ICS13.300;11.100 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T35526—2017
化学品 （抗）雄性性征短期筛选试验
大鼠 Hershberger 生物检测法
Chemicals-A short-term screening assay for (anti) androgenic properties-
Hershberger bioassay in rats
2018-07-01实施
2017-12-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 中华人民共和 国
国家标准
化学品 品（抗）雄性性征短期筛选试验
大鼠Hershberger生物检测法
GB/T35526—2017
*
中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029) 北京市西城区三里河北街16号（100045)
网址www.spc.net.cn
总编室：(010)68533533发行中心：(010)51780238
读者服务部：（010)68523946 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷
各地新华书店经销
*
开本880×12301/16 印张0.75字数18千字 2018年1月第一版 2018年1月第一次印刷
*
书号：155066·1-58303定价 16.00元
如有印装差错由本社发行中心调换
版权专有侵权必究举报电话：(010)68510107 GB/T 35526—2017
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准与经济合作与发展组织（OECD）化学品测试方法NO.441《大鼠Hershberger生物检测
（抗）雄性性征短期筛选试验》[Hershbergerbioassayinrats：Ashort-termscreeningassayfor（anti） androgenicpropertiest)(2009)技术内容一致。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、复旦大学。 本标准主要起草人：姚丽芳、陈俊水、蒋伟、陈相、陈会明、张静、李蔚、缪文彬、赵颐晴、郑华、春华
I GB/T35526—2017
引言
1998年，OECD开始修订并发展检测和筛选内分泌干扰物的试验方法。上述活动之一就是发展了大鼠Hershberger生物筛选试验方法。通过在医药工业使用几十年后，1962年，该方法首次被官方专业委员会作为一种雄性激素化学品的标准筛选工具。2001年一2007年，Hershberger生物筛选试验进行了大量的验证项目：包括方法背景资料研究、具体试验方法汇总、解剖技术的发展以及实验室内部和实验室之间试验方法可靠性和重现性的验证研究。上述验证研究使用雄性激素参照物（丙酸睾丸酮）、 两种合成的雄性激素（醋酸去甲雄三烯醇酮和甲基丸素）、抗雄性激素药物（氟他胺）、天然雄性激素合成抑制剂（非那雄胺）、几种弱抗雄性激素农药（利谷隆、乙烯菌核利、速克灵和P，p-DDE)和5α-还原酶抑制剂（非那雄胺）和两种阴性对照物（二硝基苯酚和王基苯酚）。本标准是长期生物鉴定试验和验证试验的经验总结。
