ICS 13.300 CCS A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T41623—2022
化学品 鸟类急性经口毒性试验
ChemicalsAvianacuteoral toxicitytest
2023-02-01实施
2022-07-11发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会 发布 GB/T41623—2022
前言
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任，本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本文件起草单位：生态环境部固体废物与化学品管理技术中心、中国检验检疫科学研究院、上海市
检测中心、中国化工经济技术发展中心、厦门尹巢科技有限公司、国化低碳技术工程中心、生态环境部南京环境科学研究所、沈阳化工研究院有限公司、贵州省分析测试研究院、广东全庆检测有限公司。
本文件主要起草人：刘纯新、周丽丽、薛宁宁、徐淑民、窦从从、张琨、曹梦然、赵旭明、王蕾、赵瑜、 林绍霞。
I GB/T41623—2022
引言
本文件主要描述了用于评价化学品对鸟类急性经口毒性的三种试验方法：限度剂量试验、LDso-斜率试验、LDso-单一试验。其中LDso-斜率试验和LDso-单一试验是序贯进行的试验。根据是否同时需要精准的经口半数致死量（LDso）和剂量-反应曲线的斜率数据来选择具体的试验方法。序贯试验程序的目的在于剂量的设计、试验需求与毒性终点精确度的统一性。序贯试验程序能尽量减少受试鸟的数量。 名为SequentialDesignCalculator(SEDEC)的计算机软件可用于帮助设计剂量并计算LDso、剂量反应曲线斜率以及置信区间（见9.2）。
这些方法是由1994年在美国佛罗里达彭萨科拉举行的鸟类毒性试验研讨会发起，由SETAC/ OECD"鸟类毒性试验工作组起草，随后通过欧洲和美国的SETAC公开会议和OECD专家组关门会议讨论后，对序贯试验设计进行修改和完善。该序贯试验设计程序已通过广泛的统计验证。
这三种试验方法的适用条件如下。
限度剂量试验：当预测受试物的毒性低，且在限度剂量条件下受试鸟不可能发生死亡时，进行该试验。限度剂量与评估目的对应，通常设定为2000mg/kg。除对照组外，限度剂量下用 5只或10只受试鸟进行试验（见图1）。 一LDso-斜率试验：当管理部门或其他要求测剂量-反应曲线斜率，和/或估计LDso数据及置信区
间时，选用此方法。除对照组外，阶段3或阶段4分别需要24只或34只受试鸟进行试验（见图2）。若计算斜率，可通过经典的剂量-效应试验（USEPAOPPTS850.2100)进行替代计算
一LDso-单一试验：当只需要经口半数致死量数据，而不需要剂量-反应曲线斜率或LDso置信区间
时，可选用此方法。可用于估计LD5o物种敏感性分布的百分数并为产品标签提供信息。该试验包括两个阶段，除了对照组外，用14只受试鸟来进行试验（见图2）。
LDso-斜率试验和LDso-单一试验由多个序贯执行的试验阶段组成（图2）。本文件中的“序贯设计和序贯试验是指LDso-斜率试验和LDso-单一试验。相关的设计逻辑以及统计原理见附录A。
设计LDso-斜率试验得到的参数可用于计算机模拟试验，达到危害性评估的目的。这些参数包括 LDso值、置信区间和剂量-反应曲线斜率
在LDso-斜率试验或LDso-单一试验设计的各个阶段中，按照预测的受试物剂量，对1只或多只受试鸟一次性经口染毒，剂量单位为“mg/kg”。这些剂量可用于估算LDso。染毒后观察期14d，但主要依据染毒后三天受试鸟死亡率及毒性症状来选择试验剂量，若出现受试鸟死亡或症状恢复较快，可缩短该期限；若受试鸟死亡较慢，延长该期限。
序贯试验（LDso-斜率试验或LDso-单一试验）最初可用从失败的限度剂量试验（出现一只或多只受试鸟死亡)或其他方式获取的信息开始。对于预测可能具有高毒性的受试物，试验可从阶段1开始，每组4只受试鸟，分别按不同剂量染毒。选择的剂量宜涵盖估计的LDso区间范围（例如以啮齿类动物或其他鸟种的LDse数据为依据）。根据阶段1的结果估算LDso。阶段2使用极大似然估计法（MLE)确定剂量，共10个剂量，每个剂量1只受试鸟。若可从失败的限度剂量试验中估算LDso，序贯试验也可从阶段2开始，对于LDso-斜率试验可连续进行到阶段3，也可能到阶段4（停止试验的规则见7.2.2.3～ 7.2.2.6)。
