NY/T 563-2016 代替NY/T 563—2002
禽霍乱（禽巴氏杆菌病）诊断技术
Diagnostic techniques for fowl cholera (avian pasteurellosis)
2016-10-26发布2017-04-01实施
前 言
本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。
本标准代替NY/T 563—2002《禽霍乱（禽巴氏杆菌病）诊断技术》。与NY/T 563—2002相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下∶
——"范围"部分增述了多杀性巴氏杆菌 PCR 检测方法和荚膜多重PCR鉴定方法的适用性（见1）;
——"病原分离"部分增加了多杀性巴氏杆菌生长的脑心浸出液琼脂培养基和脑心浸出液肉汤培养基（见6.1）;
——增加了多杀性巴氏杆菌PCR检测方法（见6.2）;
——增加了用于多杀性巴氏杆菌荚膜型鉴定的多重 PCR检测方法（见 6.3）。
本标准由农业部兽医局提出。
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAT/TC 181）归口。
5.1.3 琼脂板
制备方法见 B.4。
5.2 操作方法
5.2.1 打孔
在制备的琼脂板上，用直径4 mm 的打孔器按六角形图案打孔或用梅花形打孔器打孔。中心孔与外周孔之间的距离为3 mm。将孔中的琼脂挑出，勿伤边缘，避免琼脂层脱离平皿底部。
5.2.2 封底
用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂微熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。
5.2.3 加样
灭菌生理盐水（A.3）稀释抗原∶用微量移液器将稀释的抗原加入到中间孔，标准阳性血清分别加入外周的1孔、4孔中，标准阴性血清（每批样品仅做一次）和待检血清按顺序分别加入外周的2孔、3 孔、5 孔、6孔中。每孔均以加满不溢出为度，每加一个样品应换一个吸头。
5.2.4 感作
加样完毕后，静止5min～10min.将平皿轻轻倒置，放入湿盒内，置于37℃温箱中作用，分别在24h 和 48 h 观察结果。
5.3 结果判定
5.3.1 实验成立条件
将琼脂板置于日光灯或侧强光下观察，标准阳性血清与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线，标准阴性血清与抗原孔之间不出现沉淀线。则试验成立。