第01期
分析评价
腺苷蛋氨酸发醇液中甲醇含量测定方法研究
腺苷蛋氨酸发酵液中甲醇含量测定方法研究
张建勇！王水莲1郭雅妹2
（1.山东齐都药业有限公司；山东淄博255400；2.石家庄工大化工设备有限公司；河北石家庄050031）
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摘要：利用变色酸比色法和气相色谱法分别对甲醇诱导毕赤酵母基因工程菌发酵液中甲醇含量测定方法进行了研究。结果表明，
变色酸比色法测定发醇液中甲醇浓度具有较好的精密度和准确度，与气相色谱法相比误差不大。因此，利用变色酸比色法测定腺苷蛋氨酸发醇液中甲醇浓度是一种简单、易行、准确的测定方法。
关键调：毕亦酵母；甲醇；含量测定；腺苷蛋氨酸
中图分类号：TQ014
文献标识码：A
文章编号：16728114(2010)01-0055-04
蛋氨酸发酵液中甲醇含量测定方法进行了研究，
腺苷蛋氨酸（S-Adenosyl-L-methionine，
SAMe)是重要的生物中间体，生物体中腺苷蛋氨酸合成酶催化ATP和甲硫氨酸生成SAMe。SAM 参与转甲基、转硫、转氨丙基等生化反应，是治疗肝硬化、抑郁症、冠心病等疾病的有效药物。制备 SAM的方法中：化学合成法消旋现象产重，酶法合成的成本高"]。利用高活力的腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌发酵生产SAM能降低成本且大大降低消旋现象，是有效途径。
毕赤酵母（Pichiapastoris）是一种甲醇营养
型酵母，它能在以甲醇为惟一碳源和能源的培养基中生长。其本身所具有的种种优势（如易于操作培养；具有强有力的、受甲醇严格诱导调控的启动子AOXI；高密度发酵水平很高：分泌能力强，产物易于提纯；表达菌株稳定等)使这种微生物成为近年来极受青的基因表达系统宿主[2]。甲醇是该系统外源基因表达的强力诱导剂，发酵过程中甲醇的动态含量是发酵成败的决定性因素。因此，及时检测发酵液中甲醇浓度，并由此确定甲醇的补加剂量及补加方式，对于发酵过程控制和提高外源蛋白的表达量起着至关重要的作用。
本文针对甲醇诱导重组毕赤酵母生产腺苷作者篇介：张建勇（1979-)，男，硕士，主要从事生物工程方面的研
究和生产。
*通讯联系人万方数据
以建立一种快速、准确、简单、易行的发酵液中甲醇含量分析方法。
1材料与方法 1.1仪器和试剂
722N型分光光度计（上海精密科学仪器
有限公司）；GC-2010A气相色谱仪（日本岛津公司)；高锰酸钾、亚硫酸钠、硫酸，变色酸均为分析
纯；BMMY培养基，按文献3配制。 1.2方法
1.2.1变色酸比色法(4)
1.2.1.1变色酸比色法原理
甲醇在酸性条件下，被高锰酸钾转化成甲
醛：
5CHOH+2KMnO+4HS045CH,0
+2MnSO+2KHSO,+8H,0
亚硫酸钠反应过量的高锰酸钾：
5Na,SO,+2KMn04+4H,SO4—2KHSO+ 2MnSO4+5NaSO,+3H,0
甲醛在硫酸溶液中与变色酸作用呈紫色反
应，于574nm处有特征吸收峰。 1.2.1.2甲醇标准液的配制
准确配制0.5%（m/V）甲醇标准溶液。