农林科研
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激素种类与浓度在红皮云杉胚性愈伤组织形成中的作用
郭成博
（黑龙江省林业科学研究所，黑龙江哈尔滨150081）
要：以未成熟合子胚为外植体，研究激素种类和浓度对不同发育时期的红成云杉胚性愈伤组织形成过程中超到的作用。确定不摘
同生长时期的最适宜的激素种类与浓度配方
关键词：红皮云杉；未成热胚；性愈伤组织
红皮云杉(PiceakoraienesisNakai)材质轻软，纹理通直，本材纤维长，是良好的用材、造纸原料。其天然林生长较慢，种子成熟率低，晶种选育难间。体细胞胚胎发生具有体细胞胚产生数量多，紧殖速度快，在短期内可以得到大量遗传上和形态上均一的苗本等优点24。本研究通过对激索种类、激素浓度在红皮云杉胚性愈伤组织发生过程中所起的作用进行研究，以期建立红皮云杉体细胞胚胎发生体系。
1材料与方法
1.1试验材料。不同发育时期种子采自东北林业大学实验林场，分别在6月15日、6月25日；7月5日、7月15日，7月25日、8月 5日、8月20日分批采集。东北林业大学位于东经126.63度，北纬 45.72度，在此选取生长优良、无病虫害的优树5株，当日每株树采集球果20个。
1.2实验设计。将未成熟的合子胚灭菌后各自接种在培养基中(如表1).培养基设计以LP培养基为基础，采用正交设计L4")进行激素种类与浓度的最优组合筛选，
2结果与分析
2.1不同取材时间的红皮云杉愈伤组织诱导的研究。将未成熟种子中的合子胚取出，接种于待试验的LP培养基中，培养20d，观察并记录外植体上产生胚性愈伤组织的情况，对其结果进行数据分析，如表2。其中，采集于6月15日的外植体胚性愈伤诱导频率为 0。采集于6月25日至7月25日外植体能够获得胚性愈伤组织，以 7月15日平均诱导率最高，高达32.40%；分析原固，此时合子胚应发育为胚胎选择阶段和胚的组织、器官分化阶段，愈伤组织快速生
研究表明，不同的取材时间是红皮云杉胚性愈伤组织发生的重长
要影响因素。相比较在6月15日至25日的外植体没能得到胚性愈伤组织，面且在继代培养时期出现化现象，甚至死亡。
2.2激素种类和浓度对红皮云杉胚性愈伤组织的影响。对于采集的外植体按试验设计分别接种到Ls(4")的培养基中进行愈伤组织诱导。通过方差分析，在红皮云杉合子胚胚性愈伤组织诱导过程
表1正交实验因素及水平Ls(43）
水严（蒙浓度mg"）
2.4-D 0.5 1.0 1.5 2.0
因素（激素种美）
BA 0.0 0.1 0.5 1.0
KT 0.0 0.1 0.5 1.0
表2红皮云杉不同发育时期合子胚胚性愈伤组织的诱导率(%）
数材日期 6月15日 6月25日 7月05日 7月15日
7月25日 8月05日
8月20日
接的数量（个） 0s
50 50 45
39 29
45
(%) 0
8.64 24.34 32.40
28.54 11.25
5.48
合子凝发疗状态半适明状册乳鱼雷胚
子叶前期子叶初期
子叶期具完整压
近成势
生长变化
接种合子旺积影大，锁色为策遇色，增养
10左右进新博化充亡
增券3天后，合于胚变大，7天左右出
提通明白色性状鲁伤通织。
同上
将养2天后，合子旺明量变大，5天左右 70%以上出现透明白色益状急伤理织。少部分外植体发生变化同上，大部分总代
培养竭化死亡。
5-7天以后，合子能变大，10天左右合子胚的点箱子叶处长出粘得装的式白色
更通织
60%以上合子耗变大，有金情组份产
生
12 13 14
表3不同取材时期、不同激素种类及浓度下的胚性愈伤组织诱导率(%)
董素成分（四g+） 2,4-D0,S+BA0+KT0 I'0LX+10V8+0Q-'2 2,4-D0,5+BA0,5+KT0,5 2,4-D0,5+BA1,0+
