ICS 67.160.10
CCS C 151
T / NAIA
团 体 标 准
T/NAIA 0297—2024
草本葡萄酒多糖含量的测定
乙醇沉淀-苯酚硫酸法
Determination of polyacrylamide content in herbal wines
Alcohol-phenol-sulfuric acid method
2024-06-23 发布 2024-06-30 实施
宁夏化学分析测试协会 发 布
T/NAIA 0297—2024
前 言
本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》规定
编写。
本文件由北方民族大学生物科学与工程学院提出。
本文件由宁夏化学分析测试协会归口。
本文件起草单位：北方民族大学、宁夏化学分析测试协会。
本文件主要起草人：朱娟娟、马海军、 侯丽君、赵豪豪、安凡、郭姝彤。
I
草本葡萄酒多糖含量的测定 乙醇沉淀-苯酚硫酸法
1 范围
本文件规定了乙醇沉淀-苯酚硫酸法测定草本葡萄酒多糖含量的分析方法。
本文件适用于草本葡萄酒中多糖含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本
文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB／T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
草本葡萄酒
在中医药学、烹饪学和营养学理论指导下，将药食同源类中草药和红色酿酒葡萄按照一定比例
混合，经全部或部分发酵酿制而成的，含有一定酒精度的发酵酒。
4 原理
利用低温条件下多糖在乙醇溶液中聚合形成微颗粒沉淀，再在硫酸的作用下先水解成单糖，并
迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，用分光光度法于 490nm 波长处测定期多
糖含量。
5 试剂和材料
本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
5.1 浓硫酸。
5.2 葡萄糖标准溶液（0.1 g/L）：准确称取 105 ℃干燥恒重的 D-无水葡萄糖 0.1 g （精确到 0.000
1 g），加蒸馏水溶解，并定容至 1 000 mL。
5.3 苯酚溶液：苯酚使用重蒸苯酚，称取重蒸苯酚 10 g，加蒸馏水溶解，并定容至 150 ml，随后保
存于棕色瓶中备用。
6 操作步骤
1
T/NAIA 0297—2024
6.1 标准曲线的绘制：
准确吸取 0.1 g/L 葡萄糖标准溶液 0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL 分置于 25 mL
具塞试管中，各试管中添加蒸馏水至 2.0 mL，再添加 1.0 mL 苯酚溶液，迅速加入 5.0 mL 浓硫酸,
摇匀后放置 5 min，置于 100 ℃ 水浴中加热 15 min，取出冷却至室温；另以水 2 mL 加苯酚和浓
硫酸，同上操作为空白对照，于 490 nm 处测定吸光度，绘制标准曲线。
6.2 样品处理及测定：
分别取 25 mL 草本葡萄酒（温度 20℃）于 50 mL 瓷坩埚中在 60 ℃ 下挥发至近干，10 mL 水溶
解转移至 50 mL 离心管中加入 40 mL 无水乙醇，混匀后 4 ℃ 沉淀 24 h ，12 000 r/min 离心 10
min，除去上清液，保留沉淀，随后加入等体积 80% 乙醇溶液 12 000 r/min 离心 5 min，去离子水
溶解后定容至 25 mL 待测。
准确吸取适量样品溶液，按标准曲线绘制的方法测定吸光度，根据标准曲线计算出吸取的待测液中
葡萄糖的浓度。
7. 测定结果的计算
7.1 计算公式：
样品中多糖含量根据下式计算：
草本葡萄酒多糖含量（mg /L）=
式中：
………………………………（1）
M —根据标准曲线计算得样品测定液的葡萄糖含量，单位为 mg/L；
V1 —样品定容体积，单位为毫升（mL）；
V2—比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升（mL）；
0.9—葡萄糖换算成葡聚糖得校正系数。
计算结果保留至小数点后两位。
7.2 重复性：
每个试样取三个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，在重复条件下三次独立测定结
果的绝对差值不应超过算术平均值的 10 %。
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