NY/T 3785-2020
葡萄扇叶病毒的定性检测实时荧光PCR法
Qualitative detection of grapevine fanleaf virus—Real time fluorescence PCR method
2021-04-01 实施
2020-11-12发布
1范围
本标准规定了葡萄植株和离体繁殖材料中葡萄扇叶病毒的实时荧光 PR 检测方法。
本标准适用于倘萄植株和离体繁殖材料十而髓黄的定性检测。
2 规范性引用文件
5 仪器与设备
5.1 实时荧光 PCR检测仪。
5.2 超微量紫外核酸蛋白检测仪。
5.3 电子天平∶感量为0.01 g。
5.4 高速冷冻离心机∶转速在12000 r/min 以上。
5.5 恒温金属浴。
5.6 微量移液器∶量程分别为0.1μL～2.5μ、0.5μ～10 μL、5μ～20 μl、10μ~100 μL、20 μl～200 μL.、100 μl.~1 000 μl。
6 试剂与耗材
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682中一级水的规格。
6.1 M-MI.V反转录酶∶浓度为200 U/μL。
6.2 dNTPs∶浓度为2.5 mmol/L.。
6.3 DEPC水∶取 DEPC100 以L加双蒸水至100 ml.混，室温过夜，121℃高压灭菌 15 min。
注∶由于 DEPC具有刺激性和毒性，因此处理时应在通风橱中进行。也可购买商品化的 DEPC处理水。
6.4 10%二烷基肌氨酸钠∶称取5.00 g二烷基肌氨酸钠，溶于 DEPC处理的灭菌双蒸水中，定容至50 ml。
6.5 随机引物∶含有6个碱基的随机序列。