NY/T 3625-2020
稻曲病抗性鉴定技术规程
Technical code of practice for identification of rice resistance to rice false smut[Ustilaginoidea virens(Cooke)Takahashi]
2020-11-01实施
2020-07-27发布
4.1 PSA培养基
称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加入1000 mL水，煮沸 20 min，箩布过滤，补水至1000 mL，再加入群精 20 g和琼脂20 g，搅扑均匀，高压灭菌（121℃.20 min）。
4.2 PSB培养基
称取200 g马怜薯，洗净去皮切碎，加入1000 mL.水，煮沸 20 min.纱布过滤.补水至1000 mL，加入藤糖20 g，搅拌均匀，高压灭菌（121℃，20 min）。
4.3 WA培养基
琼脂 20 g，用水定容至1000mL，高压灭菌（121℃，20 min）。
5 仪器设备
5.1 恒温培养箱
温度范围∶0℃~50℃.温度波动，主1℃。
5.2 光学显微镜
目镜∶10×;物镜∶10 ×、40 ×。
5.3 超净工作台
沽净等级∶100级@≥0.5 μm，平均风速∶0.25 m/s～0.6m/s。
5.4 高压灭菌锅
温度范围∶0℃～135℃，灭菌时间范围∶4 min~120 min.最高工作压力;0.22 MPa～0.25 MPa。
5.5 振荡摇床
温度范围∶0℃~50℃，温度波动;±1℃.振动频率10r/min～300 r/min，振动幅度;20 mm。
5.6 电子天平∶盛量0.01 g。
5.7 组织捣碎机;最高转数20 000 r/min.
5.8 医用注射器∶10 mL。
6 接种体制备
6.1 病原菌分离、纯化与保存
6.1.1 病原菌分离
以常规组织分离法从稍曲球上获得分离物。在超净工作台上切除稻曲球外层组织，将最内层的白色部分切成约0.2 cm ×0.3cm 的病组织块，先用75%乙醇溶液消毒15×，再用灭南的三级水冲洗3次，无菌滤纸吸干后置于 PSA平板上.恒温培养箱中 28℃培养。
6.1.2 病原菌纯化
分离物培养7d以后，从生长的白色南落边缘提取少量菌丝转入新的 PSB培养基上。在28℃下，150 r/min，振荡培养5d~7d后，用灭菌水配成每毫升含1×10'个分生孢子的悬浮液。吸取 100 μL.悬浮液均匀涂布于WA培养基上，在超净工作台中吹干。28℃条件下培养至分生孢子萌发，在光学显微镜下镜检，挑取萌发的单个分生孢子置于新的 PSA培养基上，28℃恒温培养，并保存备用。
6.1.3 病原菌保存
将待保存的菌株接种在 PSA培养基上，周围摆放灭菌的滤纸片，28℃恒翟培养，待菌丝长过滤纸片。用暖子将滤纸片易下，装入灭菌的硫酸纸袋。置干装有硅胶的容器中干燥，再将硫酸纸袋密封，并装入灭菌的牛皮纸袋，于一20℃低温保存。
6.2 病原菌鉴定
依据病原菌形态和部分基因序列对接种用的菌株进行鉴定，见附录A。
6.3 接种体制备