第30卷第3期 2010年9月
化学传感器 CHEMICALSENSORS
miRNA检测技术进展
周殿明，蒋健晖·
（化学生物传感与计量学国家重点实验室，湖南大学化学化工学院，湖南长沙410082）
Vol. 30, No. 3 Sept .2010
摘要：miRNA做为一种非常重要的非编码蛋白的RNA，广泛存在于植物、病毒、哺乳动物当中。因其在细胞增殖、细胞死亡、肿瘤发生和哺乳动物细胞生长中重要的调节功能，其检测技术也受到越来越多的关注，很多关键的检测技术，比如印迹技术，阵列杂交技术，反转录PCR技术等等都在miRNA的检测中发挥了巨
大的实用价值。该文基于此对miRNA近儿年的检测技术进行了具体的综述。关键词：基因调控；miRNA检测
Development in the detection of miRNA
Zhou Dian-ming, Jiang Jian-hui
(State Key Laboratory of Chemo/Biosensing and Chemometrics, College of Chemistry&Chemical Engineering, Hunan
University, Changsha 410082, China)
Abstract: As a kind of very important nonprotein coding RNA molecular, miRNA has been found in a broad range of plants, viruses, and mammals, Because miRNA plays an important role of regulation in cell proliferation, cell death, tumorigenesis, and mammalian cell development, more and more detection technologies have been developed. Many key detection technologies are quite useful in real detection applications, such as northermn blotting, hybridiza-tion in microarray surface, and RTPCR etc. So the paper would review some of the latest methods for miRNA de-tection.
Key words: gene regulation; miRNA detection
0
引言
RNA是除了DNA外的基因分子生物学的又一庞大家族，miRNA就是这个家族中的一个非常重要的成员。1993年，Lee等在线虫（C.elegans）发现了第一个定时调控胚胎后期发育的基因 lin-4!]，也就是第一个miRNA；同时发现它不编码任何蛋白质，但是可以抑制Lin-14蛋白表达然而当时的这个发现并未引起太多的关注。直到 2000年，Reinhart等又在线虫C.elegan中发现第二个miRNA-let-7(2)，miRNA这一非编码基因家族的重要成员才开始在人们的眼前逐渐清晰起来。
miRNA是-类约22个碱基左右的非编码蛋白的RNA，通常在18~25个碱基之间，成熟的
*通讯联系人，Tel:0731-88821916,Email: jianhuijiang@hnu.cn 万方数据
miRNA5°端有一个磷酸基团,3°端是羟基。它主要通过信使RNA的直接单切，或者间接摊制器译来实现基因调控作用。miRNA广泛存在于各种真核生物中，它在生物体的产生过程如图1 所示。
首先携带miRNA信息的基因通过RNA聚合酶Ⅱ转录生成较长的RNA，也就是通常所说的 pri-miRNA，然后pri-miRNA会被一种叫做 Drosha的RNA内切酶Ⅲ剪切成60~70个碱基的含有茎环结构的RNA,即pre-miRNA。随后，pre-miRNA被载体蛋白Exportin-5从细胞核运输到细胞质中。到了细胞质以后，pre-miRNA会从载体蛋白中脱落下来，被一种叫做Dicer的RNA 内切酶Ⅱ最终剪切成成熟的miRNA。此时的 miRNA是双链的结构，其中5'端热稳定性较差