NY/T 3629-2020
马铃薯黑胫病菌和软腐病菌PCR检测方法
Detection of pathgenic bactera for potato blackleg and soft rot by PCR method
2020-11-01实施
2020-07-27发布
4.12 2 800 bp DNA分子量标准物。
4.13 6×电泳上样缓冲液。
5 主要仪器
5.1 PCR仪。
5.2 台式高速离心机《离心力1180g~12 470 g）。
5.3 电泳仪、水平电泳槽。
5.4 凝胶成像仪。
5.5 移液器（0.1μL~2.5μL、0.5μL~10μ、10 μl~100μ、20μL~200μL、100 μL～1000μL）.
5.6 灭菌锅等。
6 操作步骤
6.1 对照的设立
试验分别设立阳性对照、阴性对照和空白对照（即用等体积的水代替模板 DNA作空白对照），在检测过程中要同待测样品一同进行如下操作。
6.2 样品制备
取马管警试管苗、茎、块茎维管束组织或发病组织0.1g·现用现取或4℃条件下保存（少于7d。
6.3 DNA提取
6.3.1 植物组织样品 DNA 提取
将样品置于研钵中.加液氮研磨成粉末，转至1.5 mL离心管。后续操作参见植物基因组 DNA 提取试剂盒推荐步骤进行。
6.3.2 菌株样品 DNA提取
菌株水溶液经4 000 r/min离心后，弃掉上清液.留沉淀。后续操作参见植物基因组 DNA 提取试剂盒推荐步骤进行。
6.4 PCR 扩增
6.4.1 PCR扩增引物
上、下游引物为Pa、Pcc、Dch 的特异性引物，见附录A。
6.4.2 PCR 反应体系
按表1顺序加入相应试剂（缩略语见附录 B），混匀.离心 10 s，使液体都沉降到 PCR 管底。