ICS 13.300;11.100 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T 27829—2011
化学品 体外皮肤腐蚀
膜屏障试验方法
Chemicals--In vitro test of skin corrosion-Membrane barrier method
2012-08-01实施
2011-12-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
发布 GB/T 27829—2011
前言
本标准按照GB/T1.1-一2009给出的规则起草。 本标准与经济合作与发展组织（OECD)化学品测试指南No.435(2006)《皮肤腐蚀性 体外膜屏障
试验方法》(英文版)技术性内容一致。
本标准做了下列结构和编辑性修改：
增加了范围一章；一将OECD435原文中的“介绍”部分放人本标准引言部分；
一一将OECD435原文中“附件：定义”中的部分内容作为本标准“2 2术语、定义和缩略语”
-计量单位改成我国法定计量单位。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、上海出入境检验检疫局、中国化
工经济技术发展中心。
本标准主要起草人：刘清君、邱璐、王晓兵、李小林、杨挺、蒋静。 GB/T 27829—2011
引言
皮肤腐蚀性指受试物作用后，皮肤出现不可逆损伤，表现为由表皮到真皮的明显坏死[联合国 (UN)全球化学品统一分类和标签制度(GHS)1]。本试验方法为不使用活体动物的体外方法。
原有的试验方法为选用免子的皮肤进行的体内试验方法（OECDTG404)[2)。OECD提出了很多体外试验方法用于腐蚀性物质检测，作为原有体内试验的替代方法。体外膜屏障法所使用的人工膜对腐蚀性物质的反应与动物暴露部位的皮肤对腐蚀性物质的反应类似。
传统的皮肤腐蚀性试验方法是把受试物涂抹到活体动物的皮肤上，经过一定时间后，通过评价组织的损伤程度来评价受试物的皮肤腐蚀性[2-3]。联合国GHS系统对皮肤腐蚀性的分级测试和评价策略允许使用验证过并被接受的体外试验方法[1]。在此分级测试和评价策略中，体外试验结果为阳性的受试物可以判定为蚀性物质，不需要进行动物试验，这样就减少和优化了试验中动物的使用。依据此策略，对于体外试验结果为阴性的受试物，还需进行其他的试验1。因此，使用体外试验方法检测受试物的魔蚀性避免了动物试验引起的痛苦和伤害。
Corrositex是已经通过验证并且商品化的体外膜屏障试验方法[46]。鉴于其公认的合理有效性，此试验方法已被推荐为评估化学品皮肤腐蚀性危害分级测试策略的一部分5]。新建的体外膜屏障试验方法用于皮肤腐蚀性检测前应确定该方法的可靠性、相关性（准确度）及其局限，以确保该方法与其他验证过的参考方法具有可比性[7-10]。
该方法的局限性在于[S1：基于最初的相容性试验结果，很多非腐蚀性的化学品或混合物，以及某些腐蚀性化学品或混合物无法使用该方法进行检测。虽然85%的pH值在4.5～8.5的化学品水溶液的动物试验结果都是无腐蚀性的[S]，但在上述pH范围内的化学品水溶液通常不适用于体外膜屏障法进行检测。体外膜屏障试验方法可以用于检测固体（包括能溶于水和不溶于水）、液体（包括水溶液和非水溶液)和乳剂。然而，在相容性试验中，很多受试化学品或混合物不出现可检测到的变化[即在参考方法中化学检测系统(CDS)出现颜色的改变丁，因此不适用于膜屏障方法，而应选择其他试验方法。受试物可以是纯品、稀释液、制剂或废弃物。样品无需前处理。
OECD共提供了三种检测皮肤腐蚀性的体外试验方法，除本标准外，其他两种分别为基于人重组皮肤模型(OECDTG431)[1]和分离大鼠皮肤模型(OECDTG430)[12]的试验方法。化学品皮肤腐蚀性体外膜屏障试验方法可用于GHS系统腐蚀性物质进一步的分类（子类别）和联合国危险货物运输包装分类（TransportPackingGroups）中腐蚀性危害的分类。
本方法适用于腐蚀性化学品或混合物的鉴别，以及对GHS系统中腐蚀性物质分类进行进--步细化（见正文表1）。另外，此方法也可用来判断一些特定种类的化学品是按照腐蚀性物质还是非腐蚀性物质来运输，如某些有机和无机酸、酸的衍生物、碱。本试验程序与验证过的参考实验方法类似 GB/T27829—2011