Hershberger生物筛选试验是一种使用雄性生殖系统中有关组织的短期在体筛选方法。试验始于 20世纪30年代，40年代的时候增加了雄性生殖系统中的雄性激素反应肌。20世纪60年代，使用标准方法对700多种可能的雄性激素进行了评估。本标准是基于检测去势后的雄性大鼠体内五种雄性激素依赖组织质量改变的一种筛选方法。本方法用于评估化学品类似雄性激素激动剂、雄性激素拮抗剂或者5α-还原酶抑制剂的生物活性。五种雄性激素依赖组织为腹侧前列腺（VP）、精囊（SV）（包括液体和凝固腺）、提肛肌-球海绵体肌复合体（LABC肌）、成对的尿道球腺（COW）和龟头（GP）。在去势的雄性大鼠中，受雄性激素的影响，上述五种组织的质量会发生相应增加。同一受试动物，使用雄性激素参照物后五种组织的质量均发生增长，再使用雄性激素拮抗剂能使五种组织的质量均发生下降。三个阶段的验证试验证实，Hershberger生物筛选试验的首选动物模型是去势的青春期前的雄性大鼠。
Hershberger生物筛选试验是一种雄性激素受体激动剂、雄性激素拮抗剂和5α-还原酶抑制剂的筛选方法。作为提供单一的内分泌机理数据的体内筛选试验方法被包括在OECD内分泌干扰化学品的测试和评估框架第3级中。本试验包含在内分泌干扰物体内和体外系列试验中，用于判断受试物是否对内分泌系统产生潜在干扰作用，从而导致人类健康和环境的危害。
考虑到动物福利，未经去势的刚断奶的雄性大鼠也可以作为Hershberger生物筛选的替代动物模型。这种方法也通过验证，但是，微量的抗雄性激素验证研究中未经去势的刚断奶的雄性大鼠不能够产生一致的响应。因此，本标准中并不包括这项试验的内容。
作为雄性激素受体的配体，雄性激素受体激动剂和拮抗剂可分别激活或抑制受体控制的基因转录
此外，在一些雄性激素的靶组织中，某些化学品会抑制睾酮转化为更有活性的二氢睾酮（5α-还原酶抑制剂）。这些物质有可能对生殖和发育产生不利影响。因此，需要迅速评估并评价化学品是否是雄性激素受体激动剂、拮抗剂或5α-还原酶抑制剂。虽然通过受体结合、体外报告基因的转录激活效应检测到的雄性激素配体对受体的亲和力与其产生危害有一定关系，但并不是潜在危害的决定性因素。其他因素还包括进人体内之后的代谢活化、灭活、靶器官中的分布情况和体内的清除情况。这就需要在筛选化学品的时候在相关的条件和暴露下进行。如果化学品的吸收一分布一代谢一清除（ADME）已知，则体内的评估就相对不重要一些。在雄性激素刺激下，去势的青春期前的雄性大鼠体内雄性激素依赖组织生长迅速、明显。啮齿类动物，特别是大鼠，广泛用于毒性危害研究。因此，本试验中，使用去势的青春期前的雄性大鼠和五种靶组织筛选雄性激素受体激动剂、拮抗剂和5α-还原酶抑制剂。
本标准的可信性和重现性是通过OECD实验室内部和实验室间的比对验证了的。所有的雄性激素和雄性激素拮抗剂的操作步骤均在本标准中体现。
虽然在检测抗雄性激素的验证试验中，不同实验室使用的丙酸睾丸酮剂量有所区别，分别为
Ⅱ GB/T35526—2017
0.2mg/（kg·d)或0.4mg/(kg·d）（皮下注射），但强抗雄性激素物质和弱抗雄性激素物质的检测结果表示不同剂量的丙酸睾丸酮试验结果没有差别。但是，应明确丙酸睾丸酮的剂量不应该太高，以免影响弱雄激素受体抗剂的作用，也不能太低，否则，即使没有雄性激素拮抗剂的情况下，雄性激素依赖组织也不发生质量变化。
单个雄性激素依赖组织的生长反应并不完全是由雄性激素引起的。即雄性激素激动剂之外的化合物可能改变特定组织的质量。然而，几个组织同时发生反应，则证明雄性激素的特定反应机理。例如：高剂量的雌激素可以增加精囊的质量，但不会增加其他雄性激素依赖组织的质量。抗雄性激素化学品既可以是雄性激素受体拮抗剂，也可以是5α-还原酶抑制剂。不同组织转化成二氢睾酮不同，因此5α 还原酶抑制剂对不同组织具有不同的效应。与雄性激素拮抗剂氟他胺相比，抑制5α-还原酶的抗雄性激素非那雄胺对腹侧前列腺作用更大。这种差异可用于区别是由于雄性激素受体介导的反应还是5α 还原酶的介导的反应。此外，在生物进化上，雄性激素受体与类固醇激素和其他激素有关，如加强类固醇的代谢、降低血清睾酮含量，也可能抑制雄性激素依赖组织的生长，因此，Hershberger生物筛选试验的任何阳性结果均应结合雄性激素受体和雌性激素受体结合试验、转录活化分析等体外试验或者检测类似雄性激素靶器官的体内试验，如雄性动物发育试验、15天成年雄性动物试验、28天或90天重复剂量试验进行综合评价。
