ICS13.300;13.020.40 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T35518—2017
化学品 土壤中的固有生物降解性试验
Chemicals-Inherent biodegradability in soil test
2017-12-29发布
2018-07-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布
3
连租 GB/T35518—2017
目 次
前言范围
1
2 规范性引用文件 3 术语和定义 4 受试物信息 5 试验原理 6 参比物质 7 试验方法概述 8 试验操作 9 质量保证与质量控制 10 数据与报告 GB/T 35518—2017
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准和经济合作与发展组织（OECD)化学品测试导则No.304A(1981年)《土壤中的固有生物降
解性》英文版)的技术性内容相同。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：环境保护部固体废物与化学品管理技术中心、北京师范大学、环境保护部南京环
境科学研究所、上海市检测中心、沈阳化工研究院安评中心、浙江省农业科学院、浙江省化工研究院、广东省微生物研究所。
本标准主要起草人：刘纯新、竺建荣、于丽娜、刘济宁、陈晓倩、蔡磊明、汤保华、刘新洋、曾国驱、 陈杰。 GB/T35518—2017
化学品土壤中的固有生物降解性试验
1范围
本标准规定了化学品土壤中的固有生物降解性试验的术语和定义、受试物信息、试验原理、参比物质、试验方法概述、试验操作、质量保证与质量控制、数据与报告。
本标准适用于测定C同位素标记的化学品在土壤微生物作用下的矿化率本标准适用于对土壤中微生物活性无明显抑制的挥发性或非挥发性、水溶性或非水溶性的化学品
（包括放射性标记物或非标记物）。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T21796 化学品活性污泥呼吸抑制试验 GB/T22228 工业用化学品固体及液体的蒸气压在10-1Pa至105Pa范围内的测定静态法 GB/T22229 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-3Pa至1Pa范围内的测定蒸气压平
衡法
GB/T27854 化学品土壤微生物 氮转化试验 GB/T27855 化学品土壤微生物 碳转化试验 GB/T27856 化学品土壤中好氧厌氧转化试验 OECD化学品测试导则No.104蒸气压（VapourPressure)
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
土壤soil 矿物和有机质的混合物。有机质包括含有碳、氮量较高的大分子化合物，并包含有活的小型生物
（大部分是微生物）。
注：土壤可以按以下两种状态处理：
a）原状土，随时间的推移，形成不同特性的土壤层； b）扰动土，通常在耕地时或挖掘取样时发生扰动的土壤，本标准的试验中用到的即为扰动土。
3.2
矿化过程mineralization 有机物分子的彻底降解。 注：在此过程中，标记的碳原子(1"C)被定量地氧化，并释放出相应数量的"CO，。
4 受试物信息
4.1必备信息
受试物必备信息包括：
1 GB/T35518—2017
a）14C在所标记分子结构中的位置和标记的特征； b) 蒸气压（GB/T22228、GB/T22229和OECD104）。
4.2 其他信息
其他指导信息包括：
受试物对微生物的抑制数据（GB/T21796）；
)
d) 受试物对土壤微生物的毒性（GB/T27854和GB/T27855）；
受试物在土壤中的厌氧降解数据（GB/T27856）。
e)
5试验原理
5.1 基本试验
经用1C标记的受试物处理的少量土样，放人生物计量瓶中，然后培养。 受试物降解释放的14CO 的量，经碱吸收后用液体闪烁计数仪测定。 5.2 供选试验 5.2.1 挥发试验
若受试物的蒸气压高于 0·0133Pa 的受试物 可挥发成分和挥发性代谢物，用于 体 闪烁计 5.2.2 残留试验
聚氨基甲酸乙酯泡沫塞，放天生物计量瓶，以吸收标记
将