化学品体外皮肤腐蚀
膜屏障试验方法
1范围
本标准规定了化学品体外皮肤腐蚀性膜屏障试验方法的术语定义和缩略语、试验原理、试验方法、 试验数据和报告。
本标准适用于检测化学品皮肤腐蚀性。
2术语、定义和缩略语
2.1术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。 2.1.1
皮肤腐蚀性skincorrosion 受试物作用于皮肤后产生不可逆损伤，表现为从表皮到真皮的明显的坏死。
2. 1.2
准确度accuracy 测试方法的结果与可接受的参考值之间的一致程度，是对试验操作方法的一个衡量，也是相关性的
一个方面。“准确度”常可与“一致性”互换，均指一个试验方法得出的结果与真实结果的符合比例[7-8,10]。 2.1.3
假阴性率falsenegativerate 所有实际是阳性（活性），而根据试验判断为阴性结果的比例。假阴性率是一个试验操作的指标。
2.1.4
假阳性率falsepositiverate 所有实际是阴性（非-活性），而根据试验判断为阳性结果的比例。假阳性率是一个试验操作的
指标。 2.1.5
实验室之间试验的再现性inter-laboratoryreproducibility 评价不同实验室之间使用同样的方法对同样的受试物进行同样的试验，得到质量和数量上类似结
果的程度。在验证前和验证阶段确定实验室间的重复性，该重复性表明试验在两个实验室之间能够成功互认的程度，即指两个实验室间实验的重复性。 2, 1.6
参考标准performancestandards 为一种立足于验证后参考方法的标准。对于在功能和机制上类似的建议方法，此标准可提供评估
其“可比性”的基础。
注：内容包括：（1)必要试验方法的元件；（2)从用于证明参考方法为可接受操作的化学品清单中选择最少数量参考
物；和(3)准确度和可信度相应的水平，应该立足于与那些验证后参考方法的比较，建议方法的确立应通过使用最少数量参考物质试验来评估。
1 GB/T27829—2011
2. 1.7
参考物质referencechemicals 用于验证的物质。 注：参考物质在体内、体外的参考试验系统及目标种属上的反应是已知的。在试验方法有效性验证过程中用到的
参考物质在化学品分类中应具有代表性，对于选用的参考物质，应当能够代表从强到弱，再到阴性的所有程度的腐蚀性反应。不同阶段的验证过程，不同的试验方法，不同的试验目的，需要选用不同系列的参考物质。
2.1.8
相关性relevance 描述试验测试的目标效应对特定的试验目标是否有意义和是否有效的指标，即试验正确测量或预
测目标生物效应的程度。相关性表现为试验方法的准确度（一致性)[7-9]。 2. 1.9
可靠性reliability 描述不同时间，两个试验室或多个试验室使用相同的试验方法，试验结果重现性程度的指标。通过
计算实验室内和实验室间结果的重复性来评价可靠性-。 2.1.10
灵敏度sensitivity 试验判定的阳性（活性)物质与真正的阳性（活性）物质的比率。它是评价分类所用试验方法准确度
的指标。灵敏度是评估试验方法相关性的重要因素。 2.1.11
特异性specificity 通过试验确定的阴性物质占正确分级的阴性物质的比率。它是评价产生腐蚀性分类结果试验方法
准确性的标准，在评估试验方法的相关性时，特异性也是需要考虑的重要因素。 2.2缩略语
CDS：化学检测系统（chemicaldetectionsystem）注：配有指示剂溶液，溶液在受试物出现时能够发生反应的，且反应能够通过肉眼观察或电子设备检测的系统。这
些反应包括在受试物出现或发生某种化学或电化学反应时引起的一种或多种pH指示剂颤色的改变。 GHS：全球化学品统一分类和标签制度（GloballyHarmonizedSystemofClassificationandLabelling
of Chemicals)
注：根据标准的分类方法和对个人、公众及环境危害的水平，并考虑信息交流的方便（象形图、信号词、危害说明、防
范说明和安全数据单），将化学品（单一化学品和合物）进行分类，以便能够传达化学品所有的危害信息，保护相关人群（包括主、工人、运输人员、消费者和应急反应人员）和环境的制度1。
3试验原理