经验表明，雄性激素比抗雄性激素更加罕见。因此，Hershberger生物筛选试验更广泛应用于抗雄性激素的筛选。然而，雄性激素检测方法可用于留体类或类固醇类化学品或者框架文件第1级或第2 级试验结果显示具有疑似雄性激素作用的化学品的检测。类似的，与(抗)雄性激素相关的危害可以在第5级试验中观察得到，用于评估化学物的危害是否与内分泌有关，
所有的动物相关的程序应该符合地方动物保护标准，本标准中描述的动物保护和使用标准都是最低标准，可被地方性法规代替。
目 GB/T35526—2017
化学品（抗）雄性性征短期筛选试验
大鼠Hershberger生物检测法
1范围
本标准规定了化学品（抗)雄性性征短期筛选试验大鼠Hershberger生物检测法的术语和定义、试验原理、试验方法与步骤、数据与报告
本标准适用于评估化学品类似雄性激素激动剂、雄性激素拮抗剂或5α-还原酶抑制剂的生物活性。
2规范性引用文件
下列文件对 本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注 主日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件
GB14925 实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用
3.1
雄性激素效应 androgenicity 化学品对雄性激素依赖组织的促进作用
3.2
抗雄性激素效应 antiandrogenicit 化学品抑制哺乳动物体内丙酸睾丸酮（TP，CAS号57-82-5)活性的作用
3.3
剂量dose 给予受试物的量。人 用每天单位体重动物给予受试物的质量来表示，即mg/(kg·d)。
3.4
用量dosage 包括剂量、染毒频率和染毒时间。
4试验原理
4.1通过检测五种雄性激素依赖组织在染毒前后质量的改变来评估化学品是否是雄性激素激动剂、雄性激素拮抗剂或者5α-还原酶抑制剂。五种雄性激素依赖组织包括腹侧前列腺（VP）、精囊（SV）（包括液体和凝固腺）、提肛肌-球海绵体肌复合体（LABC）、成对的尿道球腺（COW）和龟头（GP）。 4.2单个雄性激素依赖组织的生长反应并不完全是由雄性激素引起的，然而，几个组织同时发生生长反应，则可证明为雄性激素效应。为了达到其灵敏度，本标准采用去势雄性大鼠，这是因为去势雄性大鼠血液循环中内源性雄性激素水平低，使得下丘脑-垂体-性腺轴无法通过代偿机制进行补偿，从而使得组织对化学品的反应最大化，而且去势后能使其靶组织质量达到最小，从而使得组织初始质量的差异最
1 GB/T35526—2017
5.2去势
5.2.1由于42天前的大鼠包皮尚未分离，因此在动物出生后42天去势。 5.2.2在试验开始之前动物应适应几天。去势过程应使用麻醉，并无菌操作。动物麻醉后，在阴囊处切开，切除两侧睾丸和附睾，并结扎血管和输精管。确认无出血后，缝合阴囊。术后几天应使用止痛药，以减轻术后不适症状。如果直接购买去势实验动物，则应从供应商处获得有关动物年龄和性成熟的相关信息。 5.2.3动物在去势后应在实验室条件下至少继续适应7天再开始正式试验。适应期间每天观察动物，发现任何生病或生理缺陷的动物应剔除。去势动物首次染毒时间应在出生后第49天至第60天范围内。 5.3体重和随机分组
