SN ICS 65.020.01 CCS B 16
中华人民共和国出入境检验疫行业标准
SN/T 5558—2022
转基因香石竹（康乃馨）检测普通PCR和实时荧光PCR法Detection of genetically modified carnation (Dianthus caryophyllus)conventional PCR and real-time PCR methods
2022-07-07发布
2023-02-01实施
发 布
中华人民共和国海关总署
SN/T 5558—2022
转基因香石竹（康乃馨）检测普通PCR和实时荧光PCR法
1 范围
本文件规定了香石竹（康乃馨）中转基因成分的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。
本文件适用于香石竹（康乃馨）中转基因成分的定性筛选检测，也适用于转基因香石竹（康乃馨）MoonberryTM25958、MoonvelvetTM26407、MoonliteTM 123.2.38（40644）和MoonshadeTM 123.2.2 （40619）品系的品系特异性定性检测。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求GB/T 19495.3 转基因产品检测 核酸提取纯化方法GB/T 19495.7 转基因产品检测 抽样和制样方法GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测
3 术语、定义和缩略语3.1 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1.1
香石竹（康乃馨）Dianthus caryophyllus
石竹科石竹属多年生草本植物。香石竹在全世界范围广泛种植，是四大鲜切花之一，也可提取香精用做化妆品原料。3.1.2
转基因 transgene
将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过生物工程技术，使其在该物种中进行表达，以便使该物种获得新的品种特征。3.1.3
实时荧光 PCR real-time polymerase chain reaction
实时荧光聚合酶链式反应。是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。3.1.4
内源基因 endogenous gene
在被检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因，一般为该物种特有基因。该基因可用SN/T 5558—2022 于判定物种特异性。3.1.5
外源基因 exogenous gene
利用生物工程技术转入的其他物种的基因。注：转入外源基因后，该生物品种表现新的生物学性状。3.1.6
最低检出限 limit of detection
定性方法的最低检出限是指被检测物能被可靠检出的最低浓度或含量。3.2 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
ANS：anthocyanidin synthase gene，花青素合成酶基因；BHQ1：Black hole quencher 1，黑洞猝灭基团1。bp：base pair，碱基对。
BP40：Flavonoid3'，5'-hydroxylase（F3'5'H）enzyme of Viola wittrockiana，三色堇黄烷酮3'，5'-羟化酶基因。
CHS：chalcone synthase gene promoter，查尔酮合成酶基因启动子。
Ct：Cycle threshold，每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。CTAB：cetyltrithylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵。
DFR：dihydroflavonol-4-reductase terminator，二氢黄酮醇-4-还原酶基因终止子。DNA：deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸。dATP：deoxyadenosine triphosphate，脱氧腺苷三磷酸。dCTP：deoxycytidine triphosphate，脱氧胞苷三磷酸。dGTP：deoxyguanosine triphosphate，脱氧鸟苷三磷酸。dNTP：deoxyribonucleoside triphosphate，脱氧核苷三磷酸。dTTP：Deoxythymine triphosphate，脱氧胸腺嘧啶三磷酸。EDTA：ethylene diaminetetraacetic acid，乙二胺四乙酸。
F35H：Flavonoid 3'，5'-hydroxylase（F3'5'I）enzyme of Petunia hybrida，矮牵牛黄烷酮3'，5’-羟化酶基因。
FAM：Carboxyfluorescein，羧基荧光素。PCR：polymerase chain reaction，聚合酶链式反应。
SURB：herbicide tolerant acetolactate synthase（ALS）enzyme，抗除草剂型乙酰乳酸合酶基因。SDS：sodium dodecylsulfate，十二烷基磺酸钠。
pCaMV 35S：35S promoter from Cauliflower mosaic virus，来自于花椰菜花叶病毒的35S启动子。Taq：Taq DNA polymerase，DNA聚合酶。TE：Tris-HCl、EDTA缓冲液。
Tris：tris（hydroxymethyl）aminomethane，三（羟甲基）氨基甲烷。
4 方法原理
提取样品DNA后，采用普通PCR或实时荧光PCR技术对样品进行筛选基因检测，根据普通PCR 电泳结果或实时荧光PCR扩增曲线的情况，判断样品中是否含有转基因成分。
对筛选基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，如需进行品系鉴定，则采用标准中的品23