试验体系由人造大分子生物膜和CDS两部分组成。本试验方法假定生物膜上与活体皮肤上的腐蚀作用的机制相仿，将受试物作用于人工膜屏障的表面[5]，检测由腐蚀性受试物引起的膜屏障损伤。
可以通过多种方法检测膜屏障的渗透性，包括pH指示剂颜色的改变和指示剂溶液其他特性的改变。试验前应当首先确定膜屏障是有效的，即与试验目的是相关和可靠的。这包括确保所用膜屏障特性的一致性，如对非腐蚀性物质保持屏障功能的能力、对各类腐蚀性物质的分类能力。分类是依据受试物渗透通过膜屏障进入指示剂溶液的时间确定的。
4试验方法
4.1试验程序
以下的试验组成及步骤[7,15]，膜屏障及其兼容性试剂/指示剂、腐蚀性分类试剂可以自己制备，也可以购买商品化产品，如Corrositex。验证后的参考方法可以通过http：//iccvam.niehs.nih.gov查询。试验操作在环境温度17°C25℃中进行。 2 GB/T27829—2011
4.1.1受试物相容性试验
在进行膜屏障试验前，先进行相容性试验以判断CDS能否检测到受试物。如果CDS无法检测到受试物，该膜屏障试验方法不适于评价该受试物的腐蚀性，需要使用其他不同的试验方法。相容性试验使用的CDS以及暴露条件应该能够反映后面的膜屏障试验的暴露情况。 4.1.2受试物时间尺度分类试验
如果试验方法恰当，并且通过了相容性试验，则应确定受试物分类的时间尺度，即酸碱性强弱的筛
选试验。例如，在验证了的参考试验方法中，分类所需时间尺度试验根据是否检测到显著的酸碱储留，确定使用哪一个时间尺度。鉴定化学品的腐蚀性以及进行GHS皮肤腐蚀性分类时，要根据该化学品酸碱性的储留情况，选用两个不同的时间尺度。 4.1.3膜屏障试验
膜屏障试验主要的试验组件包括膜屏障和化学检测系统（CDS)。 4.1.3.1膜屏障
膜屏障由两部分组成：蛋白大分子水凝胶和渗透支持膜。液体和固体不能通过蛋白水凝胶，但发生横蚀作用后能够透过。构建完成的膜屏障应储存在一定的条件下，防止其变性，如于燥、微生物污染、移位、开裂等，从而影响使用。确定膜屏障的有效期，超过有效期，膜屏障不能使用。
在蛋白水凝胶制备和受试物试验期间，渗透支持膜对蛋白水凝胶起机械支撑作用。渗透支持膜要能够防止胶的下陷和移位，并对所有的受试物都具有较好的渗透性。
蛋白胶基质由角蛋白、胶原或蛋白质混合物构成，是受试物作用的靶。先将蛋白胶铺于支持膜的表
面，形成胶体面，然后将膜屏障置于指示剂溶液上。蛋白水凝胶的厚度和密度要均匀，不能有气泡或其他影响整体功能的缺陷。 4.1.3.2化学检测系统
指示剂溶液应当与相容性试验所用的相同，应当在受试物存在时发生反应。当受试物出现或发生
某些类型的化学或电化学反应时，一种pH指示剂或指示剂组合，如酚红和甲基橙，出现颜色的改变，在试验中可以使用这样的指示剂或指示剂组合。这种变化可以通过肉眼观察或电子设备检测。
研发的检测系统除了应当能够检测出受试物是否通过了膜屏障，还应当能够评价其精确度和可靠
性，说明其适用范围和检测限。
4.2试验操作 4.2.1试验部件的组装
膜屏障放置在一个装有指示剂溶液的小瓶（管）中，确保支持膜与指示剂溶液完全接触而且膜与液
面之闻没有气泡。小心操作，以确保膜的完整性，
4.2.2受试物
使用适量受试物，如500μL液体或500mg研细粉末[5]，小心地平铺在膜屏障表面并使之均匀分布。每个受试物及相应对照均需要一定数量的平行样，如四个平行样5]。记录受试物作用膜屏障的时间。平行样品的作用时间要相互错开，以确保能够精确记录较短的腐蚀时间。
3 GB/T27829—2011
4.2.3膜屏障渗透性的测定
合理监控每个平行试验，记录指示液颜色改变的时简，即膜通透性改变的时间。计算受试物开始作
用于膜屏障的时间和膜屏障通透性改变时间的差值。
4.2.4对照
试验中如果需要使用赋形剂或浴剂来溶解或分散受试物，那么赋形剂和溶剂要与膜屏障系统相容，
