ICS 11.020
CCS C05
团
体 标 准
T/LNSI 007-2024
人羊膜间充质干细胞库
Human amniotic mesenchymal stem cell bank
2024-07-23 发布
2024-07-23 实施
辽宁省免疫学会 发 布
T/LNSI 007-2024
目
次
前
言 ............................................................................... III
1 范围 ................................................................................. 1
2 规范性引用文件 ....................................................................... 1
3 术语和定义 ........................................................................... 1
4 缩略词 ............................................................................... 2
5 建设要求 ............................................................................. 3
6 管理要求 ............................................................................. 3
7 通则 ................................................................................. 5
8 技术要求 ............................................................................. 6
9
数据管理 ............................................................................ 8
10 检验方法 ............................................................................ 9
11
检验规则 .......................................................................... 11
12 使用说明 ........................................................................... 12
13
标签 .............................................................................. 13
14
包装、储存及运输 .................................................................. 13
15
不合格产品的处理 .................................................................. 14
附 录 A ............................................................................... 15
附 录 B ............................................................................... 17
附 录 C ............................................................................... 19
附 录 D ............................................................................... 21
附 录 E ............................................................................... 24
附 录 F ............................................................................... 27
附 录 G ............................................................................... 29
附 录 H ............................................................................... 31
附 录 I ............................................................................... 33
I
T/LNSI 007-2024
II
T/LNSI 007-2024
前
言
本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化的文件结构和起草规则》的规定
起草。
本文件由沈阳艾米奥生物工程技术研发中心有限公司、沈阳市再生生物医学重点实验室提出。
本文件由辽宁省免疫学会归口。
本文件起草单位：沈阳艾米奥生物工程技术研发中心有限公司、中国医科大学干细胞与再生医学研
究室、沈阳市再生生物医学重点实验室、沈阳市干细胞与再生医学重点实验室、辽宁艾米奥干细胞与再
生医学研究院、辽宁省细胞生物学学会、辽宁省生物技术协会、沈阳市干细胞与再生医学产业技术创新
联盟、沈阳药科大学、中国医科大学附属第一医院、中国医科大学附属口腔医院、中国医科大学附属盛
京医院、艾米奥国际干细胞医院。
本文件主要起草人：庞希宁、庞然、施萍、单风平、王莉莎、赫甡、宋扬、徐东芬、荆晶、姜雯宇、
高航、谢光麟、邵锡柱、王竟、孟涛、苏航、张美玲、聂宏光、郎宏鑫、刘晓玉、王喜良、张涛、赵峰、
张殿宝、王瑞、李彩虹、李宏图、潘长伟、孔娟、王哲、王蔚、殷军、郭然、张宁、李晓航、王娇。
本标准的制订基于相关技术的综合考虑，旨在推动行业的发展和规范化。在编写过程中，团体成员
充分研究了现有技术和专利信息，并积极寻求相关权益方的支持和参与。特此声明，在编写本标准期间，
我们已经采取了合理的努力来促进并保护涉及的知识产权。
鉴于技术的不断创新和发展，如果其他相关专利或权益未在本标准中明确声明，请权益人及时联系
标准制定团体，以便进行进一步的沟通和许可。
本标准中使用的专利声明如下：
[CN2013100323661]：[沈阳艾米奥生物工程技术研发中心有限公司]，[CN]，[人羊膜间充质干细胞
库的构建方法]。
以上声明是为了更好地保护知识产权，遵循了国家相关法律法规和知识产权的规定。我们鼓励所有
使用本标准的相关方与专利权人合作，以确保公平的利益分配和技术发展。
III
T/LNSI 007-2024
人羊膜间充质干细胞库
1 范围
本文件规定了人羊膜间充质干细胞库的构建过程，其中包括制备、冻存、复苏等的规范性操作和推
荐方法。
本文件适用于医疗机构等构建人羊膜间充质干细胞储备库。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
T/CSCB 0009-2022 《人干细胞研究伦理审查技术规范》
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 5458 液氮生物容器
GB 50457 医药工业洁净厂房设计标准
WS 213 丙型肝炎诊断
WS 279 梅毒诊断
WS 293-2019 《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》
干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）
中华人民共和国药典（2020 年版）
全国临床检验操作规程
药品生产质量管理规范
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
羊膜 amniotic membrane
1
T/LNSI 007-2024
子宫内包被胎儿的一层薄膜。胎膜的最内层，是人体最厚的一层基底膜。
3.2
人羊膜间充质干细胞 human amniotic mesenchymal stem cells
一类来源于人羊膜间充质，贴壁培养后呈成纤维细胞样形态（纺锤形和梭形）、可在体外自我更新
并具有成骨、成脂、成软骨等分化能力的间充质干细胞。
3.3
人羊膜间充质干细胞库 human amniotic mesenchymal stem cell bank
用于储存人羊膜间充质干细胞的专门机构。
3.4
冻存的细胞 cryopreserved cells
是指经过程序性降温冷冻，并利用深低温冷冻储存技术，以减少细胞代谢活动，保存其较高的生物学活
性而进行长期储存的细胞。
3.5
非冻存的细胞 non-cryopreserved cells
是指未经过深低温冷冻储存的活细胞。
4 缩略语
下列缩略适用于本文件。
CD
——分化簇（Cluster of Differentiation）
DNA
——脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid）
EBV
——疱疹病毒（Epstein-Bar Virus）
HBV
——乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus ）
