5 mL.离心管中。
8.1.5 加入-20℃预冷的1.5倍体积的无水乙醇（约900 μl.），倒置数次混匀后，一20℃ 沉淀核酸8h 以上。