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PCR快速检测大肠杆菌的研究
谢承佳
（扬州工业职业技术学院，江苏扬州225000）
· 13 -
摘要：大肠杆首是常见的肠道菌，也是食品中常用的粪源性污染卫生细菌学指标。本研究根落β-葡葡糖苷酸酶基图uidA设计引物建立大肠杆菌的快建检测PCR方法。结果是示该方法特异性好，对大肠杆首培养减的检测限为2.4x10CFU/mL,22份蔬莱样品大肠杆菌检出率为63.6%。
关键词：大肠杆首；PCR：检测：uidA
1概述
大肠埃希氏菌（Escherichia coli，简称E.coli)习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。由于大肠耗菌是人及各种动物肠道中的正常寄居菌，常随粪便从人及动物体排除，广泛散播于自然环境中，因此一日检出大肠杆菌，即意味着样品直接或间接地被粪便污染。固此，大肠杆菌被用作饮用水、食品等的粪源性污染卫生细菌学指标。我国食品和饮用水的相关国家标准中就明确规定了大肠杆菌的检出限。
大肠杆菌的传统检测和计数方法是MPN法(mostprobable mmber.最大可能数)，此法的基础是大肠杆菌在生长培养基上进行乳糖发醇酵、产气和形成吲噪，但这一方法需要6-7d的时间，已不能适应现代化品质管理的原则。聚合酶链式反应技术(Polymerase chain.reaction,PCR)是近年来分子生物学领域中迅速发展和广泛应用的一种技术，能够快速，特异地在体外上百万借的扩增目的基因或DNA片段。本研究以β-葡萄糖苷酸酶基因uidA设计引物,研究建立PCR技术快速检测大肠杆菌的方法。
2实验部分
2.1药品和仪器 2.1.1实验菌株
大肠杆菌(Escherichia eoliATCC 25922);大肠杆菌(Es-cherichia coli CMCC 44102); 大肠杆菌 (Escherichia coli ATCC
图24设计点及相关的
mN
图25优化结果
地方施加约束。得到机架各阶振型，如图16一图21。振型的频率最高3.8329赫兹，最低2.5216赫兹
3机架的优化
8099);金黄色葡萄球菌(StaphylococeusaureusCMCC26003）;枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis CMCC 63501);肺炎链球菌（Streptococ cus pneumoniae）;f霉荫(Streplomyees radiopugnans）。
2.1.2实验药品
蛋白陈，醇母抽提物.琼脂糖，琼脂粉，BROXOID；PCR试剂盒， MarkerDL2000，基因组提取试剂盒，南京诺唯赞生物科技有限公司
2.1.3实验仪器
Mastereyeler personal 型PCR 仪 Eppendorf;FR980 型生物电泳图像分析系统上海复日科技有限公司;TC-512型PCR仪Techne公司。
2.2实验方法
2.2.1菌株活化培养
将冻存菌中接种至LB固体培养基，37℃培养12-36h后，挑取单菌落接种至液体培养基，摇床培养。
2.2.2基因组DNA的提取
冻存菌活化后，挑取单菌落接种至液体培养基，37℃摇床培养 12-36h。按照细菌基因组提取试剂盒操作步骤提取基因组，1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。
2.2.3引物设计
查阅Genebank基因数据库，调取E.coliuidA基因全（转下页）机架的主要受力在项部通过轴承传递给项横梁的部分。优化前
应力结果如图22所示，位移结果如图，23所示。建立静力分析项，选择自动划分网格，在项部加载40000N的力插人固定端约束，给机架的底端一个固定约束，把等效应力的最大值设置为输出变量，
综上所述可以看出，通过采用参数化实体模型的优化方法对机架进行优化，使十分艰巨的工作变得简单、直观、高效。综合应力和位移分析，优化后的机架更为合理。应力分布较均匀，最大值在限定范围内，节点位移变化较平滑，最大变形量也在变形极限范围内。
4结论
本文针对架车机承载装置提出设计方案，并利用ANSYS软件对关键零件托架和机架进行了模态分析，从振型的频率看，不会发生共振。并对机架进行了优化，使机架优化后半径减小了，质量减轻了，使得架车机在稳定工作的基础上，达到了节省材料，降低成本的优化目的。
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