SETAC：国际环境毒理学与环境化学学会（Societyof Environmental ToxicologyandChemistry）
1)
OECD：经济合作与发展组织（OrganizationforEconomicCooperationandDevelopment）
II GB/T41623—2022
化学品鸟类急性经口毒性试验
警示一一使用本文件的人员应有正规实验室工作的实际经验。本文件并未指出所有可能的安全问
题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件
1范围
本文件规定了鸟类急性经口毒性试验的受试物信息、试验原理、试验方法、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。
本文件适用于评价低挥发性、具备足够准确度与灵敏度分析方法的化学物质对鸟类的急性经口
毒性。
本文件不适用于高挥发性的化学物质的急性经口毒性试验
2规范性引用文件
2
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 21801 化学品 快速生物降解性 呼吸计量法试验 GB/T 21802 化学品 快速生物降解性 改进的MITI试验（I） GB/T 21803 化学品 快速生物降解性 DOC消减试验 GB/T21810 化学品 鸟类日粮毒性试验 GB/T 21811 化学品 鸟类繁殖试验 GB/T21831 化学品 快速生物降解性 密闭瓶法试验 GB/T 21845 化学品 水溶解度试验 GB/T21852 化学品 分配系数（正辛醇-水）高效液相色谱法试验 GB/T 21853 化学品 分配系数（正辛醇-水）摇瓶法试验 GB/T 21855 化学品 与pH有关的水解作用试验 GB/T 21856 化学品 快速生物降解性 二氧化碳产生试验 GB/T 21857 化学品 快速生物降解性 改进的OECD筛选试验 GB/T22052 用液体蒸气压力计测定液体的蒸气压力温度关系和初始分解温度的方法 GB/T22228 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-1Pa至10°Pa范围内的测定静态法 GB/T 22229 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-3Pa至1Pa范围内的测定蒸气压平
衡法
GB/T27850 化学品 快速生物降解性 通则 OECD化学品测试导则No.104 蒸气压（VapourPressure）
术语和定义
3
下列术语和定义适用于本文件
1 GB/T41623—2022
3.1
急性经口毒性 acuteoraltoxicity 一次性经口摄人或在24h内多次摄人受试物后发生的不良反应
3.2
剂量 dose 摄入受试物的总量。 注：表示为受试物的质量（g、mg)或受试物的质量/单位体重试验动物（mg/kg，其中bwt为试验动物体重）。
3.3
经口半数致死量 median lethal oral dose LDso 由统计学得出的一次性经口摄人受试物后导致50%受试动物死亡的剂量。 注：LD:值用摄入受试物的质量/单位体重试验动物（mg/kg)来表示。
3.4
限度剂量 limit dose 限度试验中上限的剂量。
3.5
（在序贯设计中的）阶段 stage(inasequential design) 在试验中对多只受试鸟同时进行染毒和观察的时期注：由前一个试验阶段估算的LD和斜率可能影响当前阶段的试验设计。同样，由现阶段试验产生的数据也可能
影响下一个阶段试验的设计。
3.6
最低剂量 lowest dose;ldose 在某个试验阶段所用剂量的最低数值（mg/kg）。
3.7
最高剂量 highest dose;hdose 在某个试验阶段所用剂量的最高数值（mg/kg）。
3.8
公比 step 用于计算各个剂量的倍增因子。
3.9
部分死亡 partialkills 当对多只受试鸟用相同剂量受试物染毒时，出现一部分鸟死亡，另一部分存活的现象。 注：部分死亡有时也称作部分反应。
3.10
效应逆转 reversals 当没有设置平行组的单个受试鸟在接受不同剂量的受试物时，出现相邻的低剂量组死亡而高剂量
组存活的现象。
注：即某剂量受试鸟的致死率高于下一个更高剂量的致死率。这时的剂量值可能接近LDs值。例如："0"代表受试
