01 2010年6月
过程工程学报
The Chinese Jourmal of Process Engineering
疏水相互作用与亲水相互作用组合色谱纯化缩营素
张晓鸥，宋茂谦，王长海，Jan-ChristerJanson，顾铭
Vol.10 No.3 June 2010
(1.大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系，辽宁大连116024；2.中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京100190：
3, Department of Physical and Analytical Chemistry, Uppsala Biomedical Centre, Uppsala University, Uppsala, Sweden)
摘要：将疏水相互作用色谱与亲水相互作用色谱结合，建立了用于化学合成缩宫素粗品分离纯化的两步纯化工艺先以纯水为流动相，采用Nylon6疏水相互作用色谱对粗品进行脱盐与富集，后以Superose12亲水相互作用色谱进行进一步纯化，两步纯化后，峰面积纯度达93.5%，提高了5.96倍，总回收率为50.1%，与用C1s为介质的传统两步反相色谱纯化的结果相当，本方法有机溶剂用量仅为传统反相色谱的1/7，且两种介质都能耐受极端pH值清洗条件，重复利用率高
关键词：聚己内酰胺；琼脂糖凝胶；硫水相互作用色谱；亲水相互作用色谱；缩宫素；纯化
中图分类号：TQ460.6*4；TQ028.8 1前言
文献标识码：A
缩宫素(Oxytocin，OT)又称催产素，其分子结构如图1"所示，是具有一个二硫键的九肽。缩宫素能刺激子宫收缩和乳汁排出，临床上主要用于诱导促进分娩、缩短第三产程、控制产后出血、乳期促排乳及胎盘储备功能检测等(})，近年来的研究(34]表明，缩宫素还与社会认同、焦虑、信任和母性行为的产生有关。目前全球范围的缩宫素原料药的生产以化学合成为主，少数从动物脑垂体后叶提取，化学合成粗品中的杂质主要为缩宫素的结构类似物，包括二聚体、非对映异构体、断裂肽、开环肽等.欧洲药典(EP5.0)要求缩宫素原料药的峰面积纯度不低于95%[5]，2010版国家药典也对缩宫素注射液的异常毒性和过敏反应检查提出了新的要求6，反相色谱(Reversed Phase Liquid Chromatography, RPLC)是
目前工业生产中用于多肽药物粗品纯化的常规方法，但由于RPLC介质对低纯度粗品的载量有限，不耐受强碱性清洗条件，反复运行粗品后会由于不可逆吸附造成柱子退化[7,8，因此实际生产工艺通常先采用中低压RPLC 进行粗提富集，再通过多步高压RPLC精细纯化，以牲中低压RPLC介质的分辨率为代价，保护价格昂贵的高压RPLC介质，RPLC介质的低回收利用率导致分离纯化成本居高不下，而中国药典规定的缩宫素注射液质量标准是以生物效价评价为基础的，因此半数以上的国产缩宫素原料药及注射液尽管能达到2005版中国药典(9) 的要求，却达不到欧洲标准[101]面对竞争日益激烈的国际市场，需要开发更加有效的分离纯化方法用于缩宫素生产
H,N
文章编号：1009-606X(2010)03-0598-05
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nnesss 图1缩宫素分子结构[1]
Fig.1Molecularstructure ofoxytocinl
1990年，Alpertl12)首次提出亲水相互作用色谱
(Hydrophilic Interaction Chromatography, HILIC)的概念，以亲水柱结合含水高浓度有机溶剂流动相分离纯化了多种极性化合物，包括多肽.HILIC的洗脱顺序大致与 RPLC相反，与RPLC相比，对极性较强的多肽，HILIC 能提供更好的选择性.如图1所示，缩宫素分子中含8 个肽键、1个酚羟基、1个末端氨基和3个酰胺基团.从理论上分析，缩宫素极性较强，有可能在HILIC介质上形成吸附保留.YoshidalI3]综述了多肽的HILIC分离，现有的HILIC介质基本骨架大多以多孔硅胶为基础，也不能耐受强碱性清洗条件。最近的研究[14-16]结果表明，种12%浓度的高交联度琼脂糖凝胶介质（商品名 Superose 12, GE Healthcare Bio-Sciences, Uppsala Sweden)，在含水有机溶剂流动相条件下表现出典型的
收稿日期：2010-04-21，修回日期：201005-14
基金项目：国家自然科学基金资助项目(编号：20606032；20636010；50773083)：生化工程国家重点实验室开放基金资助项目(编号：SKLBE-KF002) 1900061
万方数据