2,4-D1,0+BA0+KT0,5 2,4-D1,0+BA0,1+KT1,0 2,4-D1,0+BA0,5+ KT0 2,4-D1,0+BA1,0+KT0,1 2,4-D1,5+BA0+ KT1,0 2,4-D1,5+BA0,1+KT 2,4-D1,5+BA0,5+
2,4-D1,5+BA1,0+ KT 0 2,4-D1,5+BA0+KT0.1 2,4-D2,0+BA0.1+ KT0 2,4-D2,0+BA.0,5+
2.4-D2.0+BA1.0+KT0.3
6.15 0,00 0.00 0,00 0,00 0,00 0,00 0.00 0,00 0.00 0,00 0.00 0.00 0.00 0.00 0,00 0,00
6.25 18,85 19.25 26,22 26,54 31,44 32,00 40,08 33,02 17,32 20,11 19.87 18.45 29.68 12.86 14,41 14,86
整性查药的损的薄导事（%）
7.05 20,92 22.14 28,84 28,89 30,00 31,94 41.79 30,38 20.60 22,34 22.38 21.25 31.67 15.56 18,96 18,06
4.15 18,47 32.36 33,33 29,13 40,63 43,71 40.95 37,77 68 oroc 25.86 21.31 26.94 29.38 20,22 21,79
7.25 15,00 19.17 15,74 12,14 24,44 28,43 26.31 24,85 15.83 Er'ot 18.15 14.07 15.83 16.11 18,41 10,49
8,05 4,67 8.06 8,88 9,91 10,74 10,60 661 8,67 9.04 17,78 10.00 10.83 9.67 10.28 8,46 7,72
表4各时期胚性愈伤组织诱导率最佳处理组合
数村日期 6月25日 7月+5日 9月15日用 25 B*月+5日 8月20日
2, 4-D (ng-2l)
13 13 19 15
84 (mg-)
0.5 0.5 0,s
8.20 0,00 0,.00 0,00 0,00 1,82 4,58 6.04 5,28 4.58 7,00 6.54 6.86 4.22 6.86 4,72 3,89
KT (mg-* )。。 1,9
中，不同的激素种类及其浓度对于胚性愈伤的诱导差异显著(p<0. 05)
在所有激素均为添加的情况下，未成熟合子胚将膨大，面成熟的合子胚的胚轴伸长，子叶生长，变为黄绿色，但没有愈伤组织产生，诱导率为0(见表3)。对于添加了不同种类与浓度的培养基，胚性愈伤的诱导率有明显的提高。对于6月15日采集的外植体，在添加了各种激素后，仍没有胚性愈伤产生；6月25日－7月25日采集的外植体均在2.4-D为1.0mg·L-",BA,KT为0.1~0.5 mg-L-时胚性愈伤组织平均诱导率最大：在8月5日、8月20日采集的外植体当2.4-D的添加量达到1.5mgL-时，胚性愈伤诱导率最大。研究表明不同发育时期的外植体对于相同浓度的激素，产生愈伤组织的能力不尽相同。因此将不同发育时期的外植体，添加激素后诱导效果进行对比分析，获得最佳的激素及其浓度组合，如表4。
3结论
红皮云杉合子胚发育时期与胚性愈伤组织诱导的效果关系密切。6月中上旬的合子胚正处于胚胎选择时期，不能诱导出胚性愈伤组织；在6月下旬～7月中旬合子胚处于前子叶期、子叶初期，胚性食伤组织的平均诱导频率高（40.08%，41.79%，43.71%），并且胚性愈伤组织发育状态优良，7月下旬以后随着合子胚发育逐渐成熟，胚性愈伤组织的诱导率明显下降。
参考文献
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