ICS 65.020.20
CCS B 05 DB2308
黑 龙 江 省 佳 木 斯 市 地 方 标 准
DB2308/T 211—2024
水稻稻瘟病菌孢子保存技术规程
2024-11-28 发布
2024-12-28 实施
佳木斯市市场监督管理局 发 布
DB2308/T 211—2024
前
言
本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由佳木斯市农业农村局提出并归口。
本文件由佳木斯市市场监督管理局批准发布。
本文件起草单位：黑龙江省农业科学院水稻研究所。
本文件主要起草人：王桂玲、宋成艳、陆文静、韩笑、周雪松。
本文件 2024 年首次发布。
Ⅰ
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水稻稻瘟病菌孢子保存技术规程
1
范围
本文件规定了佳木斯市水稻稻瘟病病菌定义、使用设备、保存方法等。
本文件适用于佳木斯市水稻稻瘟病病菌保存技术，为更深入研究稻瘟病菌提供菌种来源。
2
规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
病原物 pathogeny
稻瘟病菌：无性阶段为灰梨孢菌（学名：Pyricularia oryzae Cav.），有性阶段为灰色大角间座
壳菌（学名：Magnaporthe grisea Barr. ），属子囊菌广大角间座壳属。
3.2
水稻茎节 rice stem nodes
水稻茎节是指水稻茎上的特定部位，这些部位是芽与叶的着生处，通常凸出或微凹下，是辨别茎枝
的主要特征。
以下简称稻节。
4 材料和用具
4.1 常用仪器用具
常用仪器及用具包括：剪刀、超净工作台、小试管（直径12 mm，长100 mm）、接种针、培养皿、
冰箱、生物显微镜、培养箱、高压灭菌器、干燥灭菌器、医用白瓷盘、变色硅胶、普通玻璃干燥器、酒
精灯、记号笔，镊子等。
4.2
试剂及培养基
1
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试剂：75 % 酒精、凡士林。
培养基：稻节。
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预保存菌株要求
培养在试管斜面培养基上的或培养皿里的菌种，以及高梁粒培养基上的新鲜菌种，都可以使用。
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保存方法
6.1 稻节采集与备用
秋季水稻（普通水稻，不包括彩色水稻等特种稻）收获时，采集水稻植株较细的茎节，用剪刀剪成
长约3 cm～5 cm 的稻节，且要求稻节干净无病，采集后放在干燥通风处晾干保存备用。
6.2
稻节培养基的制备
选保存备用的干净稻节，保留节部，剪成长约 0.5 cm～1 cm 的小节，用蒸馏水洗净后放在容器内，
根据需要放入稻节数量，然后加入蒸馏水适量（没过稻节以上15 cm），加热煮沸 20 min后，常温烝馏
水冷过滤至常温，然后装入小试管内，每管放10 个稻节，盖上棉塞，放入高压灭菌器（蒸气灭菌器）
内温度达到121℃，灭菌 40 min，取出晾凉备用。
6.3
接种培养
在无菌室内，把要保存的新鲜菌株切成小的菌块，接种在稻节培养基上，在试管上注明菌株编号、
接种日期，放入 28℃恒温培养箱内培养，待菌丝长满稻节后，从培养箱内取出放在室内通风干燥处。
6.4
变色硅胶干燥
将变色硅胶倒入玻璃培养皿或者瓷盘中，放入烘箱 80℃干燥 2 h 至硅胶变为深蓝色( 干燥的变色
硅胶呈深蓝色，根据吸湿量的多少颜色会依次呈淡蓝色、蓝白色、蓝紫色和粉红色) 后冷却，然后倒入
玻璃干燥器中备用。
6.5
病菌保存
准备普通玻璃干燥器（根据需要准备干燥器型号），在干燥器底部放入变色硅胶(干燥的变色硅胶
呈深蓝色)，把通风干燥后的小试管 5 个～10 个为一组，用硫酸纸包住试管上部（棉塞部分）扎好，
2
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做上编号标记便于查找，在干燥器磨口处摸上凡士林，盖上干燥器盖子，用力压实，以干燥器磨口处不
漏气为准，最后将干燥器放入低温（4℃）通风干燥处保存。
6.6
保存菌种干燥状态检查
检查玻璃干燥器中硅胶颜色的变化，湿度为 0 时呈深蓝色；湿度约为 10 % 时呈淡蓝色；湿度约为
25 % 时呈蓝白色；湿度约为 40 % 时呈蓝紫色；湿度约为 50 % 时呈粉色，菌种保存过程中如果变色硅胶
呈粉红色，表明其吸湿性已经很弱，无法继续维持所保存菌种的干燥环境，需要进行更换。
6.7
保存病菌使用
可根据需要随时打开干燥器取用，开启时，要将干燥器放在阳光下照射，使干燥器磨口处凡士林融
化，才能开启干燥器，用后再按上述方法封严即可。
3