ICS 13.300;11.100 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T 27819—2011
化学品 体外哺乳动物细胞转化试验方法
Chemicals-Test method of in vitro mammalian cell transformation
2012-08-01实施
2011-12-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T 27819--2011
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准与欧盟委员会440/2008法规：欧洲议会和欧盟理事会关于化学品注册、评估、许可和限制
(REACH)的第1907/2006号法规的测试方法法规的方法B.21（2008年）《体外哺乳动物细胞转化试验》(英文版)技术性内容致，
本标准作了下列结构和编辑性修改：一增加了范围一章；一一计量单位改成我国法定计量单位。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、北京市疾病预防控制中心、中国
化工经济技术发展中心。
本标准主要起草人：穆效群、李朝林、王晓兵、熊晓燕、赵素娟、吴维。
I GB/T27819—2011
化学品体外哺乳动物细胞转化试验方法
1范围
本标准规定了化学品体外哺乳动物细胞转化试验的试验原则、试验方法、试验数据和报告。 本标准可以作为化学品的致癌作用的替代检测方法。
2试验原则
哺乳动物细胞培养试验系统可用于检测化学品引起的表型改变，这种改变与其在体内系统的恶性转化有关。广泛使用的细胞株包括C3H10T1/2、3T3、SHE、大鼠Fischer细胞，主要观察细胞的形态、 在软琼脂中转化灶的形成或锚着独立性的改变。该系统还用于检测细胞暴露于化学品后的其他一些生理和形态学改变，但应用不广泛。目前尚无任何体外试验检测终点被证实与癌症发生机制有明确关系。 某些检测系统可以检出促癌剂。通过测定受试物对克隆形成能力(克隆形成率)或培养细胞的生长率的影响可反映其细胞毒性的大小，故可通过计算染毒与毒性作用的相关性评价细胞毒性，但由于有些试验需要延长培养时间或更换培养血，因此，有时细胞毒性数据不能用于计算转化率。
3试验方法
3.1试验准备 3.1.1细胞
很多细胞株和原代细胞都可作为受试细胞，应根据所选择的转化试验方法选择适宜的细胞种类。 试验前，研究者应保证受试细胞接触致癌物后会产生相应的表型改变，本实验室还应有记录表明这种表型改变是有效、可靠的。 3.1.2培养基（液）
所用培养基和实验条件应适合细胞转化试验。 3.1.3受试物
在细胞染毒前，受试物应与培养基混合均匀，也可用适当的溶剂先溶解或制成悬浮液。培养基中溶剂的终浓度不应对细胞活性、生长率或转化率造成影响。 3.1.4代谢活化
细胞应分别在有、无适宜代谢活化系统存在的条件下染毒；当所用细胞类型自身具备代谢活化能力时，则应考虑其活化特点是否适合受试物的化学特性。 3.2试验条件 3.2.1阴性对照和阳性对照
每个试验中均应分别选用一个直接作用的化合物和一个需要代谢活化的化合物作为阳性对照。另
1 GB/T27819-2011
设阴性(溶剂)对照。
可作为阳性对照化合物： a）直接作用类：
1）甲基磺酸乙酯（Ethylmethanesulphonate）； 2）β-丙内酯（β-propiolactone）。
b）间接作用类：
1）2-乙酰氨基荔（2-acetylaminofluorene)； 2）4-二甲胺基偶氮苯（4-dimethylaminoazobenzene）； 3）7，12-二甲基苯并葱（7，12-dimethylbenzanthracene）。
必要时，还应另设一个与受试物的同类化合物作为阳性对照。 3.2.2染毒浓度
应设多个受试物的浓度点。这些设计浓度应可产生浓度依赖的毒性作用，即最高浓度组应使细胞存活率降低而最低浓度组细胞的存活率与阴性对照基本一致。对在水中溶解性低的受试物，应采取适当措施使其达到饱和浓度。溶于水的低毒受试物最高浓度根据具体情况确定。 3.3试验步骤
根据所选试验系统确定适宜的染毒时间，如染毒时间延长，则需换培养基，并在更换时重新调整受试物浓度（如需要，应加人新鲜配制的代谢活化混合物）。对自身无代谢活化能力的细胞应分别在有或无代谢活化系统存在的条件下染毒受试物，染毒结束后，应洗去受试物，并在适合细胞表型转化的条件下进行培养并观察其转化发生率。所有的结果都是在一个独立的实验下完成的。
4试验数据
所有试验数据应以表格的形式列出，根据所选方法确定指标，例如：平血计数、阳性平血数、转化细胞数等。存活率(Survival)最好以对照存活细胞数百分数表示，转化率以每一定数量存活细胞中的转化细胞数表示。应选用合适的统计学方法对数据进行统计处理。
5试验报告
只要可能，报告应包括以下内容：
选用细胞的类型，培养的细胞数，细胞培养方法；一试验条件：受试物浓度，所用溶剂，孵育时间，受试物处理的持续时间和次数，处理时的细胞密度，所用的外源性代谢活化系统种类，阴性和阳性对照，所检表型特征说明，选用的选择系统（适用时），剂量设计的理由；一用于判别和计数存活及转化细胞的方法；统计学分析；结果讨论；一结果解释。
