SC/T 7235-2020
罗非鱼链球菌病诊断规程
Code of diagnosis for tilapia streptococcosis
2020-08-26发布
2021-01-01 实施
1 范围
本标准给出了罗非鱼链球菌病诊断所需试剂和材料、器材和设备、临床症状∶规定了采样、细菌分离与纯化培养、生理生化鉴定、PCR 检测与综合判定等方法。
2 规范性引用文件
4 试剂和材料
4.1 除非另有说明，标准中使用的水为蒸馏水、去离子水或与其相当纯度的水。
4.2 16S rRNA 基因序列扩增引物 27F;5'AGAGTTTGATCMTGGCTCAG3'，1492R∶5'-TACG GYTACCTIGTTACGACTT-3'，—20℃保存。
4.3 dNTPs（各10 mmol/L），含dATP、dTTP、dGTP、dCTP各10 mmol/L的混合物，—20℃保存。
4.4 10×PCR缓冲液，无Mg2离子，-20℃保存。
4.5 Taq DNA聚合酶（5 U/μL.），—20℃保存。
4.6 细菌生化鉴定管或生化鉴定卡，商品化试剂。
4.7 脑心浸液肉汤琼脂培养基见附录 A中的 A.1。
4.8 血琼脂平板见A.2。
4.9 TE缓冲液（pH 8.0）见A.3。
4.10 10%SDS溶液见A.4。
4.11 蛋白酶K（20 mg/mL）见A.5。
4.12 CTAB/NaCl溶液见 A.6。
4.13 50×TAE电泳缓冲液见 A.7。
4.14 3%过氧化氢（H2O2）溶液见 A.8
4.15 半固体琼脂应符合GB4789.28—2013中2.8的规定。
5 器材和设备