即不能改变膜屏障系统的完整性，也不能改变受试物的腐蚀性。为了证明溶剂（或赋形剂）与膜屏障系统具其有相容性，浴剂（或赋形剂）的对照试验要与受试物试验同时进行。用具有中等腐蚀性的化学品作为阳性（腐蚀性)对照物，如氢氧化钠（GHS腐蚀性分类为1B)7，阳性对照物应与受试物同时进行试验，以检测系统是否工作正常。第二种阳性对照物应当与受试物具有相同的分级，可用于评估腐蚀性物质的相对腐蚀活性。为了能够检测在相对于参考值，渗透性改变时间过长或过短时，试验系统是否工作正常，应当选择具有中等腐蚀性的阳性对照物（如腐蚀性分类为1B的物质）。因此，强腐蚀性物质 (GHS腐蚀性分类为1A的物质）和非腐蚀性物质要少用。GHS腐蚀性分类1B的物质可用于检测穿透时间过快或过慢的受试物。可以选用弱腐蚀性物质（GHS腐蚀性分类为1C的物质）作为阳性对照物，用来检测试验方法区分弱腐蚀性和无腐蚀性的物质的能力。除此之外，还应当参考渗透时间历史数据的变化，确定阳性对照值的范围（用平均值士2一3标准差表示）。在每一个试验中，应根据阳性对照的结果来精确判定渗透时间，剔除超出可接受范围的数值。阴性（非腐蚀性）对照物，如10%柠檬酸、 6%丙酸[7]，应与受试物同时试验，作为另一个质控措施证明膜屏障功能的完整性。 4.2.5可接受的标准
本标准中试验方法适用于腐蚀性化学品或混合物的鉴别，以及对GHS系统中腐蚀性物质分类到子类别（见表1)[1]。另外，此方法也可用来判断一些特定种类的化学品是按照腐蚀性物质还是非腐蚀性物质来运输，如某些有机和无机酸、酸的衍生物、碱[5,13-14]。本标准描述的试验程序与验证过的参考实验方法类似[5]。
表1联合国GHS皮肤腐蚀性类型及分类
腐蚀性类型 (类型1)
3只动物中至少1只表现出皮肤腐蚀性
腐蚀性分类
暴露 ≤3 min >3 min/≤1 h >1 h~≤4 h
观赛 ≤1 h 14 d ≤14 d
（适用于不使用亚类的权威机构） (仅适用于某些权威机构)
腐蚀性1A 腐蚀性1B 腐蚀性1C
腐蚀性
根据GHS腐蚀性分类规定的时间尺度，计算受试物开始作用于膜屏障到膜屏障渗透性改变的时间（以min计），用来预测受试物的腐蚀性。对于一个可接受的试验，与受试物同时进行的阳性对照应出现预期的渗透反应时间，同时进行的阴性对照不应表现出腐蚀性，如果有同时进行的溶剂对照，则溶剂对照不应出现腐蚀性也不应改变受试物的腐蚀性。依据本指南，在试验室使用某一试验方法进行常规检测之前，实验室可以用表2中推荐的12种化学品进行测试，证明其技术水平。如果新建的与参考方法结构和功能类似的新的试验方法[16]，则在新方法应用于物质检测之前，应按本标准附录A中描述的执行标准进行可靠性和精确度检验。
4 GB/T27829—2011
表2i 已知腐蚀性分类的化学品
化学物硝酸五氯化磷硒酸戊酰氯氢氧化钠
美国化学文摘服务社登记号
化学物分类无机酸无机酸前体无机酸酸性氨化物无机碱脂肪胺酸性氟化物有机铵盐脂肪族胺酚类
联合国GHS子类
1A 1A 1A 1B 1B 1B 1C 1c 1C NC NCb NCh
7697-372 1002613-8 7783-08-6 638-29-9 1310-73-2 140-31-8 98-09-9 10039-54-0 112-57-2 97-53-0 2664-55-3 144-55-8
1-(2-氮乙基)哌嗪氯化苯磺酰
硫酸羟胺四亚乙基戊胺丁香酚王基丙烯酸酯碳酸氢钠注：表中所列的12种物质涵盖三种蚀性物质GHS分类中的每一子类，并包含三种非腐蚀性物质。为了证明
丙烯酸酯类/异丁烯酸酯类
无机盐
结构和功能与参考方法类似的试验方法的准确度和可靠性，需要选择参考物质进行测试，表中的12种物质选自最小参考物质表中的40种物质（附录A)。这些化学品易于获得，其联合国GHS分类是基于高质量的体内试验的结果。
，相应的包装分类I，IⅡ，Ⅲ分别对应于联合国GHS分类1A，1B，1C。 非魔蚀性物质。
4.2.6结果解释和受试物腐蚀性分类
受试物开始作用于膜屏障到膜屏障渗透改变之间经过的时间（以min计）作为受试物腐蚀性分类[1]和联合国危险货物运输包装分类（如果适用)的依据17]。对每一个试验方法，都有三种腐蚀性分类的时间尺度。根据时间对受试物腐蚀性的判定应当使腐蚀性危害最小化，即减少假阴性结果的出现。
5试验数据和报告
5.1数据
以表格形式将受试物和阳性对照每-次试验的渗透时间（以min计)逐一列出，同时给出均数和标准差。 5.2 试验报告应包括以下信息 5.2.1 受试物和对照物：
识别及鉴定信息，美国化学文摘服务社登记号（ChemicalAbstractsService，CAS)（如已知）；物理性质和纯度（主要的杂质）；与试验相关的物化特性；试验前受试物/对照物质的处理（如适用），如加热、碾磨等；一稳定性（如已知）。
5 ICS 13.300;11.100 A 80
