第33卷，第4期 2013年4月
光谱学与光谱分析 Spectroscopy and Spectral Analysis
Vol.33,No.4.pp982-986
April，2013
pH值对多类人地贫红细胞作用的拉曼光谱研究
吴正洁1，王成”，林正春3
1.北京理工大学殊海学院化工与材料学院，广东珠海519088
1510225
2.仲恺农业工程学院计算机科学与工程学院，广东广州 3.佛山市技术标准研究院，广东佛山528000
摘要地中海贫血是一种发病率高，影响大的血减疾病。以往对地中海贫血的检测方法紧项，耗时较长。通过对酸、减pH环境下不同种类地贫红细胞和正常红细胞拉受光谱的对照，发现在酸性条件下，α-地贫和 β-地贫的拉曼谱具有不同的特征；表征氧合血红蛋白的特征峰谱带在β-地贫下强度升高其至完全取代脱氧面红蛋白的特征峰；β地贫红细胞膜的链间侧向相互作用序参数较正常红细胞膜的小，且其S值与正常相比减小的比例随贫血程度的不同而不同，而&地贫的S值与正常红细胞膜的值相当。结果显示，可以基于
pH作用的拉曼光谱测定方法，用于协助对地中海贫血的快速诊断。关键词拉曼光谱；地中海贫血；pH作用
中图分类号：0657.3
引言
文献标识码：A
DOl; 10, 3964/j. issn. 1000-0593(2013)04-0982-05
配置0.01mol·L-1等渗PBS级冲液，在PBS缓冲液中
加入血清白蛋白(购自Sigma公司)作为红细胞的缓冲液。 1.2不同pH值缓冲液的配置
地中海贫血是一种常染色体隐性遗传血液疾病。地贫患者由于遗传缺陷导致组成血红蛋白的某种珠蛋白的合成减少或不能合成，改变了血红蛋白的组成成分，从而引起贫血。地中海贫血根据受损珠蛋白链的不同面分为α地贫和β地贫两类。不同种类的地贫患者然临床表现差异极大，但都具有红细胞膜的机械稳定性变差、红细胞变形能力减小等特点[1-5)。目前，对地贫的诊断准确率最高的是基因诊断法，被誉为地贫诊断的"金标准”。临床上较普遍应用MCV(平均红细脂体积)和红细服渗透脆性试验低于正常值来初筛地贫携带者[6, 7]
。但由于基因诊断法和血液学筛查法非常素项，费
时费力(-7
，急需发展一种新方法用于辅助地贫的快速诊断。
另外，地贫作为我国长江以南各省发病率最高、影响最大的血液疾病，对地贫红细胞结构机理的研究将有助于对地贫的诊断分析。为此，可基于酸碱pH环境的变化，结合拉曼光谱技术，研究PH值对多类人地贫红细胞的作用，比较分析其中的机理。
1实验部分
1.1红细胞缓冲液的配置
收稿日期：2012-07-30，修订日期：2012-10-16
基金项目：国家质检总局科技计划项目（2010QK058)资助
作者简介：吴正洁，女，1982年生，北京理工大学珠海学院讲师万方数据
用0.1mol·L-1的盐酸和0.1mol·L-的氢氧化钠，滴定调节上述红细胞缓冲液到所需的pH值（pH4.73， 9.24）。所用试剂均为分析纯级别，使用的水是三蒸、去离子水，其电阻率为18.2MQ·cm，电导率为0.055uscm-1。 1.3人红细胞的制备
抽取健康人和广州市儿童医院地贫患者的静脉血，肝素锂抗凝，即刻以1500r·min速度离心10min，去除上层血浆和脂质体，加人3倍以上体积的细胞缓冲液，1500r， min~的速度离心5min，去除上清液。如此重复洗涤红细胆 3次，再将红细胞重悬于细胞缓冲液中。
地贫样品经广州市儿童医院利用高效液相色诺法(HPLC)检测判定为HbH(α地贫)或β轻型、中间型、重型， 1.4显微共焦拉曼光谱技术测量胞内血红蛋白的结构
采用HoribaJY公司生产的显微共焦拉曼光谱系统（JY LabRamINV)。配置的激光器为Ar*离子激光器，其激发波长为514.5nm。红细胞的照射激光功率选择1.5mW。
对仪器波数及激光功率的校准均采用标准硅片进行。在每次测量样品之前，先将硅片待征峰校准至520.7cm-1，消除仪器自身产生的波数偏差；检测硅片特征峰的强度值，根据强度的变化来判断激光功率的变动情况，确保不同时间测
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