鸟存活，“1"代表死亡和有反应的受试鸟，按照剂量递增的顺序进行排列，排列顺序为“0001011111"和 “000110111"都表示有一个效应逆转，排列顺序为“0001010111"和“00011010011"都表示有两个效应逆转。进步示例见附录B。
3.11
偶然死亡 incidentaldeath 与受试鸟群体健康状况无关的死亡，和由自残行为（如损伤腿或擦伤等）产生的死亡
2 GB/T41623—2022
4受试物信息
4.12 在试验前，应掌握受试物的下列必备信息：
a）按照GB/T21845的方法测定的水中溶解度； b）按照GB/T22052、GB/T22228、GB/T22229和OECD化学品测试导则No.104的方法测定
的蒸气压和亨利常数。
4.2 2可能需要受试物的下列信息：
a）结构式； b) 纯度； c) 受试物在水溶液中的定量分析方法； d) 按照GB/T21855的方法测定的水解作用数据； e) 光稳定性； f) 按照GB/T21852或GB/T21853的方法测定的正辛醇-水分配系数； g) 按照GB/T21801、GB/T21802、GB/T21803、GB/T21831、GB/T21856、GB/T21857和
GB/T27850的方法测定的快速生物降解性试验结果
4.3 测定4.1和4.2中参数的温度，应在试验报告中予以说明。
5 试验原理
试验由几个独立阶段组成。每个阶段，将受试物按设计剂量（mg/kg）以填喂的方式对所有受试鸟同时染毒。根据各阶段的设计，每只鸟可能摄入不同剂量或多只鸟可能摄入相同剂量（即在此阶段设置了该剂量的平行组）。对于不太可能出现明显危害的受试物，宜按限度剂量试验方法同时对多只鸟染毒。若毒性可预知，宜采用序贯设计试验方法而不用限度剂量试验方法。阶段1和阶段2不设平行剂量，而阶段3和阶段4应设平行剂量。在阶段1中，根据最有效的LDso估算值（例如啮齿动物的LDso）来设定剂量的范围。后续试验阶段的剂量依据前面所有阶段观察到的死亡数来确定。因此，LD和剂量-反应曲线斜率的估算同时进行。
染毒后，观察14d来计算死亡率。在这期间若出现延迟效应现象则应延长观察期。对于染毒后几天内出现受试鸟死亡的化学品，采用分阶段试验设计最容易进行。对于这类化学品不需等到14d观察期结束，即可开始下个阶段的试验，但应继续观察所有受试鸟。较短间隔后观察到的死亡率可用于确定后续试验阶段的剂量（通常是3d)。受试鸟如有明显的痛苦迹象，应实施安乐死。在某个试验阶段，染毒后前三天通常可得到用于判断受试鸟能否从中毒症状中恢复、死亡率能否增加的足够信息。对于某个试验阶段，通过对第3天的试验期间数据的估算，可在较短时间内完成整个试验的全部剂量设计。若第3天的信息表明，在这个阶段中可能还有受试鸟死亡，则LDso的试验期间估算应延迟到幸存的受试鸟中毒症状有明显恢复。有些情况下可能需要等到14d后才能进行下个阶段试验。根据从全部试验阶段积累的14d结果来进行最终计算
死亡率是本试验方法首要的毒性终点。假设背景死亡率可忽略不计。应设置对照组来监控受试鸟的健康及饲养情况，保证试验结果的可靠性。对照组受试鸟的使用程序和时间在7.3中讨论。试验期间，受试鸟如有明显的痛苦迹象，应实施安乐死。
6 试验方法
6.1 仪器设备
本试验可采用GB/T21810和GB/T21811中的仪器设备，
3 GB/T41623—2022
6.2受试鸟 6.2.1受试鸟的选择
首选人工繁育的背景死亡率低且反习性低的鸟类物种作为受试鸟。通常符合这些要求的物种有北美鹤鹑（Colinusvirginianus）、日本鹤鹑（Coturnijaponica）。由于动物福利和疾病控制等因素，不宜捕提野生鸟类用于试验。
如选其他鸟类，应增加该物种的敏感性试验。除鹑外，可用（但不限于）绿头野鸭（Anasplaty rhynchos）、鸽（Collumbiformlivia）、斑胸草雀（Poephilaguttata）、虎皮鹦鹉（Melopsittacus undulatus）等作受试鸟
所用受试鸟应是羽翼成熟，不在繁殖期内。首选野生表型，人工驯化的鸟应来源于相同的繁育种群。为了保持基因的多态性所进行的异系紧殖历史宜明确。若不能用野生表型的鸟，则应从不同表型的混合体中选择，以限制近亲繁殖
从非繁殖期的混合性别组或单一性别组中选择受试鸟：随机分配到各试验组中。使用非繁殖期受
试鸟有助于降低由性别不同引起的敏感性差异。不同性别的鸟对某些化学品的敏感性可能不同。各种化学品对不同性别鸟的毒性差异可能不同。若怀疑由性别不同引起敏感性差异，则应按不同性别分别进行试验并分别计算LDso。
6.2.2驯养条件和试验条件