GB
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化学品 体外皮肤腐蚀
膜屏障试验方法
Chemicals--In vitro test of skin corrosion-Membrane barrier method
2012-08-01实施
2011-12-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
发布 GB/T 27829—2011
前言
本标准按照GB/T1.1-一2009给出的规则起草。 本标准与经济合作与发展组织（OECD)化学品测试指南No.435(2006)《皮肤腐蚀性 体外膜屏障
试验方法》(英文版)技术性内容一致。
本标准做了下列结构和编辑性修改：
增加了范围一章；一将OECD435原文中的“介绍”部分放人本标准引言部分；
一一将OECD435原文中“附件：定义”中的部分内容作为本标准“2 2术语、定义和缩略语”
-计量单位改成我国法定计量单位。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、上海出入境检验检疫局、中国化
工经济技术发展中心。
本标准主要起草人：刘清君、邱璐、王晓兵、李小林、杨挺、蒋静。 GB/T 27829—2011
引言
皮肤腐蚀性指受试物作用后，皮肤出现不可逆损伤，表现为由表皮到真皮的明显坏死[联合国 (UN)全球化学品统一分类和标签制度(GHS)1]。本试验方法为不使用活体动物的体外方法。
原有的试验方法为选用免子的皮肤进行的体内试验方法（OECDTG404)[2)。OECD提出了很多体外试验方法用于腐蚀性物质检测，作为原有体内试验的替代方法。体外膜屏障法所使用的人工膜对腐蚀性物质的反应与动物暴露部位的皮肤对腐蚀性物质的反应类似。
传统的皮肤腐蚀性试验方法是把受试物涂抹到活体动物的皮肤上，经过一定时间后，通过评价组织的损伤程度来评价受试物的皮肤腐蚀性[2-3]。联合国GHS系统对皮肤腐蚀性的分级测试和评价策略允许使用验证过并被接受的体外试验方法[1]。在此分级测试和评价策略中，体外试验结果为阳性的受试物可以判定为蚀性物质，不需要进行动物试验，这样就减少和优化了试验中动物的使用。依据此策略，对于体外试验结果为阴性的受试物，还需进行其他的试验1。因此，使用体外试验方法检测受试物的魔蚀性避免了动物试验引起的痛苦和伤害。
Corrositex是已经通过验证并且商品化的体外膜屏障试验方法[46]。鉴于其公认的合理有效性，此试验方法已被推荐为评估化学品皮肤腐蚀性危害分级测试策略的一部分5]。新建的体外膜屏障试验方法用于皮肤腐蚀性检测前应确定该方法的可靠性、相关性（准确度）及其局限，以确保该方法与其他验证过的参考方法具有可比性[7-10]。
该方法的局限性在于[S1：基于最初的相容性试验结果，很多非腐蚀性的化学品或混合物，以及某些腐蚀性化学品或混合物无法使用该方法进行检测。虽然85%的pH值在4.5～8.5的化学品水溶液的动物试验结果都是无腐蚀性的[S]，但在上述pH范围内的化学品水溶液通常不适用于体外膜屏障法进行检测。体外膜屏障试验方法可以用于检测固体（包括能溶于水和不溶于水）、液体（包括水溶液和非水溶液)和乳剂。然而，在相容性试验中，很多受试化学品或混合物不出现可检测到的变化[即在参考方法中化学检测系统(CDS)出现颜色的改变丁，因此不适用于膜屏障方法，而应选择其他试验方法。受试物可以是纯品、稀释液、制剂或废弃物。样品无需前处理。
OECD共提供了三种检测皮肤腐蚀性的体外试验方法，除本标准外，其他两种分别为基于人重组皮肤模型(OECDTG431)[1]和分离大鼠皮肤模型(OECDTG430)[12]的试验方法。化学品皮肤腐蚀性体外膜屏障试验方法可用于GHS系统腐蚀性物质进一步的分类（子类别）和联合国危险货物运输包装分类（TransportPackingGroups）中腐蚀性危害的分类。
本方法适用于腐蚀性化学品或混合物的鉴别，以及对GHS系统中腐蚀性物质分类进行进--步细化（见正文表1）。另外，此方法也可用来判断一些特定种类的化学品是按照腐蚀性物质还是非腐蚀性物质来运输，如某些有机和无机酸、酸的衍生物、碱。本试验程序与验证过的参考实验方法类似 GB/T27829—2011
化学品体外皮肤腐蚀