应避免使用体重过大或过小的动物。动物体重差异不应超过平均体重的士20%。动物应根据体重随机分组（包括对照组和受试物组）。 5.4剂量 5.4.1受试物一般设置两个剂量组，同时设置阳性对照组和阴性对照组。如果试验目的是获得剂量一一反应曲线或外推至更低剂量，则受试物至少设置三个剂量组。如果需要获得除雄性激素活性以外的信息（如效力评估），应考虑其他染毒方案。为检测抗雄性激素类物质，受试物应和雄性激素参照物同时给予。受试物至少设置三个剂量组，同时设置阳性对照组和阴性对照组。对照组动物除了不给予受试物外，其他操作与其他组一致。如果在染毒时使用某种赋形剂，则对照组给予的赋形剂量应为受试物组中最大的赋形剂量。 5.4.2所有剂量水平应根据受试物或相关物质已知的毒性数据或毒代动力学数据设定。最大染毒剂量的设定应首先考虑LDso值和/或急性毒性数据，以避免动物死亡或对动物造成严重伤害。其次，应考虑亚慢性和慢性毒性数据。通常，最大剂量不应导致动物体重下降超过对照组体重的10%。最大剂量连续10天染毒后不应产生明显毒性和伤害，不引起动物死亡[最大剂量不应超过1000mg/（kg·d)]。如果没有合适的数据，可先进行预试验以确定最终的染毒剂量。 5.4.3如果1000mg/（kg·d)的限度剂量下，生殖器官质量在统计学上未发生显著性差异，则无需要进行其他剂量试验。除非人类暴露资料显示需要使用更高剂量水平。 5.5参照物质和赋形剂 5.5.1雄性激素激动剂参照物为TP。参考剂量为0.2mg/(kg·d)或0.4mg/(kg·d)。雄性激素拮抗剂参照物为氟他胺（FT，CAS号1311-84-7）。剂量为3mg/(kg·d)，FT应与TP同时给予。 5.5.2赋形剂应首选水溶液/悬浮液。但因为大多数雄性激素配体或它们的代谢前体具有疏水性，常使用玉米油、花生油、芝麻油或橄榄油作为赋形剂制备溶液/悬浮溶液。受试物可先溶解于95%乙醇或其他适当的溶剂中，试验时再用赋形剂稀释到最终浓度。赋形剂的毒性信息应明确，并设置赋形剂对照组。如果受试物性质稳定，适当加热和充分搅拌有利于加速受试物溶解。应测试受试物在赋形剂中的稳定性。如果受试物在试验期间是稳定的，则可以先配制受试物的初始溶液，试验时再制备成相应的稀释浓度，以避免污染和损坏样品。 5.6染毒 5.6.1受试物通过灌胃或皮下注射给予。 5.6.2动物采用相同方式染毒。每隔24h染毒，连续染毒10天。每天根据动物体重计算染毒剂量，并
3 ICS13.300;11.100 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T35526—2017
化学品 （抗）雄性性征短期筛选试验
大鼠 Hershberger 生物检测法
Chemicals-A short-term screening assay for (anti) androgenic properties-
Hershberger bioassay in rats
2018-07-01实施
2017-12-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 中华人民共和 国
国家标准
化学品 品（抗）雄性性征短期筛选试验
大鼠Hershberger生物检测法
GB/T35526—2017
*
中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029) 北京市西城区三里河北街16号（100045)
网址www.spc.net.cn
总编室：(010)68533533发行中心：(010)51780238
读者服务部：（010)68523946 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷
各地新华书店经销
*
开本880×12301/16 印张0.75字数18千字 2018年1月第一版 2018年1月第一次印刷
*
书号：155066·1-58303定价 16.00元
如有印装差错由本社发行中心调换
版权专有侵权必究举报电话：(010)68510107 GB/T 35526—2017
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准与经济合作与发展组织（OECD）化学品测试方法NO.441《大鼠Hershberger生物检测