2 ICS 13.300;11.100 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T 27819—2011
化学品 体外哺乳动物细胞转化试验方法
Chemicals-Test method of in vitro mammalian cell transformation
2012-08-01实施
2011-12-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T 27819--2011
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准与欧盟委员会440/2008法规：欧洲议会和欧盟理事会关于化学品注册、评估、许可和限制
(REACH)的第1907/2006号法规的测试方法法规的方法B.21（2008年）《体外哺乳动物细胞转化试验》(英文版)技术性内容致，
本标准作了下列结构和编辑性修改：一增加了范围一章；一一计量单位改成我国法定计量单位。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、北京市疾病预防控制中心、中国
化工经济技术发展中心。
本标准主要起草人：穆效群、李朝林、王晓兵、熊晓燕、赵素娟、吴维。
I GB/T27819—2011
化学品体外哺乳动物细胞转化试验方法
1范围
本标准规定了化学品体外哺乳动物细胞转化试验的试验原则、试验方法、试验数据和报告。 本标准可以作为化学品的致癌作用的替代检测方法。
2试验原则
哺乳动物细胞培养试验系统可用于检测化学品引起的表型改变，这种改变与其在体内系统的恶性转化有关。广泛使用的细胞株包括C3H10T1/2、3T3、SHE、大鼠Fischer细胞，主要观察细胞的形态、 在软琼脂中转化灶的形成或锚着独立性的改变。该系统还用于检测细胞暴露于化学品后的其他一些生理和形态学改变，但应用不广泛。目前尚无任何体外试验检测终点被证实与癌症发生机制有明确关系。 某些检测系统可以检出促癌剂。通过测定受试物对克隆形成能力(克隆形成率)或培养细胞的生长率的影响可反映其细胞毒性的大小，故可通过计算染毒与毒性作用的相关性评价细胞毒性，但由于有些试验需要延长培养时间或更换培养血，因此，有时细胞毒性数据不能用于计算转化率。
3试验方法
3.1试验准备 3.1.1细胞
很多细胞株和原代细胞都可作为受试细胞，应根据所选择的转化试验方法选择适宜的细胞种类。 试验前，研究者应保证受试细胞接触致癌物后会产生相应的表型改变，本实验室还应有记录表明这种表型改变是有效、可靠的。 3.1.2培养基（液）
所用培养基和实验条件应适合细胞转化试验。 3.1.3受试物
在细胞染毒前，受试物应与培养基混合均匀，也可用适当的溶剂先溶解或制成悬浮液。培养基中溶剂的终浓度不应对细胞活性、生长率或转化率造成影响。 3.1.4代谢活化
细胞应分别在有、无适宜代谢活化系统存在的条件下染毒；当所用细胞类型自身具备代谢活化能力时，则应考虑其活化特点是否适合受试物的化学特性。 3.2试验条件 3.2.1阴性对照和阳性对照
每个试验中均应分别选用一个直接作用的化合物和一个需要代谢活化的化合物作为阳性对照。另
1 GB/T27819-2011
设阴性(溶剂)对照。
可作为阳性对照化合物： a）直接作用类：
1）甲基磺酸乙酯（Ethylmethanesulphonate）； 2）β-丙内酯（β-propiolactone）。
b）间接作用类：
1）2-乙酰氨基荔（2-acetylaminofluorene)； 2）4-二甲胺基偶氮苯（4-dimethylaminoazobenzene）； 3）7，12-二甲基苯并葱（7，12-dimethylbenzanthracene）。
必要时，还应另设一个与受试物的同类化合物作为阳性对照。 3.2.2染毒浓度
应设多个受试物的浓度点。这些设计浓度应可产生浓度依赖的毒性作用，即最高浓度组应使细胞存活率降低而最低浓度组细胞的存活率与阴性对照基本一致。对在水中溶解性低的受试物，应采取适当措施使其达到饱和浓度。溶于水的低毒受试物最高浓度根据具体情况确定。 3.3试验步骤
根据所选试验系统确定适宜的染毒时间，如染毒时间延长，则需换培养基，并在更换时重新调整受试物浓度（如需要，应加人新鲜配制的代谢活化混合物）。对自身无代谢活化能力的细胞应分别在有或无代谢活化系统存在的条件下染毒受试物，染毒结束后，应洗去受试物，并在适合细胞表型转化的条件下进行培养并观察其转化发生率。所有的结果都是在一个独立的实验下完成的。
4试验数据
所有试验数据应以表格的形式列出，根据所选方法确定指标，例如：平血计数、阳性平血数、转化细胞数等。存活率(Survival)最好以对照存活细胞数百分数表示，转化率以每一定数量存活细胞中的转化细胞数表示。应选用合适的统计学方法对数据进行统计处理。
5试验报告
只要可能，报告应包括以下内容：
选用细胞的类型，培养的细胞数，细胞培养方法；一试验条件：受试物浓度，所用溶剂，孵育时间，受试物处理的持续时间和次数，处理时的细胞密度，所用的外源性代谢活化系统种类，阴性和阳性对照，所检表型特征说明，选用的选择系统（适用时），剂量设计的理由；一用于判别和计数存活及转化细胞的方法；统计学分析；结果讨论；一结果解释。
2