ICS 13.300;11.100 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T355242017
化学品 浮萍生长抑制试验
Chemicals-Lemna sp. growth inhibition test
2018-07-01实施
2017-12-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 中华人民共 和 国
国家标准化学品浮萍生长抑制试验
GB/T35524—2017
*
中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029) 北京市西城区三里河北街16号（100045)
网址：www.spc.org.cn 服务热线：400-168-0010 2018年1月第一版
*
书号：155066·1-58306
版权专有 侵权必究 GB/T35524—2017
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准和经济合作与发展组织（OECD）化学品测试导则NO.221（2006年）《浮萍生长抑制试验》
(英文版)的技术内容相同。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：上海市检测中心、环境保护部固体废物与化学品管理技术中心、中国检验检疫科
学研究院、上海出入境检验检疫局、环境保护部南京环境科学研究所。
本标准主要起草人：张京估、梁艺怀、殷浩文、张琨、刘纯新、郭琳琳、陈会明、张静、陈相、缪文彬、 石利利、刘济宁。
- GB/T35524—2017
化学品浮萍生长抑制试验
1范围
本标准规定了化学品浮萍生长抑制试验的术语和定义、受试物所需信息、原理、参比物、仪器设备、 试验系统、试验程序、质量控制、数据与报告。
本标准适用于测试化学品对淡水水生生物浮萍属（Lemna）的毒性。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 21801 化学品 快速生物降解性 呼吸计量法试验 GB/T 21802 化学品 快速生物降解性 改进的MITI试验（I） GB/T 21803 化学品 快速生物降解性 DOC消减试验 GB/T 21831 化学品 快速生物降解性 密闭瓶法试验 GB/T 21845 化学品 水溶解度试验 GB/T 21852 化学品 分配系数（正辛醇-水） 高效液相色谱法试验 GB/T 21853 化学品 分配系数（正辛醇-水） 摇瓶法试验 GB/T 21855 化学品 与pH有关的水解作用试验 GB/T 21856 化学品 快速生物降解性 二氧化碳产生试验 GB/T 21857 化学品 快速生物降解性改进的OECD筛选试验 GB/T 22052 用液体蒸气压力计测定液体的蒸气压力和温度关系及初始分解温度的方法 GB/T 22228 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-1Pa至105Pa范围内的测定 静态法 GB/T 22229 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-3Pa至1Pa范围内的测定 蒸气压平
衡法
OECD化学品测试导则No.104 蒸气压（VapourPressure）
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
生物量 biomass 一个种群中存在的活体材料的干重，本标准中表示浮萍数量的替代指标，如叶状体数或总叶面积等
代表性测量值。 3.2
变色chlorosis 叶状体组织变黄。
3.3
克隆 clone 生物体由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体
1 GB/T35524—2017
3.4
克隆体 colony 相互连接的叶状体（2片～4片）集合，有时也表述为“植株”。
3.5
效应浓度 effect concentration EC 在一定暴露期内，浮萍生长率或生长量受到抑制达到%（如，50%）的受试物浓度。为明确标识来
自生长率或生长量的EC值，用“E.C”表示生长率，用“E,C”表示生长量，后面接测量变量，如E,C（叶状体数）。 3.6
流水式 flow-through 试验期间，试验溶液持续更换。
3.7
叶状体 frond 浮萍的单个“叶状结构”，是具有繁殖能力的最小单位。
3.8
突起 gibbosity 叶状体表观出现瘤状物和肿胀。
3.9
生长 growth 试验期间测量变量（如，叶状体数、叶面积或干重、湿重)的增加。
3.10
生长率 growth rate 试验期间生物量的对数增长。
3.11
最低可观察效应浓度 lowest observed effect concentration;LOEC 试验期间，与对照组相比，观察到的生长效应差异具有统计学意义（力<0.05）的最低试验浓度。所
有高于LOEC的浓度组的毒性效应均需等于或高于LOEC观察到的效应。 3.12