本文件的试验方法是在试验的早期阶段每个浓度设置一只受试鸟。如果发生呕吐现象，应至少在试验最初的3d内安置每只受试鸟单独栖息。这样能够单独观察和详细记录每一只受试鸟的行为细节（包括呕吐）。对于如斑胸草雀这样的群居鸟类，应将鸟笼靠近排列，使各鸟之间有视觉和听觉上的互动。对其他鸟种宜如此操作。几种受试鸟单独栖息的最小面积为：鸽3333cm"、绿头野鸭2000cm"、 鹤鹑1000cm、虎皮鹦鹉500cm”和斑胸草雀500cm。鸟笼底部应有适当大小的网眼，既能使粪便通过，又不影响鸟的活动。鸽、虎皮鹦鹉和斑胸草雀的笼中应有栖木。
可通过人工控制温湿度和光照来保持试验条件。鹑和绿头野鸭适宜的温度为15℃～27℃，在试验阶段应减少温度的波动。应通风良好，保证空气至少每小时交换10次，鹑和绿头野鸭的光照周期应是8h/16h（光照/黑暗）。对于其他鸟种，应将光照增加到10h。试验期间提供新鲜饲料和水，保证鸟类自由采食和饮水。应确保饲料的营养成分符合受试鸟生长要求，可便用市售商业化饲料和维生素。在染毒之前14d、染毒期间以及观察期内避免进行药物治疗。同时应定期分析饲料和水质，检查可能影响鸟类健康杂质的含量。 6.2.3受试鸟的准备
每只鸟应单独进行鉴定。人工繁育的受试鸟在试验开始前至少需要14d适应试验条件和饲料，捕获的野生鸟需要更长的适应期。在适应期内，所有的鸟都应保持健康，笼养受试鸟如果死亡超过5% 或野生受试鸟死亡超过10%则不能用于试验。若捕获的野生鸟不能适应试验环境条件，应在捕提地附近放生。考虑到动物福利及周龄差异、基因组成和健康情况等不可控因素，不宜使用捕获的野生鸟类，野生鸟类在被捕捉、运输和关养期间会受到精神压力，进而可能导致更高的死亡率。对于人工繁育的受试鸟尽可能选择同一周龄。 6.2.4染毒
将受试物灌入胶囊或溶解、悬浮在合适的介质中，通过填喂法染毒。通常情况下对于可溶或可悬浮的受试物，首选使用水溶液或水悬液，其次考虑使用食用油溶液或乳状液（如：玉米油），最后考虑其他介
4 GB/T41623—2022
质。使用非水介质前应了解该介质的毒性信息，且不应造成呕吐。根据染毒前24h内所测体重来确定每只鸟的染毒剂量。
受试物染毒的方式是单一剂量经口灌胃染毒法。染毒用药体积与鸟的体重保持一定的比例，且每千克体重不应超过10mL。受试鸟在染毒的前一晚应禁食12h～15h。像北美鹑和日本鹑这类体重较大的鸟宜整夜禁食。对体重较小的鸟，整夜禁食可能有害；对于体重50g左右或小于50g的鸟，禁食不超过2h。
呕吐影响毒性评估结果，应记录呕吐现象。宜用与粪便颜色明显不同的无毒染色饲料（例如，食用色素亮蓝1号，双4-N-乙基-N-3-磺酸苯甲基氨基苯基-2-磺酸甲苯基二钠盐，CAS号57-55-6)，来识别是否呕吐。呕叶是鸟类急性经口试验的一个特点，可能与染毒技术或受试物性质有关。减少染毒体积或改变载体会降低呕吐的频率。尤其是选用雀形目受试鸟时，宜先进行摸索剂量范围的预试验来评估它们的呕吐习性。可通过减少染毒体积、使用胶囊或更换载体来消除或降低呕吐频率。如果仍然存在呕吐现象，考虑更换另一种受试鸟。若没有不呕吐的受试鸟种可用，则不可能精确计算出LDso。唯一可能得出的结论是受试物的LDs大于引发呕吐和死亡的最低剂量。 6.2.5观察
染毒后2h内应持续观察鸟的呕吐情况和临床症状，当天光照期间至少等间隔额外观察三次临床症状，此后14d内每关至少观察一次。然而，观察期的时间跨度不应很快固定。观察应持续到不再有临床症状和死亡发生为止。若某个试验阶段观察期延长，则随后的所有试验阶段应相应延长
对每只受试鸟的观察包括呕吐、中毒和缓解症状、反常行为、体重、死亡、死亡时间等。 明显不是受试物导致的死亡（如物理损伤)应在计算过程中排除。若对照组中有偶然死亡发生，则
需要增加对照组的受试鸟（见7.3）。
应在染毒前和染毒后第3天、第7关和第14天（或依据试验持续的情况推迟）测鸟的体重变化。在
染毒后3d内、3d～7d和7d～14d，每天测量食物消耗量。试验结束时，对全部受试鸟，包括对照组和试验组中存活的鸟进行病理分析，有助于识别偶然死亡和各种中毒症状。若无死亡和明显临床症状记录的鸟，不解剖。
试验期间，若受试鸟有明显的痛苦症状，应实施安乐死。
7试验程序
7.1 限度剂量试验
限度剂量试验设计包括按限度剂量同时染毒的试验组5只受试和虚拟染毒的对照组受试鸟。对照组受试鸟的染毒程序和时间在7.3中讨论。染毒后观察14d。观察到受试鸟死亡后，按图1中描述的程序操作。为避免受试鸟因毒性效应而蒙受痛苦所进行的安乐死与观察试验处理组的死亡率同样重要。
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