（抗）雄性性征短期筛选试验》[Hershbergerbioassayinrats：Ashort-termscreeningassayfor（anti） androgenicpropertiest)(2009)技术内容一致。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、复旦大学。 本标准主要起草人：姚丽芳、陈俊水、蒋伟、陈相、陈会明、张静、李蔚、缪文彬、赵颐晴、郑华、春华
I GB/T35526—2017
引言
1998年，OECD开始修订并发展检测和筛选内分泌干扰物的试验方法。上述活动之一就是发展了大鼠Hershberger生物筛选试验方法。通过在医药工业使用几十年后，1962年，该方法首次被官方专业委员会作为一种雄性激素化学品的标准筛选工具。2001年一2007年，Hershberger生物筛选试验进行了大量的验证项目：包括方法背景资料研究、具体试验方法汇总、解剖技术的发展以及实验室内部和实验室之间试验方法可靠性和重现性的验证研究。上述验证研究使用雄性激素参照物（丙酸睾丸酮）、 两种合成的雄性激素（醋酸去甲雄三烯醇酮和甲基丸素）、抗雄性激素药物（氟他胺）、天然雄性激素合成抑制剂（非那雄胺）、几种弱抗雄性激素农药（利谷隆、乙烯菌核利、速克灵和P，p-DDE)和5α-还原酶抑制剂（非那雄胺）和两种阴性对照物（二硝基苯酚和王基苯酚）。本标准是长期生物鉴定试验和验证试验的经验总结。
Hershberger生物筛选试验是一种使用雄性生殖系统中有关组织的短期在体筛选方法。试验始于 20世纪30年代，40年代的时候增加了雄性生殖系统中的雄性激素反应肌。20世纪60年代，使用标准方法对700多种可能的雄性激素进行了评估。本标准是基于检测去势后的雄性大鼠体内五种雄性激素依赖组织质量改变的一种筛选方法。本方法用于评估化学品类似雄性激素激动剂、雄性激素拮抗剂或者5α-还原酶抑制剂的生物活性。五种雄性激素依赖组织为腹侧前列腺（VP）、精囊（SV）（包括液体和凝固腺）、提肛肌-球海绵体肌复合体（LABC肌）、成对的尿道球腺（COW）和龟头（GP）。在去势的雄性大鼠中，受雄性激素的影响，上述五种组织的质量会发生相应增加。同一受试动物，使用雄性激素参照物后五种组织的质量均发生增长，再使用雄性激素拮抗剂能使五种组织的质量均发生下降。三个阶段的验证试验证实，Hershberger生物筛选试验的首选动物模型是去势的青春期前的雄性大鼠。
Hershberger生物筛选试验是一种雄性激素受体激动剂、雄性激素拮抗剂和5α-还原酶抑制剂的筛选方法。作为提供单一的内分泌机理数据的体内筛选试验方法被包括在OECD内分泌干扰化学品的测试和评估框架第3级中。本试验包含在内分泌干扰物体内和体外系列试验中，用于判断受试物是否对内分泌系统产生潜在干扰作用，从而导致人类健康和环境的危害。
考虑到动物福利，未经去势的刚断奶的雄性大鼠也可以作为Hershberger生物筛选的替代动物模型。这种方法也通过验证，但是，微量的抗雄性激素验证研究中未经去势的刚断奶的雄性大鼠不能够产生一致的响应。因此，本标准中并不包括这项试验的内容。
作为雄性激素受体的配体，雄性激素受体激动剂和拮抗剂可分别激活或抑制受体控制的基因转录
此外，在一些雄性激素的靶组织中，某些化学品会抑制睾酮转化为更有活性的二氢睾酮（5α-还原酶抑制剂）。这些物质有可能对生殖和发育产生不利影响。因此，需要迅速评估并评价化学品是否是雄性激素受体激动剂、拮抗剂或5α-还原酶抑制剂。虽然通过受体结合、体外报告基因的转录激活效应检测到的雄性激素配体对受体的亲和力与其产生危害有一定关系，但并不是潜在危害的决定性因素。其他因素还包括进人体内之后的代谢活化、灭活、靶器官中的分布情况和体内的清除情况。这就需要在筛选化学品的时候在相关的条件和暴露下进行。如果化学品的吸收一分布一代谢一清除（ADME）已知，则体内的评估就相对不重要一些。在雄性激素刺激下，去势的青春期前的雄性大鼠体内雄性激素依赖组织生长迅速、明显。啮齿类动物，特别是大鼠，广泛用于毒性危害研究。因此，本试验中，使用去势的青春期前的雄性大鼠和五种靶组织筛选雄性激素受体激动剂、拮抗剂和5α-还原酶抑制剂。