膜屏障试验方法
1范围
本标准规定了化学品体外皮肤腐蚀性膜屏障试验方法的术语定义和缩略语、试验原理、试验方法、 试验数据和报告。
本标准适用于检测化学品皮肤腐蚀性。
2术语、定义和缩略语
2.1术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。 2.1.1
皮肤腐蚀性skincorrosion 受试物作用于皮肤后产生不可逆损伤，表现为从表皮到真皮的明显的坏死。
2. 1.2
准确度accuracy 测试方法的结果与可接受的参考值之间的一致程度，是对试验操作方法的一个衡量，也是相关性的
一个方面。“准确度”常可与“一致性”互换，均指一个试验方法得出的结果与真实结果的符合比例[7-8,10]。 2.1.3
假阴性率falsenegativerate 所有实际是阳性（活性），而根据试验判断为阴性结果的比例。假阴性率是一个试验操作的指标。
2.1.4
假阳性率falsepositiverate 所有实际是阴性（非-活性），而根据试验判断为阳性结果的比例。假阳性率是一个试验操作的
指标。 2.1.5
实验室之间试验的再现性inter-laboratoryreproducibility 评价不同实验室之间使用同样的方法对同样的受试物进行同样的试验，得到质量和数量上类似结
果的程度。在验证前和验证阶段确定实验室间的重复性，该重复性表明试验在两个实验室之间能够成功互认的程度，即指两个实验室间实验的重复性。 2, 1.6
参考标准performancestandards 为一种立足于验证后参考方法的标准。对于在功能和机制上类似的建议方法，此标准可提供评估
其“可比性”的基础。
注：内容包括：（1)必要试验方法的元件；（2)从用于证明参考方法为可接受操作的化学品清单中选择最少数量参考
物；和(3)准确度和可信度相应的水平，应该立足于与那些验证后参考方法的比较，建议方法的确立应通过使用最少数量参考物质试验来评估。
1 GB/T27829—2011
2. 1.7
参考物质referencechemicals 用于验证的物质。 注：参考物质在体内、体外的参考试验系统及目标种属上的反应是已知的。在试验方法有效性验证过程中用到的
参考物质在化学品分类中应具有代表性，对于选用的参考物质，应当能够代表从强到弱，再到阴性的所有程度的腐蚀性反应。不同阶段的验证过程，不同的试验方法，不同的试验目的，需要选用不同系列的参考物质。
2.1.8
相关性relevance 描述试验测试的目标效应对特定的试验目标是否有意义和是否有效的指标，即试验正确测量或预
测目标生物效应的程度。相关性表现为试验方法的准确度（一致性)[7-9]。 2. 1.9
可靠性reliability 描述不同时间，两个试验室或多个试验室使用相同的试验方法，试验结果重现性程度的指标。通过
计算实验室内和实验室间结果的重复性来评价可靠性-。 2.1.10
灵敏度sensitivity 试验判定的阳性（活性)物质与真正的阳性（活性）物质的比率。它是评价分类所用试验方法准确度
的指标。灵敏度是评估试验方法相关性的重要因素。 2.1.11
特异性specificity 通过试验确定的阴性物质占正确分级的阴性物质的比率。它是评价产生腐蚀性分类结果试验方法
准确性的标准，在评估试验方法的相关性时，特异性也是需要考虑的重要因素。 2.2缩略语
CDS：化学检测系统（chemicaldetectionsystem）注：配有指示剂溶液，溶液在受试物出现时能够发生反应的，且反应能够通过肉眼观察或电子设备检测的系统。这
些反应包括在受试物出现或发生某种化学或电化学反应时引起的一种或多种pH指示剂颤色的改变。 GHS：全球化学品统一分类和标签制度（GloballyHarmonizedSystemofClassificationandLabelling
of Chemicals)
注：根据标准的分类方法和对个人、公众及环境危害的水平，并考虑信息交流的方便（象形图、信号词、危害说明、防
范说明和安全数据单），将化学品（单一化学品和合物）进行分类，以便能够传达化学品所有的危害信息，保护相关人群（包括主、工人、运输人员、消费者和应急反应人员）和环境的制度1。
3试验原理
试验体系由人造大分子生物膜和CDS两部分组成。本试验方法假定生物膜上与活体皮肤上的腐蚀作用的机制相仿，将受试物作用于人工膜屏障的表面[5]，检测由腐蚀性受试物引起的膜屏障损伤。
