NY/T 575-2019 代替NY/T 575—2002
牛传染性鼻气管炎诊断技术Diagnostic techniques for infectious bovine rhinotracheitis
2019-11-01实施
2019-08-01发布
1 范围
本标准规定了牛传染性鼻气管炎的诊断技术要求。
本标准规定的病毒分离鉴定适用于牛疱疹病毒Ⅰ型的分离鉴定;微量血清中和试验和爵联免疫吸附试验适用于牛群牛传染性鼻气管炎的流行病学调查、监测和诊断;实时荧光PCR试验适用于快速检测牛疱疹病毒Ⅰ型感染。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法
NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范
3 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
BoHV-1∶牛疱疹病毒Ⅰ型（bovine herpesvirus type 1）
CPE;细胞病变（cytopathic effect）Ct值∶循环阈值（cycle threshold）
IBR∶牛传染性鼻气管炎（infectious bovine rhinotracheitis）
MDBK∶牛肾细胞系（madin-darby bovine kidney cell line）
TCID.。;组织培养半数感染量（50% tissue culture infective doses）
4 病毒分离鉴定
4.1 材料
4.1.1 试剂
4.1.1.1 青霉素-链霉素溶液（青霉素10 000 U/mL，链霉素10 000 μg/mL）。
4.1.1.2 无 BoHV-1抗体新生牛血清。
4.1.1.3 DMEM培养液、细胞生长液和细胞维持液（配制方法见附录 A）。
4.1.1.4 0.25% EDTA胰酶。
4.1.1.5 BoHV-1标准阳性血清和 BoHV-1标准阴性血清。
4.1.1.6 MDBK 细胞或睾丸原代或睾丸次代细胞。
4.1.2 器材4.1.2.1 组织匀浆机。
4.1.2.2 离心机。
4.1.2.3 恒温二氧化碳培养箱。
4.1.2.4 倒置显微镜。
4.1.2.5 无菌棉拭子。
4.1.2.6 0.22μm孔径滤器。
4.1.2.7 微量可调移液器。