测量变量 measurement variables 采用一种或几种不同效应变化来表述试验终点的变量注：此标准可采用的测量变量为叶状体数、总叶面积、湿重和干重，
3.13
单一培养 monoculture 同一个植物物种的培养。
3.14
坏死 necrosis 叶状体组织死亡（如，发白或被水浸没）。
3.15
无可观察效应浓度 no observed effect concentration;NOEC 仅低于最低可观察效应浓度的试验浓度。与对照组相比，观察到的生长效应差异无统计学意义
(p>0.05)。
2 GB/T 35524—2017
3.16
表型 phenotype 由生物体的基因与环境相互作用后产生的可观察到的特征。
3.17
效应变量 response variable 由测量变量推导的毒性评估变量。 注：此标准采用的效应变量为生长率和生长量，可由叶状体数、叶面积、湿重或干重等测量变量推导而来。
3.18
半静态试验 semi-static (renewal)test 以定期更换试验溶液的方式进行试验。
3.19
静态试验 statictest 试验期间，试验溶液不更换进行试验。
3.20
试验终点 testendpoint 根据试验目的因受试物导致的相对于对照改变的一般因素。本准则中指对生长的抑制情况，可由
基于一个或多个测量变量反应计算的不同效应变量来表达 3.21
试验介质 testmedium 试验植物可在含有受试物的合成培养基中生长，一般受试物可溶解于该培养基中。
3.22
生长量 yield 试验结束时的生物量减去试验开始时的生物量
受试物所需信息
4
受试物所需信息包括： a) 水中溶解度（GB/T21845）； b) 蒸气压（GB/T22052、GB/T22228、GB/T22229和OECD化学品测试导则NO.104）； c) 结构式； d) 纯度； e) 在试验条件（水中、光照、温度等）条件下的稳定性； f) 水解离常数（pKa)值（GB/T21855）； g) 在试验介质中灵敏度足够高的定量分析方法； h) 正辛醇-水的分配系数（Pw）（GB/T21852和GB/T21853）； i) 快速生物降解试验结果（GB/T21803、GB/T21856、GB/T21802、GB/T21831、GB/T21852
和GB/T21801)。
5原理
在规定条件下，将处于指数生长期的浮萍暴露于不同浓度的受试物中，以7天为试验周期，通过测定所选变量（如，叶状体数、总叶面积、干重或湿重），定量化评价受试物对浮萍生长产生的相关效应。基本的测试变量是叶状体数，由于一些物质对其他变量的影响可能比叶状体数大，应同时从总叶面积、干
3 GB/T35524—2017
重或湿重中选择至少一个变量进行测定。为定量受试物相关效应，通过比较受试物组与对照组的特定生长率或生长量，从而得到指定生长效应的抑制率为%（如，50%）时的受试物浓度，表示为EC，（如， EC50)。
试验终点指标为生长抑制，表示为试验期间测量变量（平均特定生长率)的对数增长。根据一系列浓度的平均特定生长率，计算获得特定生长抑制百分率%（如，50%)并表示为E,C（如，ECs）。
额外的效应变量是生长量，定义为试验结束时的量减去试验开始时的量。根据一系列浓度中的生长量，计算获得生长量抑制百分率α%（如，50%）并表示为E,C（如，E,C5）。
此外，可通过适当的统计方法，得到LOEC和NOEC。
6参比物
通常使用3，5-二氯苯酚作为参比物。定期测试参比物对浮萍生长的影响，每年至少2次；若试验频率很低，则可在化学品测试时同时进行。采用青萍（Lemnaminor）进行参比试验（Steinberg培养基，参见表B.1），7天E,C5（叶状体数）值应在2.2mg/L～3.8mg/L之间。测试金属化合物时，应采用氯化钾作为参比物（Steinberg培养基和APHA培养基，参见表B.1和表B.4）7天Es（叶状体数）值应在 5.5g/L～10g/L之间。如使用稀脉浮萍（Lemnaaequinoctialis）进行参比物试验时，应建立实验室内部质量控制范围。
7仪器设备
uo
仪器设备包括：
试验容器：由玻璃和其他化学惰性材料制成。根据需要选择一定容积的试验容器，为避免叶状
a)
体重叠生长，试验容器口径应足够宽。推荐每个容器高度不低于20mm，体积不小于100mL。 可使用玻璃烧杯、结晶皿或玻璃培养血。 为减少溶液挥发以及避免污染，试验容器应有容器盖，并容许必要的空气交换；
b) 照度计：球面照度计或普通照度计（精确至11x）； c) 培养设备：人工气候箱或照培养箱。建议使用温度范围为24℃土2℃且连续光照，光谱范
围为400nm~ 700 nm. 光照强度在65001x～100001x范围内； d) 测定总叶面积的设备如，体视镜等）； e) pH计（精确至pH0.01）； f) 分析天平（精确至0.0001g）； g) 适用于流水式的连续分配和稀释系统（如，计量泵、稀释仪等）。
8试验系统
8.1试验生物
8.1.1试验物种
本标准推荐试验生物为青萍（Lemnaminor）和稀脉浮萍（Lemnaaequinoctialis）。物种特征参见附录A。 8.1.2试验生物的获得
试验植株可以从物种保存单位、其他实验室或野外采集获得，且应在报告中说明其品系和/或来源。