可以通过多种方法检测膜屏障的渗透性，包括pH指示剂颜色的改变和指示剂溶液其他特性的改变。试验前应当首先确定膜屏障是有效的，即与试验目的是相关和可靠的。这包括确保所用膜屏障特性的一致性，如对非腐蚀性物质保持屏障功能的能力、对各类腐蚀性物质的分类能力。分类是依据受试物渗透通过膜屏障进入指示剂溶液的时间确定的。
4试验方法
4.1试验程序
以下的试验组成及步骤[7,15]，膜屏障及其兼容性试剂/指示剂、腐蚀性分类试剂可以自己制备，也可以购买商品化产品，如Corrositex。验证后的参考方法可以通过http：//iccvam.niehs.nih.gov查询。试验操作在环境温度17°C25℃中进行。 2 GB/T27829—2011
4.1.1受试物相容性试验
在进行膜屏障试验前，先进行相容性试验以判断CDS能否检测到受试物。如果CDS无法检测到受试物，该膜屏障试验方法不适于评价该受试物的腐蚀性，需要使用其他不同的试验方法。相容性试验使用的CDS以及暴露条件应该能够反映后面的膜屏障试验的暴露情况。 4.1.2受试物时间尺度分类试验
如果试验方法恰当，并且通过了相容性试验，则应确定受试物分类的时间尺度，即酸碱性强弱的筛
选试验。例如，在验证了的参考试验方法中，分类所需时间尺度试验根据是否检测到显著的酸碱储留，确定使用哪一个时间尺度。鉴定化学品的腐蚀性以及进行GHS皮肤腐蚀性分类时，要根据该化学品酸碱性的储留情况，选用两个不同的时间尺度。 4.1.3膜屏障试验
膜屏障试验主要的试验组件包括膜屏障和化学检测系统（CDS)。 4.1.3.1膜屏障
膜屏障由两部分组成：蛋白大分子水凝胶和渗透支持膜。液体和固体不能通过蛋白水凝胶，但发生横蚀作用后能够透过。构建完成的膜屏障应储存在一定的条件下，防止其变性，如于燥、微生物污染、移位、开裂等，从而影响使用。确定膜屏障的有效期，超过有效期，膜屏障不能使用。
在蛋白水凝胶制备和受试物试验期间，渗透支持膜对蛋白水凝胶起机械支撑作用。渗透支持膜要能够防止胶的下陷和移位，并对所有的受试物都具有较好的渗透性。
蛋白胶基质由角蛋白、胶原或蛋白质混合物构成，是受试物作用的靶。先将蛋白胶铺于支持膜的表
面，形成胶体面，然后将膜屏障置于指示剂溶液上。蛋白水凝胶的厚度和密度要均匀，不能有气泡或其他影响整体功能的缺陷。 4.1.3.2化学检测系统
指示剂溶液应当与相容性试验所用的相同，应当在受试物存在时发生反应。当受试物出现或发生
某些类型的化学或电化学反应时，一种pH指示剂或指示剂组合，如酚红和甲基橙，出现颜色的改变，在试验中可以使用这样的指示剂或指示剂组合。这种变化可以通过肉眼观察或电子设备检测。
研发的检测系统除了应当能够检测出受试物是否通过了膜屏障，还应当能够评价其精确度和可靠
性，说明其适用范围和检测限。
4.2试验操作 4.2.1试验部件的组装
膜屏障放置在一个装有指示剂溶液的小瓶（管）中，确保支持膜与指示剂溶液完全接触而且膜与液
面之闻没有气泡。小心操作，以确保膜的完整性，
4.2.2受试物
使用适量受试物，如500μL液体或500mg研细粉末[5]，小心地平铺在膜屏障表面并使之均匀分布。每个受试物及相应对照均需要一定数量的平行样，如四个平行样5]。记录受试物作用膜屏障的时间。平行样品的作用时间要相互错开，以确保能够精确记录较短的腐蚀时间。
3 GB/T27829—2011
4.2.3膜屏障渗透性的测定
合理监控每个平行试验，记录指示液颜色改变的时简，即膜通透性改变的时间。计算受试物开始作
用于膜屏障的时间和膜屏障通透性改变时间的差值。
4.2.4对照
试验中如果需要使用赋形剂或浴剂来溶解或分散受试物，那么赋形剂和溶剂要与膜屏障系统相容，
