ICS 01.040.11
00
CCS C10/29
T/HBIQA
河 北 省 检 验 检 疫 学 会 团 体 标 准
SN
T/HBIQA 0009—2024
人体血液中 7 种多激酶类药物含量的测定
高效液相色谱-串联质谱法
Determination of seven polykinases in human blood by HPLC-MS/MS
2024-08-15 发布
2024-10-15 实施
河 北 省 检 验 检 疫 学 会 发 布
T/HBIQA 0009—2024
前
言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由河北省检验检疫学会提出并归口。
本文件起草单位：河北省药品医疗器械检验研究院、河北医科大学药学院。
本文件主要起草人：李挥、梁艳、宋莉、李怡霖、刘亚楠。
T/HBIQA 0009—2024
人体血液中 7 种多激酶类药物含量的测定
高效液相色谱-串联质谱法
1
范围
本文件规定了人体血液中 7 种多激酶类药物含量的高效液相色谱-串联质谱检测方法。
本文件适用于人体血液中索拉菲尼、阿西替尼、埃罗替尼、西地尼布、布立尼布、利尼伐尼、
戈伐替尼含量的测定。
2
规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引
用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修
改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
3
术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4
原理
样品经甲醇提取、无水硫酸镁盐析、N-丙基乙二胺（PSA）净化后，涡旋混匀、冷冻离心、
氮吹复溶，进行液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。
5
试剂和材料
5.1
试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
5.1.1
甲醇：色谱纯。
5.1.2
甲酸：色谱纯。
5.1.3
无水硫酸镁。
5.1.4
N-丙基乙二胺（PSA）。
5
T/HBIQA 0009—2024
5.1.5
标准品：索拉菲尼（CAS 号：475207-59-1），阿西替尼（CAS 号：319460-85-0） ，埃
罗替尼 （CAS 号： 183321-74-6），西地尼布 （CAS 号：288383-20-0），布立尼布（CAS
号： 649735-46-6），利尼伐尼（CAS 号：796967-16-3）和戈伐替尼（CAS 号：928037-13-2）
的纯度均大于等于 98%。
5.1.6
混合标准储备溶液的配制：分别称取布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐
替尼、埃罗替尼、西地尼布 1 mg（精确到 0.01 mg），置 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并
定容至刻度，分别配制成布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐替尼、埃罗
替尼、西地尼布的储备溶液，于-20℃保存至分析。
5.1.7
内标储备液的配制：称取 1 mg（精确到 0.01 mg）多韦替尼，置 10 mL 量瓶中，用甲醇
溶解并定容至刻度，得到 0.1 mg/mL 的内标储备液，于-20℃保存至分析。
5.1.8
标准中间溶液的配制：取 500 μL 标准储备溶液（5.1.6）至 50 mL 量瓶中，加甲醇稀释，
涡旋混匀，得到 1 μg/mL 的标准中间溶液，于-20℃保存备用。
5.1.9
0.1%（体积分数）甲酸水溶液：准确移取甲酸 1.0 mL 置于 1 L 量瓶中，用水定容至刻度，
混匀。
6
仪器设备
6.1
液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。
6.2
氮吹浓缩仪。
6.3
涡旋振荡器。
6.4
电子分析天平（精度 0.01 mg)。
6.5
高速冷冻离心机（最高转速 22000 rpm）。
7
试样制备
全部血液样本充分混匀后，在 4℃、3000 r/min 条件下离心 10 min，取管内上清液分装，-80℃
储存待测。
8
试验步骤
8.1 试样预处理
取 200 μL 血液试样（7）于 5 mL 离心管中，准确加入 1.0 mL 甲醇、250 mg 无水 MgSO4、
6
T/HBIQA 0009—2024
35 mg PSA 进行盐析和净化，涡旋混匀 30 s 后，经 12000 r/min，4℃冷冻离心 10 min。上清液全