HCMV
——人巨细胞病毒（Human Cytomegalovirus）
HCV
——丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus）
HIV
——人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus）
HLA-DR ——人类白细胞抗原-DR（Human Leukocyte Antigen-DR）
HTLV
——人类嗜 T 细胞病毒（Human T-lymphotropic Virus）
IDO
——吲哚胺 2,3-双加氧酶（Indoleamine 2,3-dioxygenase）
IFN-γ
——干扰素-γ（Interferon-γ）
TNF-α
——肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α）
PCR
——聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）
STR
——短串联重复序列（Short Tandem Repeat）
2
T/LNSI 007-2024
TP
——梅毒螺旋体（Treponema Pallidum）
5 建设要求
5.1
总体原则
细胞库的选址、设计及布局应综合考虑环境、气候和空气质量等相关情况，应符合《药品生产质量管理规
范》的要求。
5.2
机构设置
5.2.1
人羊膜间充质干细胞库或其所属机构应是依法成立并能够承担相应法律责任的法人或其他组
织。
5.2.2
人羊膜间充质干细胞库应遵循《药品生产质量管理规范》的要求，设置与质量管理、技术运作
相匹配的职能部门。
5.2.3
人羊膜间充质干细胞库应建立统一领导、分级管理、职责明确的管理机构，并有明确的组织架
构图。
5.2.4
人羊膜间充质干细胞库管理机构应有相匹配的人员配置，关键人员应至少包括最高管理者、医
学负责人、技术负责人、质量负责人等。
5.2.5
人羊膜间充质干细胞库关键人员职责及能力要求应符合《干细胞制剂质量控制及临床前研究指
导原则（试行）》的相关要求
6 管理要求
6.1
设备管理
6.1.1 设备采购及验收
6.1.1.1
设备采购前应完成性能需求、用途及设备供应商的调研，保证设备符合预期细胞制备及检测
要求。
6.1.1.2 设备采购应签订采购合同。
6.1.1.3 仪器设备在安装验收合格后，应配置唯一识别码，安装调试记录纳入设备确认文件中。
6.1.2 设备计量
3
T/LNSI 007-2024
6.1.2.1
具有测量功能的设备应在检定/校准合格后方可投入使用。
6.1.2.2
设备检定/校准应由有资质的计量单位执行，所有检定/校准的结果和数据须经设备使用部门
确认。
6.1.2.3
设备经修理、更新升级或搬运后，应对其性能是否满足使用要求进行重新确认。
6.1.3
设备使用
6.1.3.1
设备现场应配有操作规程。
6.1.3.2
设备应有明确的状态标识。
6.1.3.3
设备使用人员应及时填写使用记录。
6.1.4
设备维护维修
6.1.4.1
仪器设备均应按照维护规程进行维护保养，并予以记录。
6.1.4.2
应建立完善的仪器设备维修程序，内部维修人员应经厂家工程师培训考核后方可执行维修工
作，委外维修应保留维修记录。
6.1.5 储存设备管理
6.1.5.1 人羊膜间充质干细胞库的液氮安全应符合 GB/T 5458 的规定。
6.1.5.2 应定期检查液氮容量，并建立相应的检查登记制度。
6.1.5.3 工作人员在操作中接触到液氮时，需使用防护面罩和防冻手套，并做好其它防冻措施。
6.2 物料管理
6.2.1 采购
6.2.1.1 应建立完善的供应商筛选、登记、考察、年度资格评审程序。新增或变更物料供应商应进行
质量审计或评估，并对新物料开展试验验证，确认符合细胞产品工艺要求。
6.2.1.2
应按照《药品生产质量管理规范》的相关要求审查生产商、经销商提供的资质说明及证明材
料。
6.2.2
验收
应制定物料质量标准，建立物料接收、检验、放行程序。检验合格的物料方可放行入库；检验不合
格的物料，应将信息及时反馈至供应商，在未换货之前应放置在指定区域并加以标识。
4
T/LNSI 007-2024
6.2.3
库存管理
应配置与产能相匹配的物料存放区，关键物料（包括采集运输容器、制备、冻存、检测等所用物料）
应按厂家说明书和具体的技术要求进行储存。应对未经检验或临时紧急采购的物料进行单独管控。
6.2.4 使用
6.2.4.1 物料应严格按照其说明书进行使用，不得超范围使用。
6.2.4.2 物料使用过程中应及时填写记录，确保其可追溯性。
6.3 环境控制
6.3.1 洁净区净化环境检测应采用第三方检测和自检相结合的方式进行，第三方检测应由具有资质的
省级以上专业机构进行。
6.3.2 第三方检测项目应符合 GB 50457 的要求。检测周期不得低于两年一次。
6.3.3 自检项目应符合 GB 50457 的要求。
6.4 记录控制