即不能改变膜屏障系统的完整性，也不能改变受试物的腐蚀性。为了证明溶剂（或赋形剂）与膜屏障系统具其有相容性，浴剂（或赋形剂）的对照试验要与受试物试验同时进行。用具有中等腐蚀性的化学品作为阳性（腐蚀性)对照物，如氢氧化钠（GHS腐蚀性分类为1B)7，阳性对照物应与受试物同时进行试验，以检测系统是否工作正常。第二种阳性对照物应当与受试物具有相同的分级，可用于评估腐蚀性物质的相对腐蚀活性。为了能够检测在相对于参考值，渗透性改变时间过长或过短时，试验系统是否工作正常，应当选择具有中等腐蚀性的阳性对照物（如腐蚀性分类为1B的物质）。因此，强腐蚀性物质 (GHS腐蚀性分类为1A的物质）和非腐蚀性物质要少用。GHS腐蚀性分类1B的物质可用于检测穿透时间过快或过慢的受试物。可以选用弱腐蚀性物质（GHS腐蚀性分类为1C的物质）作为阳性对照物，用来检测试验方法区分弱腐蚀性和无腐蚀性的物质的能力。除此之外，还应当参考渗透时间历史数据的变化，确定阳性对照值的范围（用平均值士2一3标准差表示）。在每一个试验中，应根据阳性对照的结果来精确判定渗透时间，剔除超出可接受范围的数值。阴性（非腐蚀性）对照物，如10%柠檬酸、 6%丙酸[7]，应与受试物同时试验，作为另一个质控措施证明膜屏障功能的完整性。 4.2.5可接受的标准
本标准中试验方法适用于腐蚀性化学品或混合物的鉴别，以及对GHS系统中腐蚀性物质分类到子类别（见表1)[1]。另外，此方法也可用来判断一些特定种类的化学品是按照腐蚀性物质还是非腐蚀性物质来运输，如某些有机和无机酸、酸的衍生物、碱[5,13-14]。本标准描述的试验程序与验证过的参考实验方法类似[5]。
表1联合国GHS皮肤腐蚀性类型及分类
腐蚀性类型 (类型1)
3只动物中至少1只表现出皮肤腐蚀性
腐蚀性分类
暴露 ≤3 min >3 min/≤1 h >1 h~≤4 h
观赛 ≤1 h 14 d ≤14 d
（适用于不使用亚类的权威机构） (仅适用于某些权威机构)
腐蚀性1A 腐蚀性1B 腐蚀性1C
腐蚀性
根据GHS腐蚀性分类规定的时间尺度，计算受试物开始作用于膜屏障到膜屏障渗透性改变的时间（以min计），用来预测受试物的腐蚀性。对于一个可接受的试验，与受试物同时进行的阳性对照应出现预期的渗透反应时间，同时进行的阴性对照不应表现出腐蚀性，如果有同时进行的溶剂对照，则溶剂对照不应出现腐蚀性也不应改变受试物的腐蚀性。依据本指南，在试验室使用某一试验方法进行常规检测之前，实验室可以用表2中推荐的12种化学品进行测试，证明其技术水平。如果新建的与参考方法结构和功能类似的新的试验方法[16]，则在新方法应用于物质检测之前，应按本标准附录A中描述的执行标准进行可靠性和精确度检验。
4 GB/T27829—2011
表2i 已知腐蚀性分类的化学品
化学物硝酸五氯化磷硒酸戊酰氯氢氧化钠
美国化学文摘服务社登记号
化学物分类无机酸无机酸前体无机酸酸性氨化物无机碱脂肪胺酸性氟化物有机铵盐脂肪族胺酚类
联合国GHS子类
1A 1A 1A 1B 1B 1B 1C 1c 1C NC NCb NCh
7697-372 1002613-8 7783-08-6 638-29-9 1310-73-2 140-31-8 98-09-9 10039-54-0 112-57-2 97-53-0 2664-55-3 144-55-8
1-(2-氮乙基)哌嗪氯化苯磺酰
硫酸羟胺四亚乙基戊胺丁香酚王基丙烯酸酯碳酸氢钠注：表中所列的12种物质涵盖三种蚀性物质GHS分类中的每一子类，并包含三种非腐蚀性物质。为了证明
丙烯酸酯类/异丁烯酸酯类
无机盐
结构和功能与参考方法类似的试验方法的准确度和可靠性，需要选择参考物质进行测试，表中的12种物质选自最小参考物质表中的40种物质（附录A)。这些化学品易于获得，其联合国GHS分类是基于高质量的体内试验的结果。
，相应的包装分类I，IⅡ，Ⅲ分别对应于联合国GHS分类1A，1B，1C。 非魔蚀性物质。
4.2.6结果解释和受试物腐蚀性分类
受试物开始作用于膜屏障到膜屏障渗透改变之间经过的时间（以min计）作为受试物腐蚀性分类[1]和联合国危险货物运输包装分类（如果适用)的依据17]。对每一个试验方法，都有三种腐蚀性分类的时间尺度。根据时间对受试物腐蚀性的判定应当使腐蚀性危害最小化，即减少假阴性结果的出现。
5试验数据和报告
5.1数据
以表格形式将受试物和阳性对照每-次试验的渗透时间（以min计)逐一列出，同时给出均数和标准差。 5.2 试验报告应包括以下信息 5.2.1 受试物和对照物：
识别及鉴定信息，美国化学文摘服务社登记号（ChemicalAbstractsService，CAS)（如已知）；物理性质和纯度（主要的杂质）；与试验相关的物化特性；试验前受试物/对照物质的处理（如适用），如加热、碾磨等；一稳定性（如已知）。
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