ICS 71.040 N 04
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T32268—2015
十八烷基键合相（C18）高效液相色谱柱
性能测定方法
Method of performance testing for octadecyl bonded(C18) high performance
liquid chromatography(HPLC) column
2016-07-01实施
2015-12-10发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T 32268—2015
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出本标准由全国仪器分析测试标准化技术委员会（SAC/TC481)归口。 本标准负责起草单位：天津博纳艾杰尔科技有限公司。 本标准参加起草单位：中国分析测试协会、北京大学、中国科学院化学研究所、中国计量科学研究
院、中国食品药品检定研究院、北京有色金属研究总院、沃特世科技（上海）有限公司、大连依利特分析仪器有限公司、北京金欧亚科技发展有限公司。
本标准主要起草人：王宛、汪群杰、赵羽、张学云、张庆合、刘国铨、刘虎威、胡昌勤、汪正范、蔡会霞、 汪若梅。
- GB/T32268—2015
十八烷基键合相（C18）高效液相色谱柱
性能测定方法
1范围
本标准规定了十八烷基键合相高效液相色谱柱（简称"C18HPLC柱”)性能的测定方法。 本标准适用于C18HPLC柱性能的测定
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9008 液相色谱法术语柱色谱法和平面色谱法 GB/T32267分析仪器性能测定术语 JJG705液相色谱仪检定规程
3术语和定义
GB/T9008和GB/T32267界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1
十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱 Eoctadecylbonded high performance liquid chromatography column
装有键合十八烷基的固定相的高效液相色谱柱。
3.2
柱内径columninternaldiameter 色谱柱柱管的内径。
3.3
疏水保留因子 retention factor of hydrophobicity an 表征C18固定相的C18烷基链的相对数量的参数，与填料颗粒的比表面积和表面碳覆盖率有关。
3.4
疏水选择性因子 selectivity factor of hydrophobicity α hp 表征C18固定相对被分离物质分子疏水基团的选择识别能力的参数，与填料颗粒的表面碳覆盖率
有关。 3.5
立体选择性因子 steric selectivity factor α ss 表征C18固定相对被分离物质分子形状的选择识别能力的参数，与填料颗粒表面的官能团键合度
1 GB/T32268—2015
和碳覆盖率有关。 3.6
氢键容量因子hydrogenbondingcapacityfactor αH 表征C18固定相的氢键作用的参数，与纯水中填料颗粒表面残留的游离硅羟基数量有关。
3.7
总离子交换容量因子totalionexchangecapacityfactor αB 表征C18固定相在pH7.60的流动相中离子交换能力的参数，与填料颗粒表面的硅羟基数量及其
他离子交换位点的数量有关。 3.8
酸性环境中离子交换容量因子 子ionexchange capacityfactor in acidic solution αA 表征C18固定相在pH2.60的流动相中离子交换能力的参数，与在pH2.60时填料颗粒表面的离
子交换位点的数量有关。 3.9
金属活性因子metalactivityfactor Q M 表征C18固定相表面杂质金属的含量及配位能力的参数。
3.10
酸性化合物选择性因子selectivityfactorforacidiccompound α SA 表征C18固定相对酸性化合物和中性化合物的分离能力的参数。在实际测定中，其下标中可标示
出具体测定物质的名称，如αs苯酪。 3.11
碱性化合物选择性因子selectivityfactorforbasiccompound α SB 表征C18固定相对碱性化合物和中性化合物的分离能力的参数。在实际测定中，其下标中可标示
出具体测定物质的名称，如αs阿米替林。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂的级别应不低于分析纯级，水的级别符合GB/T6682一级水的规定。 4.1 甲醇（CH3OH)：色谱纯。 4.2 乙腈（CHCN）：色谱纯。 4.3 磷酸二氢钾（KH2PO。）。 4.4 磷酸（HPO）。 4.5 氢氧化钠（NaOH)。 4.6 氢氧化钾（KOH)。 4.7 三氟乙酸（CFCOOH）。 4.8 三乙胺（CHisN）。 4.9 尿嘧啶（CH,N2O2）。 4.10 正丁基苯（Cl。H14）。
2 GB/T 32268—2015
2） 当色谱柱的柱内径大于或等于2.1mm且小于或等于4.6mm时，连接管线的内径为
0.18mm。 3） 当色谱柱的柱内径大于4.6mm且小于21.2mm时，连接管线的内径为0.25mm。 4）当色谱柱的柱内径大于或等于21.2mm时，连接管线的内径为0.5mm。
5.2分析天平
准确度级别为I级，实际标尺分度值0.1mg。 5.3移液器
量程分别为0.1mL~1.0mL和1.0mL~10.0mL。
5.4量筒
规格为500.0mL。 5.5容量瓶