6.4.1 应建立和保持记录管理程序，对记录的标识、存放、检索、保留和处置加以规范。
6.4.2 记录内容应覆盖整个管理体系，包括质量记录、技术记录，每项记录信息应充分。
6.4.3 所有记录的存放条件应有安全保护措施，对电子储存的记录也应采取与书面记录同等措施以防
止未经授权的侵入或修改，电子记录应加以备份。
6.5
文件管理
6.5.1
应建立控制干细胞库管理体系的内部和外部文件的程序。
6.5.2
应依据制定的文件管理程序，对文件的编制、审核、批准、发布、标识、变更、和废止等各个
环节实施控制。
6.6.3
保密文件应按保密制度严格管控，不得随意借阅、复印。
6.7.4
应对文件时效性进行定期检查，防止使用无效或作废文件。
7 通则
7.1
方案制定
人羊膜间充质细胞库研究项目启动前应当制订工作方案。工作方案的内容包括但不限于：目标与任
5
T/LNSI 007-2024
务、操作流程、工作条件、生物安全等级、操作人员资质、供体选择要求、人羊膜间充质干细胞质量控
制标准、参考文献等。
7.2
知情同意
人羊膜组织的获取，在充分尊重、告知人体组织提供者权益的前提下签署知情同意书，告知内容包
括但不限于：组织的处置方案及可能涉及的应用场景。宜对组织提供者的个人信息进行隐私保护，严禁
泄露可识别供体及亲属身份的信息，如：姓名、肖像、证件、社会关系等。
7.3
隐私保护
应当对样本提供者的个人信息采取保密措施。
8 技术要求
8.1 原材料和辅料
8.1.1 应符合 T/CSCB 0009-2022 要求。
8.1.2 应建立供者细胞采集的供者评估与筛选标准、采集方法、运输标准和交接标准，保证供者和细
胞的安全。
8.1.3 供体应筛查 HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV 和 TP，并记录结果。
8.2 采集与培养方法
8.2.1 样本采集
8.2.1.1 人羊膜组织样本采集应由专业的医护人员完成。
8.2.1.2 羊膜的采集场所应达到Ⅲ级洁净手术室要求。
8.2.2 样本运输
8.2.2.1
样本运输人员应是经过培训合格的专门人员。
8.2.2.2
羊膜样本的运输温度为 2℃～8℃，样本离体时间不宜超过 24h。
8.2.2.3
样本运输过程应受控并建立记录档案。
8.2.3
样本接收
8.2.3.1
接收样本时应先检查容器外观有无破损，并记录。
6
T/LNSI 007-2024
8.2.3.2
检查《样本采集信息记录表》的信息是否齐全，确认无误后对样本进行唯一性标识。
8.2.3.3
用 75%的医用酒精对容器外表面进行消毒，依据样本接收标准，对检测达标后的样本进行接
收；检测不达标的样本拒收后进行销毁，并做好相应记录。
8.2.4
分离及提取
人羊膜组织样本剪至片状，用胰酶消化法去除羊膜上皮细胞。然后将人羊膜组织剪碎，用胶原酶消
化法分离人羊膜间充质干细胞。进行人羊膜间充质干细胞原代培养。
8.2.5
人羊膜间充质干细胞培养
根据细胞的生长情况换液和传代。
8.2.6
人羊膜间充质干细胞冻存
冻存细胞程序降温后置液氮中保存。
8.2.7
人羊膜间充质干细胞复苏
取出冻存管进行快速融化、离心洗涤后进行培养。
8.2.8
人羊膜间充质干细胞溶液
人羊膜间充质干细胞溶液应为均质状态，无絮状沉淀，细胞存活率≥90％。
8.3 关键质量属性
8.3.1 细胞形态
细胞贴壁培养时呈纺锤形和梭形的成纤维细胞态，形态均一。
8.3.2
染色体核型
正常核型应为 46,XX 或 46,XY。
8.3.3
细胞存活率
未冻存细胞存活率≥90%且冻存复苏后细胞存活率≥70%。
8.3.4
细胞标志蛋白
CD105、CD73、CD90 阳性率均≥95%；CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45、HLA-DR 阳性率
7
T/LNSI 007-2024
≤2%。
8.3.5
免疫调节
经炎症因子（IFN-γ或者 IFN-γ联合 TNF-α）诱导后表达吲哚胺 2,3-双加氧酶（IDO）。与 T 淋巴细
胞共培养能抑制 T 淋巴细胞增殖及分泌 IFN-γ、TNF-α。
8.3.6
三系分化
具有成骨、成脂和成软骨的分化潜能。
8.3.7
成瘤性
免疫缺陷动物（如小鼠）体内成瘤试验结果为阴性。
8.3.8
微生物
真菌、细菌、支原体、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP 为阴性。
8.4 过程控制
8.4.1 扩增、冻存、复苏等过程控制应符合 T/CSCB 0009-2022 要求。
8.4.2 细胞 STR 检测结果应与供体细胞保持一致。
9 数据管理
9.1 数据采集
将冻存后的人羊膜间充质干细胞的详细信息（包括供者姓名、年龄、住院号、新生儿性别和化验检
查信息等）输入电脑数据库，建立完善的数据档案备查询。
9.2
人羊膜间充质干细胞库构建
按人羊膜间充质干细胞提取日期进行保存，建立可供检索的人羊膜间充质干细胞信息档案，即构建
出人羊膜间充质干细胞储备库。
9.2.1