部取出，氮吹浓缩至干，用 300 μL 含有内标的甲醇复溶，涡旋混匀 30 s，过 0.22 μm 微孔滤膜，
待测定。
8.2 标准曲线
取相应的空白样品，按照 7 步骤进行处理，用得到的空白样品提取液，将混合标准储备溶液
逐级稀释，得到布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐替尼浓度为 5、10、25、50、
100、250、400 和 500 ng/mL，埃罗替尼、西地尼布浓度为 10、20、50、100、200、500、800、
和 1000 ng/mL 的系列混合标准工作溶液（内标多韦替尼的浓度为 100 ng/mL），浓度由低到高
进行检测，以分析物与内标定量离子的峰面积比值对质量浓度作图，做出内标标准曲线回归方程。
8.3 仪器参考条件
8.3.1
液相色谱参考条件
a. 色谱柱：Zorbax RRHD Stablebond Aq（50 ×2.1 mm，1.8 μm），或相当者。
b. 流动相：A 相为 0.1%甲酸溶液；B 相甲醇。
c. 柱温：40℃。
d. 进样体积：5 μL。
e. 流速：0.3 mL/min。梯度洗脱程序见表 1：
表 1 梯度洗脱程序表
时间/min 流动相 A/% 流动相 B/%
1 70 30
2 50 50
2.5 0 100
3 0 100
3.1 70 30
5 70 30
8.3.2 质谱参考条件
a. 电离方式：电喷雾电离，正离子模式。
b. 电喷雾电压：3500 V。
c. 鞘气流速； 50 Arb。
d. 辅助气流速：10 Arb。
7
T/HBIQA 0009—2024
e. 离子传输温度：325℃。
f. .雾化温度：350℃。
e. 碰撞气：氩气。
其他质谱条件见附录 A。
8.4
测定
8.4.1 测定步骤
将试样溶液注入液相色谱-串联质谱仪中，得到 7 种多激酶抑制剂的质谱响应值，根据标准曲
线得到待测液中 7 种多激酶抑制剂的浓度。样品溶液中各组分的响应值应在标准曲线的线性范围
内，超过线性范围则应稀释后再进样测定（内标物根据测定结果，添加与稀释倍数相同倍数的内
标量，开展前处理实验，稀释后再进样分析）。
8.4.2 定性判定
在相同条件测定样品溶液和标准溶液，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液
中的某种组分峰的保留时间一致（变化范围在±2.5%），并且所选择的两对子离子的质荷比一
致，样品溶液中定性离子相对丰度与浓度相当标准工作溶液中定性离子的相对丰度进行比较时，
相对偏差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在该组分。
7 种多激酶抑制剂标准物质的色谱图参见附录 B。
表 2 定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度 ＞50% ＞20%~50% ＞10%~20% ≤10%
允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50%
8.4.3 数据计算
血液样本中各药物浓度含量为：
式中:
Xi——试样中待测组分含量，单位为纳克每毫升(ng/mL)；
ρi——由标准曲线得出的测试液中某种组分的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；
V定容——定容体积，单位为毫升(mL)；
8
T/HBIQA 0009—2024
K——稀释倍数；
V试样——试样体积，单位为毫升(mL)。
计算结果保留三位有效数字。
8.5
空白试验
取空白血样，按 8.1-8.4 测定步骤进行。
8.6 定量限和重复性
8.6.1 定量限
本方法索拉菲尼、布立尼布、利尼伐尼、阿西替尼、戈伐替尼的定量限为 5 ng/mL，西地尼
布、埃罗替尼的定量限为 10 ng/mL。
8.6.2 重复性
在重复性实验条件下获得两次独立实验结果的绝对差值不得超过算数平均值的 15%。
9
T/HBIQA 0009—2024
附 录 A
（资料性附录）
质谱参数
表A.1 目标物的质谱参数和参考保留时间
名称 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 碎裂电压 (V) 碰撞电压 (V) 保留时间 (min)
索拉菲尼 465.1 252.0a/270.0 136 33/24 1.50
阿西替尼 387.1 220.9a/355.9 77 51/20 1.16
多韦替尼 393.1 334.0a/336.0 86 27/29 1.11
埃罗替尼 394.1 278.0a/336.0 101 31/24 1.14