本标准的可信性和重现性是通过OECD实验室内部和实验室间的比对验证了的。所有的雄性激素和雄性激素拮抗剂的操作步骤均在本标准中体现。
虽然在检测抗雄性激素的验证试验中，不同实验室使用的丙酸睾丸酮剂量有所区别，分别为
Ⅱ GB/T35526—2017
0.2mg/（kg·d)或0.4mg/(kg·d）（皮下注射），但强抗雄性激素物质和弱抗雄性激素物质的检测结果表示不同剂量的丙酸睾丸酮试验结果没有差别。但是，应明确丙酸睾丸酮的剂量不应该太高，以免影响弱雄激素受体抗剂的作用，也不能太低，否则，即使没有雄性激素拮抗剂的情况下，雄性激素依赖组织也不发生质量变化。
单个雄性激素依赖组织的生长反应并不完全是由雄性激素引起的。即雄性激素激动剂之外的化合物可能改变特定组织的质量。然而，几个组织同时发生反应，则证明雄性激素的特定反应机理。例如：高剂量的雌激素可以增加精囊的质量，但不会增加其他雄性激素依赖组织的质量。抗雄性激素化学品既可以是雄性激素受体拮抗剂，也可以是5α-还原酶抑制剂。不同组织转化成二氢睾酮不同，因此5α 还原酶抑制剂对不同组织具有不同的效应。与雄性激素拮抗剂氟他胺相比，抑制5α-还原酶的抗雄性激素非那雄胺对腹侧前列腺作用更大。这种差异可用于区别是由于雄性激素受体介导的反应还是5α 还原酶的介导的反应。此外，在生物进化上，雄性激素受体与类固醇激素和其他激素有关，如加强类固醇的代谢、降低血清睾酮含量，也可能抑制雄性激素依赖组织的生长，因此，Hershberger生物筛选试验的任何阳性结果均应结合雄性激素受体和雌性激素受体结合试验、转录活化分析等体外试验或者检测类似雄性激素靶器官的体内试验，如雄性动物发育试验、15天成年雄性动物试验、28天或90天重复剂量试验进行综合评价。
经验表明，雄性激素比抗雄性激素更加罕见。因此，Hershberger生物筛选试验更广泛应用于抗雄性激素的筛选。然而，雄性激素检测方法可用于留体类或类固醇类化学品或者框架文件第1级或第2 级试验结果显示具有疑似雄性激素作用的化学品的检测。类似的，与(抗)雄性激素相关的危害可以在第5级试验中观察得到，用于评估化学物的危害是否与内分泌有关，
所有的动物相关的程序应该符合地方动物保护标准，本标准中描述的动物保护和使用标准都是最低标准，可被地方性法规代替。
目 GB/T35526—2017
化学品（抗）雄性性征短期筛选试验
大鼠Hershberger生物检测法
1范围
本标准规定了化学品（抗)雄性性征短期筛选试验大鼠Hershberger生物检测法的术语和定义、试验原理、试验方法与步骤、数据与报告
本标准适用于评估化学品类似雄性激素激动剂、雄性激素拮抗剂或5α-还原酶抑制剂的生物活性。
2规范性引用文件
下列文件对 本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注 主日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件
GB14925 实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用
3.1
雄性激素效应 androgenicity 化学品对雄性激素依赖组织的促进作用
3.2
抗雄性激素效应 antiandrogenicit 化学品抑制哺乳动物体内丙酸睾丸酮（TP，CAS号57-82-5)活性的作用
3.3
剂量dose 给予受试物的量。人 用每天单位体重动物给予受试物的质量来表示，即mg/(kg·d)。
3.4
用量dosage 包括剂量、染毒频率和染毒时间。
4试验原理