规格分别为10.0mL、100.0mL和500.0mL。 5.6pH计
精度为0.01。
6条件
6.1仪器工作条件 6.1.1 环境温度：15℃~30℃。 6.1.2相对湿度：20%~80%。 6.1.3供电电源：交流220V士22V，频率50Hz士0.5Hz。 6.1.4室内应清洁无尘，具有良好的通风装置，无易燃、易爆和腐蚀性气体。 6.1.5仪器应平稳地放在工作台上，周围无影响仪器使用的振动和电磁干扰，仪器接地良好。 6.2试验准备条件 6.2.1试验用计量仪器、仪表和玻璃器血均应按有关规定，经计量检定单位检定合格并满足量程和精度的要求。 6.2.2在试验前将满足5.1要求的高效液相色谱仪调整至正常工作状态，按照各项性能指标测定所需的液相色谱条件设定好仪器参数，配制好流动相。将选定好的C18HPLC柱通过连接管线正确地连接在液相色谱仪的进样器和检测器之间。 6.2.3启动高效液相色谱仪的泵，进行排气等操作。同时检查各管路接口，确保没有漏液的情况。以至少10倍柱体积的流动相平衡色谱柱，待基线平稳后，可以进行测定工作。
7性能指标的测定 7.1总则
分别测定C18HPLC柱的疏水性、立体选择性、氢键容量、总离子交换容量、酸性环境中离子交换
4 GB/T32268—2015
容量、金属敏感性、酸/碱性化合物的选择性、碱性化合物峰型对称性、柱效、100%水耐受性、低pH值耐受性和高pH值耐受性。测定时，部分液相色谱条件参数的设定办法参考附录A。 7.2疏水性的测定 7.2.1测试用溶液的配制
称取5.0mg尿嘧啶，量取2.50mL正丁基苯和2.50mL正戊基苯，一起用甲醇溶解并定容于 100.0mL的容量瓶中，作为储备液。另取1.0mL储备液，用甲醇定容至10.0mL的容量瓶，得到疏水性测试用溶液。 7.2.2液相色谱条件
流动相：甲醇：水=80：20（体积分数）；流速：参考附录A；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样体积：参考附录A。
7.2.3 3测定步骤
进样疏水性测试用溶液，等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完，至少1.0min后，停止本次检测。记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值（需精确到0.01min），按式（1)及式（2)计算疏水保留性因子αn和疏水选择性因子αhp。重复测定3次，取平均值。
tR成基苯 东—tR深嘧院
....(1)
αn
tR尿曙啶 tR皮基苯—tR尿嗜啶
( 2)
α hp tRT基苯—tR尿嗜啶
式中： tR基巢 戊基苯的保留时间，单位为分（min）； tRT基* 丁基苯的保留时间，单位为分（min）； tR原嘧啶 尿嘧啶的保留时间，单位为分（min）。
7.3立体选择性的测定 7.3.1测试用溶液的配制
分别称取5.0mg尿嘧啶，50.0mg邻三联苯，50.0mg苯并菲，用甲醇溶解并定容于100.0mL的容量瓶中，作为储备液。另取1.0mL储备液，用甲醇定容至10.0mL的容量瓶，得到立体选择性测试用溶液。 7.3.2 2液相色谱条件
流动相：甲醇：水=80：20（体积分数）；流速：参考附录A；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样体积：参考附录A。
5 GB/T32268—2015
7.3.3 测定步骤
进样立体选择性测试用溶液，等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完，至少1.0min后，停止本次检测。
记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值（需精确到0.01min），按式（3)计算立体选择性因子αss。 重复测定3次，取平均值。
tR茉并菲 非—tR尿谱啶
.(3)
α ss= tR邻气联米 —tR尿密院
式中： tR茅井菲 tR邻三联案 邻三联苯的保留时间，单位为分（min）； tR泵密啶 尿嘧啶的保留时间，单位为分（min）。
苯并菲的保留时间，单位为分（min）；
7.4氢键容量的测定 7.4.1 测试用溶液的配制
分别称取5.0mg尿嘧啶、50.0mg咖啡因和300.0mg苯酚，用甲醇溶解并定容于100.0mL的容量瓶中，作为储备液。另取1.0mL储备液，用甲醇定容至10.0mL的容量瓶，得到氢键容量测试用溶液。 7.4.2 2测定条件
流动相：甲醇：水=30：70（体积分数）；流速：参考附录A；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样体积：参考附录A。
7.4.3 3测定步骤
进样氢键容量测试用溶液，等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完，至少1.0min后，停止本次检测。
记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值（需精确到0.01min），按式（4)计算氢键容量因子αH。重复测定3次，取平均值。
tR咖啡因 时-tR尿曙院 tR苯酚TR保噻啶
...(4)
αH=
式中： tR咖啡因 咖啡因的保留时间，单位为分（min）；
苯酚的保留时间，单位为分（min）；
tR苯酷 tR尿嘧啶 尿嘧啶的保留时间，单位为分（min）。
7.5 总离子交换容量的测定 7.5.1测试用溶液的配制
分别称取5.0mg尿嘧啶、300.0mg苯酚，量取1.50mL苯胺，一起溶解于甲醇并定容于100.0mL 的容量瓶中，作为储备液。另取1.0mL储备液，用甲醇定容至10.0mL的容量瓶，得到离子交换容量测试用溶液。
6