入库
9.2.1.1
干细胞产品入库前应有双人复核，确认信息无误。
9.2.1.2
干细胞入库过程应记录完整，确保信息的可追溯性。
8
T/LNSI 007-2024
9.2.2 深低温储存
9.2.2.1 干细胞产品应保存在-130℃及以下。
9.2.2.2 干细胞产品标签及记录应标明保存温度及储存效期。
9.2.2.3 处于储存状态的干细胞产品未经批准不得随意变更储存位置和状态。
9.2.2.4 干细胞产品的储存应注意以下事项：
——储存区不应存放可对干细胞产品产生不良影响的物料及试剂；
——对于浸没在液氮中的干细胞产品应采用避免发生交叉污染的措施
——干细胞产品应确保其标识清晰易认。
9.2.2.5
应制定冻存的干细胞产品稳定性考察计划，定期对储存系统稳定性及干细胞产品活性进行监
测。
9.2.3 出库
9.2.3.1 应建立干细胞产品出库相关制度。
9.2.3.2 干细胞产品应经质量评价及负责人审核确认后方可出库。
9.2.4 非冻存的干细胞产品
9.2.4.1 确认
根据客户要求制备的干细胞产品，应经客户及相关负责人确认。
9.2.4.2
发放
9.2.4.3
干细胞产品应经过质量评价，产品合格并经负责人审核确认后发放。
9.2.4.4
发放时应有双人复核细胞产品及发放信息，并确保细胞产品包装容器的完整性。
10 检验方法
10.1
细胞形态
二维培养条件下，用明视场细胞显微镜×40 倍进行观察。
10.2
染色体核型
按照《中华人民共和国药典（2020 年版）》中“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规
程”项检验。
9
T/LNSI 007-2024
10.3
细胞存活率
按照附录 A 的方法检验。
10.4
细胞表面标志物
按照附录 B 的方法检验。
10.5 免疫调节
10.5.1 诱导 IDO 表达
按照附录 C 的方法检验。
10.5.2
抑制 T 淋巴细胞增殖
按照附录 D 的方法检验。
10.5.3
抑制 T 淋巴细胞分泌 IFN-γ、TNF-α
按照附录 E 的方法检验。
10.6 三系分化
10.6.1 成骨分化
按照附录 F 的方法检验。
10.6.2
成脂分化
按照附录 G 的方法检验。
10.6.3
成软骨分化
按照附录 H 的方法检验。
10.7
成瘤性
按照附录 I 的方法检验。
10.8 微生物
10.8.1 真菌
按照《中华人民共和国药典（2020 年版）》中“1101 无菌检查法”项检测。
10
T/LNSI 007-2024
10.8.2
细菌
按照《中华人民共和国药典（2020 年版）》中“1101 无菌检查法”项检测。
10.8.3
支原体
按照《中华人民共和国药典（2020 年版）》中“3301 无菌检查法”项检测。
10.8.4
HBV
按照《全国临床检验操作规程（2020 年版）》核酸法检验。
10.8.5
HCV
按照 WS 213 核酸法检验。
10.8.6
HIV
按照 WS 293-2019 核酸法检验。
10.8.7
HTLV
按照《全国临床检验操作规程》核酸法检验。
10.8.8
EBV
按照《全国临床检验操作规程》核酸法检验。
10.8.9
HCMV
按照《全国临床检验操作规程》核酸法检验。
10.8.10
TP
按照 WS 273 核酸法检验。
11 检验规则
11.1 抽样方法和数量
11.1.1 在一个生产周期中，同一生产线、同一来源、同一代次、同一方法制备出来的产品为一批。
11.1.2 在同一批的产品中随机抽取 3 个最小包装单元。
11
T/LNSI 007-2024
11.2 出厂检验
11.2.1 每批产品应进行出厂检验，并附检验报告。
11.2.2 出厂检验项目应包括 8.3 规定的所有项目。
11.3 复核检验
根据需要，应由第三方专业细胞检验机构/实验室进行复核检验，检验项目应包括第 8 章规定的所
有项目。
11.4 判定规则
11.4.1 出厂检验项目全部符合 8.3 规定，判定为合格品；有 1 项及以上不符合本文件规定，则判为不
合格品。
11.4.2
复核检验项目全部符合 8.3 规定，判定为合格品；有 1 项及以上不符合本文件规定，则判为不
合格品。
12 使用说明
应至少包括以下内容：
a） 产品名称；
b） 细胞代次；
c） 细胞数量；
d） 生产日期；
e） 生产批号；
f） 生产组织；
g） 储存条件；
h） 运输条件；
i） 使用方法；
j） 执行标准号；
k） 生产地址；
l） 联系方式；
m） 邮政编码；
12
T/LNSI 007-2024
n） 注意事项。
注：根据用户需求，可标注内毒素含量。
13
标签
应至少包括以下内容：
a） 产品名称；
b） 细胞代次；
c） 细胞数量；
d） 生产批号；
e） 生产组织；
f） 生产日期。
14 包装、储存及运输
14.1 包装
非冻存细胞应选择对人羊膜上皮干细胞关键质量属性无影响的袋或瓶中，应选用 100 毫升 0.9%生
理盐水袋或瓶。
14.2 储存
14.2.1 应符合 T/CSCB 0009-2022 要求。