ICS 73.080 Q64 备案号：30024－2011
JC
中华人民共和国建材行业标准
JC/T542—2010 代替JC/T542—1994
滑石粉微生物学检验方法
Method of microbiology examination for talc powder
2011~03-01实施
2010-11-22发布
中华人民共和国工业和信息化部发布 JC/T5422010
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替JC/T542—1994《滑石粉微生物学检验方法》，与JC/T542--1994相比，主要技术变化
如下：
在3.3供试液的制备方法中，将“生理盐水”修改为"pH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液”；将“霉菌和酵母菌数测定方法”修改为“真菌总数测定方法”（见第5章，1994年版的第5章）；将“绿脓杆菌检验方法”修改为“铜绿假单胞菌检验方法”（见第7章，1994年版的第7章）；将“绿脓杆菌试验”修改为“铜绿假单胞菌素试验”（见7.5.6，1994年版的7.5.6）；将培养基和试剂中“虎红琼脂培养基”修改为“沙保罗琼脂培养基”（见5.3，1994年版的5.3）；一将附录中“虎红琼脂培养基的成分和制备方法”修改为“沙保罗琼脂培养基的成分和制备方法” （见附录A.2，1994年版的附录A.2）；将附录中甘露醇发酵培养基成分中的“甘露醇”修改为"D-甘露醇”（见附录A.16，1994年版的 A.16); -将附录中多个培养基制法中的pH值，由单一定值修改为有偏差范围的取值（见附录A.3、 A.9、A.10、A.11、A.12、A.13、A.16,1994年版的附录A中）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国建筑材料联合会提出。 本标准由全国非金属矿产品及制品标准化技术委员会（SAC/TC406）归口。 本标准起草单位：威阳非金属矿研究设计院。 本标准主要起草人：潘宇清、潘昱成。 本标准1994年首次发布，本版是第一次修订。
I JC/T542-2010
滑石粉微生物学检验方法
1范围
本标准规定了滑石粉微生物学检验中的术语和定义、检验通则、细菌总数测定方法、真菌总数测定方法、大肠菌群和粪大肠菌群检验方法、铜绿假单胞菌检验方法、金黄色葡萄球菌检验方法。
本标准适用于医药、食品及化妆品用滑石粉中的微生物学检验。 2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2. 1
菌落总数aerobicbacterialcount 指样品经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、PH值、需氧性质等），
所得1g或1mL检样中所含菌落总数。所得结果，只包括群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。
[［《化妆品卫生规范》（2002版）中化妆品微生物检验方法，菌落总数定义2] 3检验通则 3.1取样及注意事项 3.1.1每批滑石粉应随机抽两个或两个以上包装完好的单位，试样量不少于10g，以使检验结果具有代表性。 3.1.2凡异常的供试品，则选取有疑间的样品进行检验。凡包装开启即可见霉变的，无需检验则可判为不合格。 3.1.3在检验前，应严格保持包装的原有状态，并放在阴凉干燥处，防止因微生物再度繁殖而影响检验结果。凡原包装已启开，则不在其中取样。 3.1.4样品的稀释，须在1h~2h内完成，以防止微生物繁殖或死亡。 3.1.5微生物检验全过程，必须在无菌操作条件下进行。凡直接与样品接触的用具，均应事先灭菌并保持无菌。 3.1.6从样品检出致病菌的报告发出之日起，该菌菌种需保存一个月备查，阴性样品可及时处理。 3.2供试液制备的材料和仪器 3.2.1天平：感量不大于0.1g。 3.2.2 三角烧瓶：300mL或500mL。 3.2.3 玻璃珠：①5mm。 3.2. 4 量筒：100mL。 3.2.5电炉。 3.2.6高压消毒锅。 3.2.7滤纸。 3.3供试液的制备方法
准确称取10.0g试样，放入装有90mL稀释剂（pH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液）和十几个玻璃珠的三角烧瓶中，经振摇制成1：10的试液备用。取用时必须混匀。 3.4阳性菌株对照试验