4 ICS 13.300;11.100 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T355242017
化学品 浮萍生长抑制试验
Chemicals-Lemna sp. growth inhibition test
2018-07-01实施
2017-12-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 中华人民共 和 国
国家标准化学品浮萍生长抑制试验
GB/T35524—2017
*
中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029) 北京市西城区三里河北街16号（100045)
网址：www.spc.org.cn 服务热线：400-168-0010 2018年1月第一版
*
书号：155066·1-58306
版权专有 侵权必究 GB/T35524—2017
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准和经济合作与发展组织（OECD）化学品测试导则NO.221（2006年）《浮萍生长抑制试验》
(英文版)的技术内容相同。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：上海市检测中心、环境保护部固体废物与化学品管理技术中心、中国检验检疫科
学研究院、上海出入境检验检疫局、环境保护部南京环境科学研究所。
本标准主要起草人：张京估、梁艺怀、殷浩文、张琨、刘纯新、郭琳琳、陈会明、张静、陈相、缪文彬、 石利利、刘济宁。
- GB/T35524—2017
化学品浮萍生长抑制试验
1范围
本标准规定了化学品浮萍生长抑制试验的术语和定义、受试物所需信息、原理、参比物、仪器设备、 试验系统、试验程序、质量控制、数据与报告。
本标准适用于测试化学品对淡水水生生物浮萍属（Lemna）的毒性。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 21801 化学品 快速生物降解性 呼吸计量法试验 GB/T 21802 化学品 快速生物降解性 改进的MITI试验（I） GB/T 21803 化学品 快速生物降解性 DOC消减试验 GB/T 21831 化学品 快速生物降解性 密闭瓶法试验 GB/T 21845 化学品 水溶解度试验 GB/T 21852 化学品 分配系数（正辛醇-水） 高效液相色谱法试验 GB/T 21853 化学品 分配系数（正辛醇-水） 摇瓶法试验 GB/T 21855 化学品 与pH有关的水解作用试验 GB/T 21856 化学品 快速生物降解性 二氧化碳产生试验 GB/T 21857 化学品 快速生物降解性改进的OECD筛选试验 GB/T 22052 用液体蒸气压力计测定液体的蒸气压力和温度关系及初始分解温度的方法 GB/T 22228 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-1Pa至105Pa范围内的测定 静态法 GB/T 22229 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-3Pa至1Pa范围内的测定 蒸气压平
衡法
OECD化学品测试导则No.104 蒸气压（VapourPressure）
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
生物量 biomass 一个种群中存在的活体材料的干重，本标准中表示浮萍数量的替代指标，如叶状体数或总叶面积等
代表性测量值。 3.2
变色chlorosis 叶状体组织变黄。
3.3
克隆 clone 生物体由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体
1 GB/T35524—2017
3.4
克隆体 colony 相互连接的叶状体（2片～4片）集合，有时也表述为“植株”。
3.5
效应浓度 effect concentration EC 在一定暴露期内，浮萍生长率或生长量受到抑制达到%（如，50%）的受试物浓度。为明确标识来
自生长率或生长量的EC值，用“E.C”表示生长率，用“E,C”表示生长量，后面接测量变量，如E,C（叶状体数）。 3.6
流水式 flow-through 试验期间，试验溶液持续更换。
3.7
叶状体 frond 浮萍的单个“叶状结构”，是具有繁殖能力的最小单位。
3.8
突起 gibbosity 叶状体表观出现瘤状物和肿胀。
3.9
生长 growth 试验期间测量变量（如，叶状体数、叶面积或干重、湿重)的增加。
3.10
生长率 growth rate 试验期间生物量的对数增长。
3.11
最低可观察效应浓度 lowest observed effect concentration;LOEC 试验期间，与对照组相比，观察到的生长效应差异具有统计学意义（力<0.05）的最低试验浓度。所
有高于LOEC的浓度组的毒性效应均需等于或高于LOEC观察到的效应。 3.12