西地尼布 451.2 84.0a/112.0 73 45/24 1.14
布立尼布 371.2 149.0a/331.0 87 33/25 1.40
利尼伐尼 376.2 207.0a/251.0 84 45/26 1.34
戈伐替尼 634.2 184.0a/451.0 79 22/29 1.12
a代表定量离子
10
T/HBIQA 0009—2024
附 录 B
（资料性附录）
多反应监测色谱图
RT: 0.00 - 4.50
RT: 0.00 - 4.50
100
NL: 2.20E7 100 NL: 6.15E6
m/z= 147.57-148.57 F: + c ESI
m/z= 206.50-207.50 F: + c ESI
90
SRM ms2 371.150 90 SRM ms2 376.150
Relative Abundance
80 Ⅰ 149.070-149.072, Relative Abundance 80 Ⅱ 225.124-225.126,
70 165.053-165.055, 70 234.041-234.043,
313.124-313.126] MS 3LY23 251.124-251.126] MS 3LY23
60 60
50 50
40 40
30
30
20
20
10
10
0
0
0
1 2 3 4 0 1 2 3 4
RT: 0.00 - 4.50
100
Time (min) NL: 3.12E6 RT: 0.00 - 4.50 Time (min) NL: 5.02E5
100
m/z= 220.54-221.54 F: + c ESI
m/z= 307.62-308.62 F: + c ESI
90
SRM ms2 387.100 90 SRM ms2 393.138
[221.041-221.043,
[308.124-308.126,
Relative Abundance
80 Ⅲ 298.053-298.055, Relative Abundance 80 Ⅳ 334.124-334.126,
70 328.112-328.114, 70 336.124-336.126,
356.041-356.043] MS 3LY23 362.124-362.126] MS 3LY23
60 60
50 50
40 40
30
30
20
20
10
10
0
0
0
1 2 3 4 0 1 2 3 4
RT: 0.00 - 4.50 Time (min) RT: 0.00 - 4.50 Time (min)
100
NL: 2.19E6 100 NL: 7.73E4
m/z= 275.55-276.55 F: + c ESI
m/z= 69.58-70.58 F: + c ESI
90
SRM ms2 394.138 90 SRM ms2 451.200
[276.053-276.055,
[70.082-70.084,
Relative Abundance
80 Ⅴ 278.124-278.126, Relative Abundance 80 Ⅵ 84.124-84.126,
70 304.124-304.126, 70 112.124-112.126,
336.124-336.126] MS 3LY23 340.124-340.126] MS 3LY23
60 60
50 50
40 40
30
30
20
20
10
10
0
0
0
1 2 3 4 0 1 2 3 4
RT: 0.00 - 4.50
100
90
80
Relative Abundance 70 60 50 40
30
Time (min) Ⅶ NL: 9.49E6 RT: 0.00 - 4.50 Time (min) Ⅷ NL: 2.81E6
100
m/z= 251.55-252.55 F: + c ESI 90 m/z= 183.70-184.70 F: + c ESI
SRM ms2 465.062 SRM ms2 634.238
[252.053-252.055, 80 [184.207-184.209,
270.124-270.126, 272.041-272.043,
406.041-406.043, Relative Abundance 70 60 50 40 340.112-340.114,
447.053-447.055] MS 3LY23 451.124-451.126] MS 3LY23
30
20 10 20 10
0
0 1 2 3 4 0 0 1 2 3 4
图 B. 1 7 种多激酶和多韦替尼（内标）的多反应监测色谱图
布立尼布 (Ⅰ)、利尼伐尼(Ⅱ)、阿西替尼(Ⅲ)、多韦替尼 IS(Ⅳ)、埃罗替尼(Ⅴ)、
西地尼布(Ⅵ)、 索拉菲尼(Ⅶ)、戈伐替尼(Ⅷ)的典型多反应监测色谱图
——————————————————
11