1 JC/T542-2010 3.4.1 每次检验，应同时进行阳性对照生长试验。 3.4.2对照试验加人的已知活菌量，每批样品应控制在50个～100个范围之内 3.4.3常用的阳性对照菌株，卫生部检定所编号：大肠杆菌44102、绿脓杆菌10104、金黄色葡萄球菌 26003等。 3.4.4做阳性菌株对照试验时，应注意安全，严格防止对照菌污染样品和环境。 4细菌总数测定方法 4.1方法原理
每种细菌有其一定的生理特性，生长时对营养、温度、时间、pH值、需氧性等的要求均不相同。在实际培养中，不可能同时满足所有细菌的要求，因此只能测定在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧及兼性厌氧的细菌菌落总数。 4.2材料和仪器 4.2.1 恒温培养箱。 4. 2.2 电热恒温水锅。 4.2.3 移液管：1mL及10mL。 4.2.4 平Ⅲ：@90mm。 4.2.5 试管：18mmX200mm。 4.2.6 试管架。 4.2.7 放大镜。 4.3培养基和试剂 4.3.1 营养琼脂培养基。 4.3.2 生理盐水：定量分装于试管（每支试管内9mL）。 4.4试验程序
1：10试液
V
做几个连续倍数的稀释液
+
选择2个～3个连续稀释度，各加1mL于相应平皿
+
平皿加人12mL~15.mL营养琼脂
36℃±1℃★48h±2h
菌落计数
4.5试验步骤 4.5.1试液稀释及培养 4.5.1.1用1mL移液管取1：10试液1mL，沿管壁加入盛有9mL盐水的试管（管的尖端不要触及液面），振摇试管，做成1：100均匀稀释液。 4.5.1.2另取1mL移液管，按4.5.1.1操作制10倍递增稀释液，每次更换一支移液管，稀释至10-3~ 10-5倍。 4.5.1.3选择2个～3个连续稀释度，用吸取该稀释度的移液管，移1mL试液于平皿内，每个稀释度做2个3个平皿。 4.5.1.4将预先放在45℃土1℃恒温水浴中的营养琼脂培养基，加人平血约15mL，并转动平皿混合均匀。同时再将营养琼脂15mL倾斜加人装有1mL不含试样的稀释剂平Ⅲ中，作为空白对照。 4.5.1.5琼脂凝固后，翻转平Ⅲ，置36℃土1℃培养箱内，保持48h土2h后取出，进行菌落计数。平Ⅲ 2 JC/T542—2010
菌落数乘以稀释倍数，即为每克样品所含菌落总数。 4.5.2计数方法 4.5.2.1用肉眼观察，必要时用放大镜。 4.5.2.2求出同一稀释度各平血的菌落平均值。若平皿中有连成大片的菌落生长，该平血不宜计数。 若片状菌落不到平血的一半，其余一半的分布又很均勾，可将此半个计数后乘以2，代表全血。 4.5.2.3选择平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数的测定范围。当只有个稀释度符合此范围，即以该平皿菌落数乘以稀释倍数（见表1中例1）。 4.5.2.4有两个稀释度，平均菌落数均在30～300之间，则应求出两者菌落总数之比值决定。小于或等于2，报告其平均数；大于2，则报告其中较小的菌落数（见表1中例2、例3）。 4.5.2.5所有稀释度，其平均菌落数均大于300个，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表 1中例4）。 4.5.2.6所有稀释度的平均菌落数均小于30个，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表1 中例5）。 4.5.2.7所有稀释度的平均菌数落均不在30个～300个之间，则以最接近30或300的乘以稀释倍数（见表1中例6）。 4.5.2.8所有稀释度均无菌落生长，为每克小于10CFU。 4.5.3报告
菌落数在100以内，按实数值报告；大于100，采用二位有效数字乘以10的指数来表示，有效数字后面的数值用修约法处理。以CFU/g为计量单位。（CFU：菌落形成单位）
表1菌落计数结果及报告方法
报告方式 CFU/g 1.6×10* 3.8×104 2.7X104 5.1×105 2.7×10 3.1X104
菌落总数 CFU/g 16 400 38 000 27 100 513 000 270 30 500
两稀释度菌数之比
不同稀释度的平均菌落数
例次 1 2 3
10-3 20 46 60 513 5 12
10-1 1 365 2 760 2 890 不可计 27 不可计
10-2 164 295 270 4 650 11 305
-
1. 6 2. 2
m
a
5 6
5 真菌总数测定方法 5.1方法原理
真菌具有明显的细胞核，多数需氧，在偏酸含糖的培养基中，在较高湿度25℃～28℃的温度条件下生产良好。本方法根据这些生物特性，进行培养和菌落计数。 5.2材料和仪器 5.2.1恒温培养箱。 5.2.2振荡器。 5.2.3电热恒温水浴锅。 5.2.4试管：15mm×150mm。 5.2.5移液管：1mL和10mL。 5.2.6平m：@90mm。