测量变量 measurement variables 采用一种或几种不同效应变化来表述试验终点的变量注：此标准可采用的测量变量为叶状体数、总叶面积、湿重和干重，
3.13
单一培养 monoculture 同一个植物物种的培养。
3.14
坏死 necrosis 叶状体组织死亡（如，发白或被水浸没）。
3.15
无可观察效应浓度 no observed effect concentration;NOEC 仅低于最低可观察效应浓度的试验浓度。与对照组相比，观察到的生长效应差异无统计学意义
(p>0.05)。
2 GB/T 35524—2017
3.16
表型 phenotype 由生物体的基因与环境相互作用后产生的可观察到的特征。
3.17
效应变量 response variable 由测量变量推导的毒性评估变量。 注：此标准采用的效应变量为生长率和生长量，可由叶状体数、叶面积、湿重或干重等测量变量推导而来。
3.18
半静态试验 semi-static (renewal)test 以定期更换试验溶液的方式进行试验。
3.19
静态试验 statictest 试验期间，试验溶液不更换进行试验。
3.20
试验终点 testendpoint 根据试验目的因受试物导致的相对于对照改变的一般因素。本准则中指对生长的抑制情况，可由
基于一个或多个测量变量反应计算的不同效应变量来表达 3.21
试验介质 testmedium 试验植物可在含有受试物的合成培养基中生长，一般受试物可溶解于该培养基中。
3.22
生长量 yield 试验结束时的生物量减去试验开始时的生物量
受试物所需信息
4
受试物所需信息包括： a) 水中溶解度（GB/T21845）； b) 蒸气压（GB/T22052、GB/T22228、GB/T22229和OECD化学品测试导则NO.104）； c) 结构式； d) 纯度； e) 在试验条件（水中、光照、温度等）条件下的稳定性； f) 水解离常数（pKa)值（GB/T21855）； g) 在试验介质中灵敏度足够高的定量分析方法； h) 正辛醇-水的分配系数（Pw）（GB/T21852和GB/T21853）； i) 快速生物降解试验结果（GB/T21803、GB/T21856、GB/T21802、GB/T21831、GB/T21852
和GB/T21801)。
5原理
在规定条件下，将处于指数生长期的浮萍暴露于不同浓度的受试物中，以7天为试验周期，通过测定所选变量（如，叶状体数、总叶面积、干重或湿重），定量化评价受试物对浮萍生长产生的相关效应。基本的测试变量是叶状体数，由于一些物质对其他变量的影响可能比叶状体数大，应同时从总叶面积、干
3 GB/T35524—2017
重或湿重中选择至少一个变量进行测定。为定量受试物相关效应，通过比较受试物组与对照组的特定生长率或生长量，从而得到指定生长效应的抑制率为%（如，50%）时的受试物浓度，表示为EC，（如， EC50)。
试验终点指标为生长抑制，表示为试验期间测量变量（平均特定生长率)的对数增长。根据一系列浓度的平均特定生长率，计算获得特定生长抑制百分率%（如，50%)并表示为E,C（如，ECs）。
额外的效应变量是生长量，定义为试验结束时的量减去试验开始时的量。根据一系列浓度中的生长量，计算获得生长量抑制百分率α%（如，50%）并表示为E,C（如，E,C5）。
此外，可通过适当的统计方法，得到LOEC和NOEC。
6参比物
通常使用3，5-二氯苯酚作为参比物。定期测试参比物对浮萍生长的影响，每年至少2次；若试验频率很低，则可在化学品测试时同时进行。采用青萍（Lemnaminor）进行参比试验（Steinberg培养基，参见表B.1），7天E,C5（叶状体数）值应在2.2mg/L～3.8mg/L之间。测试金属化合物时，应采用氯化钾作为参比物（Steinberg培养基和APHA培养基，参见表B.1和表B.4）7天Es（叶状体数）值应在 5.5g/L～10g/L之间。如使用稀脉浮萍（Lemnaaequinoctialis）进行参比物试验时，应建立实验室内部质量控制范围。
7仪器设备
uo
仪器设备包括：
试验容器：由玻璃和其他化学惰性材料制成。根据需要选择一定容积的试验容器，为避免叶状
a)
体重叠生长，试验容器口径应足够宽。推荐每个容器高度不低于20mm，体积不小于100mL。 可使用玻璃烧杯、结晶皿或玻璃培养血。 为减少溶液挥发以及避免污染，试验容器应有容器盖，并容许必要的空气交换；
b) 照度计：球面照度计或普通照度计（精确至11x）； c) 培养设备：人工气候箱或照培养箱。建议使用温度范围为24℃土2℃且连续光照，光谱范
围为400nm~ 700 nm. 光照强度在65001x～100001x范围内； d) 测定总叶面积的设备如，体视镜等）； e) pH计（精确至pH0.01）； f) 分析天平（精确至0.0001g）； g) 适用于流水式的连续分配和稀释系统（如，计量泵、稀释仪等）。
8试验系统
8.1试验生物
8.1.1试验物种
本标准推荐试验生物为青萍（Lemnaminor）和稀脉浮萍（Lemnaaequinoctialis）。物种特征参见附录A。 8.1.2试验生物的获得
试验植株可以从物种保存单位、其他实验室或野外采集获得，且应在报告中说明其品系和/或来源。
4