4.1通过检测五种雄性激素依赖组织在染毒前后质量的改变来评估化学品是否是雄性激素激动剂、雄性激素拮抗剂或者5α-还原酶抑制剂。五种雄性激素依赖组织包括腹侧前列腺（VP）、精囊（SV）（包括液体和凝固腺）、提肛肌-球海绵体肌复合体（LABC）、成对的尿道球腺（COW）和龟头（GP）。 4.2单个雄性激素依赖组织的生长反应并不完全是由雄性激素引起的，然而，几个组织同时发生生长反应，则可证明为雄性激素效应。为了达到其灵敏度，本标准采用去势雄性大鼠，这是因为去势雄性大鼠血液循环中内源性雄性激素水平低，使得下丘脑-垂体-性腺轴无法通过代偿机制进行补偿，从而使得组织对化学品的反应最大化，而且去势后能使其靶组织质量达到最小，从而使得组织初始质量的差异最
1 GB/T35526—2017
5.2去势
5.2.1由于42天前的大鼠包皮尚未分离，因此在动物出生后42天去势。 5.2.2在试验开始之前动物应适应几天。去势过程应使用麻醉，并无菌操作。动物麻醉后，在阴囊处切开，切除两侧睾丸和附睾，并结扎血管和输精管。确认无出血后，缝合阴囊。术后几天应使用止痛药，以减轻术后不适症状。如果直接购买去势实验动物，则应从供应商处获得有关动物年龄和性成熟的相关信息。 5.2.3动物在去势后应在实验室条件下至少继续适应7天再开始正式试验。适应期间每天观察动物，发现任何生病或生理缺陷的动物应剔除。去势动物首次染毒时间应在出生后第49天至第60天范围内。 5.3体重和随机分组
应避免使用体重过大或过小的动物。动物体重差异不应超过平均体重的士20%。动物应根据体重随机分组（包括对照组和受试物组）。 5.4剂量 5.4.1受试物一般设置两个剂量组，同时设置阳性对照组和阴性对照组。如果试验目的是获得剂量一一反应曲线或外推至更低剂量，则受试物至少设置三个剂量组。如果需要获得除雄性激素活性以外的信息（如效力评估），应考虑其他染毒方案。为检测抗雄性激素类物质，受试物应和雄性激素参照物同时给予。受试物至少设置三个剂量组，同时设置阳性对照组和阴性对照组。对照组动物除了不给予受试物外，其他操作与其他组一致。如果在染毒时使用某种赋形剂，则对照组给予的赋形剂量应为受试物组中最大的赋形剂量。 5.4.2所有剂量水平应根据受试物或相关物质已知的毒性数据或毒代动力学数据设定。最大染毒剂量的设定应首先考虑LDso值和/或急性毒性数据，以避免动物死亡或对动物造成严重伤害。其次，应考虑亚慢性和慢性毒性数据。通常，最大剂量不应导致动物体重下降超过对照组体重的10%。最大剂量连续10天染毒后不应产生明显毒性和伤害，不引起动物死亡[最大剂量不应超过1000mg/（kg·d)]。如果没有合适的数据，可先进行预试验以确定最终的染毒剂量。 5.4.3如果1000mg/（kg·d)的限度剂量下，生殖器官质量在统计学上未发生显著性差异，则无需要进行其他剂量试验。除非人类暴露资料显示需要使用更高剂量水平。 5.5参照物质和赋形剂 5.5.1雄性激素激动剂参照物为TP。参考剂量为0.2mg/(kg·d)或0.4mg/(kg·d)。雄性激素拮抗剂参照物为氟他胺（FT，CAS号1311-84-7）。剂量为3mg/(kg·d)，FT应与TP同时给予。 5.5.2赋形剂应首选水溶液/悬浮液。但因为大多数雄性激素配体或它们的代谢前体具有疏水性，常使用玉米油、花生油、芝麻油或橄榄油作为赋形剂制备溶液/悬浮溶液。受试物可先溶解于95%乙醇或其他适当的溶剂中，试验时再用赋形剂稀释到最终浓度。赋形剂的毒性信息应明确，并设置赋形剂对照组。如果受试物性质稳定，适当加热和充分搅拌有利于加速受试物溶解。应测试受试物在赋形剂中的稳定性。如果受试物在试验期间是稳定的，则可以先配制受试物的初始溶液，试验时再制备成相应的稀释浓度，以避免污染和损坏样品。 5.6染毒 5.6.1受试物通过灌胃或皮下注射给予。 5.6.2动物采用相同方式染毒。每隔24h染毒，连续染毒10天。每天根据动物体重计算染毒剂量，并
3