NY/T 2959-2016
兔波氏杆菌病诊断技术
Diagnostic technique for bordetella caniculum
2016-10-26发布
2017-04-01实施
前 言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。
本标准起草单位;中国动物卫生与流行病学中心、西北农林科技大学。
3 流行病学
兔波氏杆菌病是由支气管波氏杆菌引起的一种慢性呼吸道传染病。该病传播广泛，在兔群中的感染率非常高，常呈地方性流行，多为慢性，急性败血性死亡较少。多发于气候易变化的春秋两季，主要经呼吸道传播，带菌兔和病兔鼻腔分泌物中的病菌随咳嗽、喷嚏飞沫污染饲料、饮水、笼舍和空气传染健海站。
4 临床症状
4.1 鼻炎型
病兔精神不佳，闭眼，鼻腔流出浆液性或黏液脓性分泌物。病兔打喷嚏，呼吸困难，经常用前爪抓擦鼻部，鼻孔周围及鼻腔黏膜充血，流出多量浆液性或黏液性分泌物。
4.2 支气管肺炎型
鼻腔黏膜红肿、充血，有多量白色黏液脓性分泌物，打喷嚏，呼吸困难，鼻孔形成堵塞性痂皮。
5 病理学变化
鼻腔、气管黏膜充血、水肿，鼻腔内有浆液性、黏液性或黏液脓性分泌物。严重病例可见鼻甲骨萎缩。肺部多见于心叶和尖叶有大小不一的病灶，重症病例侵及全肺叶，病变部稍隆起、坚实、呈暗红色、褐色;有些病例肺有脓包，肝脏表面也有散在脓包，脓包内积有黏稠奶油样乳白色脓汁。
6 微生物学诊断方法
6.1 采样
6.1.1 发病兔样品采集及处理
用75%酒精棉签;对兔双侧鼻孔前及正前庭 0.5cm处进行消毒。然后;用肉汤湿润的无菌小棉签，分别在鼻孔内1cm 处旋转采取鼻黏液，无菌操作放入痢特灵改良肉汤增菌液中。
6.1.2 死亡兔样品采集及处理
无菌操作采取病变的肝脏、脾脏、肺脏少许放入无菌塑封袋中，吸取2 mL～3 mL.胸腔渗出液。样品 2℃～8℃保存，2h 内送实验室进行细菌分离培养。
6.2 细菌形态观察
将病料制作抹片2张~3张，分别用革兰氏染色和美蓝染色;油镜下观察。兔波氏杆菌病料抹片镜下观察细菌形态∶革兰氏染色阴性，小球杆菌散在分布于病变组织中;细菌的外围有不易着色透亮的黏液圈，在中性粒细胞外围最容易找到兔波氏杆菌。美蓝染色，蓝紫色小球杆菌，无两极着色现象。
6.3 分离培养
6.3.1 接种
对鼻黏液采集的棉拭子直接划线接种改良麦康凯（痢特灵）琼脂培养皿 4个（其中，间断划线法接种2个平皿，连续划线法接种2个平皿）;肝脏、脾脏、肺脏及胸腔渗出液，每种脏器接种2 个绵羊鲜血鲍一姜氏平板，用接种环在平板上先涂抹0.5 cm×（2~3）cm大小.然后用接种环分别采取间断和连续划线接种全部平板.37℃ 24 h～48 h培养。
6.3.2 可疑菌落初选
在改良麦康凯（痢特灵）琼脂平板上为中等大小、圆形、表面光滑、边缘整齐、湿润、透明呈茶色菌落;或者在绵羊鲜血鲍一姜氏平板上为灰白色、圆形、凸起、表面光滑、边缘整齐、有明显的β溶血环的中等大小菌落，为兔波氏杆菌可疑菌落。
6.4 染色镜检