当受试物矿化率达到50 %时对供试土壤进行提取。 受试物的可提取部分，及其留在土壤中的代谢产物的可提取部分，可用液体闪烁计数仪测定可通过灼烧主壤，然后测定释放的“CO，来取得有关结合残留物部分的矿化率数据 6参比物质
参比物质主要用于校准某个新方法是否可行，比对不同方法的结果
7试验方法概述
7.1 仪器设备
试验中可能需要下列仪器设备： a) 液体闪烁计数仪； b) 用于燃烧放射性物质的氧化器； c) 超声水浴，500mL以上； d) 生物计量瓶（见图1）包括：250mL锥形瓶，熔接的50mL圆底管；25mL注射器；15号注射针
头（国际通用标准，内径1.36mm），长15cm；100μL注射器；25mL具塞量筒； e) 1mL吸管； f) 索氏抽提装置； g) 液闪瓶（管）； h) 聚氨基甲酸乙酯塞，其直径为30mm，长30mm，密度16kg/m；
2 GB/T35518—2017
用于理化分析及生物检测的实验室常规设备和玻璃器具。
D
烧碱石棉剂滤器旋塞间
硅胶塞 15号注射针
生物计量瓶熔按测管的臂
生物计量瓶的锥形瓶部分
15号注号针的尖端
E
7.2化学试剂
试验中可能需要下列试剂 a）氢氧化钾、重铬酸钾 硫酸盐酸过氧化氢、焦磷酸钠（NPO均为分析纯 b）氯化钙（CaCl·2H.0氯化钡(BacL2H,①)氯化镁(MgCl6HO),均为分析纯; c）丙酮、甲醇正己烷 三乙醇胺，均为分析纯
指示剂：溴甲酚绿、甲基红；
d) e) 烧碱石棉剂； f) 闪烁液。
7.3 受试物溶液
将14C标记的受试物溶解于水或丙酮中，使放射性达到370Bg/μl1850Bq/μL。用未标记的受试物使该溶液达到所要求的浓度（例如：5μg/μL,相当于每干克土中含受试物约10mg;或视受试物的毒性而定）。 7.4试验用土壤 7.4.1土壤的选择 7.4.1.1淋溶土
pH值在5.5~6.5之间；有机碳含量在1%~1.5%之间；黏粒含量（颗粒直径<0.002mm）在10%~ 20%之间；土壤阳离子交换量在10cmol/kg~15cmol/kg。 7.4.1.2灰土
pH值在4.0~5.0之间；有机碳含量在1.5%~3.5%之间；黏粒含量≤10%；土壤阳离子交换量
3 GB/T35518—2017
<10cmol/kg。 7.4.1.3新成土
pH值在6.68.0之间；有机碳含量在1%～4%之间；黏粒含量在11%～25%之间；土壤阳离子交换量>10cmol/kg。 7.4.1.4其他土
在特殊情况下，宜增加另两种土壤进行试验，其中的一种含有较高含量的粉粒（直径在0.002mm~ 0.063mm之间），另一种含有较高含量的黏粒（30%）。 7.4.2土壤的准备
试验用土壤风干后在4℃贮存，再次吸收水分使土壤含水量达到最大持水量的40%，在22℃土 2℃的黑暗条件下培养两周，准备用于试验。 7.4.3土壤特性的测定方法 7.4.3.1测土壤pH的方法
将10g风干土样悬浮于25mL，浓度为0.01mol/LCaCl2溶液中。样品多次搅拌混匀，静置过夜，用pH计或电位计测定。在测定前，应用样品预期测定值范围内的两种pH值标准溶液对仪器进行校准。 7.4.3.2测定土壤中有机碳含量的方法
称量1g风干土置于容器中，加人15mL2mol/L的KzCr2O，溶液与20mL浓HzSO4（分析纯，密度1.84g/cm），在145℃～155℃加热15min，冷却至室温，用蒸馏水定容至150mL。离心后取 20mL上清液，以蒸馏水为空白对照，用1cm比色皿，于590nm波长下，进行分光光度测定。应用不加土壤的两份空白样品对照测定KCr2O，的自分解性。用式(1)计算土壤中有机碳含量：
C_1 000.V. E, .(E. -α..Ce.)
..(1)
e.E,.(α1-α2.F)
式中： c V E1 Cr2O3的换算系数（25.332）； E2 C的换算系数（3.0028）； E. 590nm及1cm光程条件下的消光值； F
有机碳含量，% 总体积，单位为毫升（mL)；
由Cr2O：计算KzCrzO，的系数；
Ccr Cr的浓度（19.356g/L）；
样品质量，单位为毫克（mg）；
e α1 Cr3+的消光系数，α1是校准曲线上独立测得的5个值的平均值，每个值由E，除CrzO3的
量（g）获得 Cr6+的消光系数，α2是两个独立估算值的平均值，每个值是由E分别除相应的KzCr2O，的量（g）获得。
α2
7.4.3.3 测定土壤粒径的方法
将10g风干土壤与100mLHzOz(15%W/V)混合15h，然后加热至CO2完全挥发。悬浊液加人 4