ICS 13.300;13.020.40 A 80
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T347132017
化学品 体外毒性试验替代方法的
验证程序和原则
ChemicalsValidation process and principles of alternative methods for
in vitro toxicological testing
2018-05-01实施
2017-11-01发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T 34713—2017
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准部分采用了世界经济合作发展组织（OECD)指南文件OECDENV/JM/MONO（2005）14
《危害评估中新的或更新的测试方法验证和国际接受的指南文件》Guidancedocumentonthevalidation andinternationalacceptanceofneworupdatedtestmethodsforhazardassessment（英文版），有关的技术内容参考上述文件整理而成。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：崔媛、李燃、张静、陈会明。
- GB/T34713—2017
化学品 体外毒性试验替代方法的
验证程序和原则
1范围
本标准规定了化学品体外毒性试验替代方法的验证程序和原则，本标准适用于化学品的各种体外毒性试验替代方法。
术语和定义
2
下列术语和定义适用于本文件。
2.1
替代 alternative 改善试验设计和提高试验效率，以减少某一试验所需动物的数量（减少替代），减少动物的应激（优
化替代），以及完全停止某一试验的动物使用（绝对替代）。 2.2
替代试验 alternativetesting 利用游离器官、培养的细胞或细胞器、生物模拟系统，以减少、优化或代替传统的动物试验，进行毒
理学评价、功效性评价和其他生命科学研究的试验。 2.3
验证 validation 出于一定目的：对某一方法或程序可靠性和相关性进行评估的过程，
3 验证程序
附录A提供了皮肤腐蚀性体外试验验证程序应用示例。
3.1 替代方法的开发与申报
来自实验室的替代方法开发与建立，包括： a) 方法目的说明； b) 方法需求说明； c) 方法起源； d) 应用范围说明； e) 在验证研究中需要说明的情况； f) 测试方法草案。
3.2 替代方法的预验证和优化
预验证过程是一种小规模的实验室间研究，为了优化测试方法草案和预测模型，以获得方法相关性
1 GB/T34713—2017
和可靠性的初步评价。测试优化是为了确保方法符合动物替代的原则，并且符合随后的正式验证研究要求，节省人力和物力。
预验证的目的是形成一个优化的测试方法草案，并能够在正式验证中进行进一步评估主要阶段包括： a）初步计划：包括定义方法原理和测试目的、起草草案、收集数据结果、确定评价模型、考核和评
估实验室资质等。 b) 方法优化：测试方法草案和评价模型需在有经验的实验室进行优化 c）方法转化：将方法移植到第二个实验室，进行实验室内和实验室间重复性和再现性评价，并对
方法草案和评价模型进行必要的优化 d）方法执行：在三个或更多的实验室进行盲样测试，对方法相关性和可靠性进行评价，分析实验
数据，形成优化的测试方法草案。
3.3替代方法的验证申请
向相关监管部门或国际组织申请替代方法的正式验证，并提供预验证的详细资料和数据。通过替代方法的验证申请后，可由权威机构组织对替代方法进行正式验证
3.4替代方法的验证
为获取更准确的方法相关性和可靠性评价，验证包括盲样测试，需在具备能力的实验室间进行。标准样品验证是在预验证的基础上，用盲样对更多的标准样品进行测试。
主要阶段包括： a）成立验证管理小组：定义验证研究的目的，设计测试方法草案，选择参与验证的实验室，标准样
品选择和分发，建立管理评估和监管程序。
b) 预备测试程序：保留数据记录，选择标准样品，并对标准样品进行编码和分发标准样品。 c) 测试编码标准样品：测试方法在实验室间的运行性能，数据的处理和评估。 d）方法评估：数据采集和分析、总结和分析测试结果，用评估模型验证数据，对测试方法草案和实
验数据进行专家评议，同意、修订或否决测试方法草案。
3.5 5方法和提案的独立评估
测试数据和结果应可重复，需通过相关专家评议。测试方法草案需召开专家评审会，由评审专家公
开听取方法章案背景评估意见、方法评估意见，对测试方法章案推荐意见进行公开评议。
3.6 申请监管部门批准
向监管部门提交测试方法的申请，监管部门对替代技术方法进行考虑和评估主要程序包括： a）准备报告； b)7 准备支持数据； c) 准备公布结果。
4整体验证过程的关键点
整体验证过程中有4个关键点，图1为从测试开发到验证，测试方法优化中的关键点步骤。
2 GB/T34713—2017
关键点1
测试方法开发
预验证优化→ 转化重复性一再现性
关键点2
关键点3
否
测试方法性能可接受吗？
是
验证过程的主体过程全面评估可靠性+再现性一个或多个阶段包括：
关键点4
实验室间测试盲样测试阳性和阴性对照物的测试
图1 从测试方法开发到验证，测试方法优化中的关键点步骤
4.1 关键点1
每个测试要点（例如标准样品暴露时间、组织病理学、临床化学等）都需仔细研究和评估，来确定最佳条件/细节。 4.2 关键点2
至少有一个实验室是独立于测试方法开发实验室，检测初步评估和审查该方法在实验室间的可转化性和再现性。若测试方法未能提供足够的可再现性，视再现性的程度，考虑是否进一步优化。 4.3 关键点3
若替代方法在相关性方面而不是重复性方面显示不可接受的性能，是由于替代方法方案存在不足。 如进一步试验优化不能解决性能问题，则应考虑重新设计部分测试方法，或考否决测试方法。 4.4关键点4
在某些情况下，预验证结果不足以进行进一步的验证，但替代方法再精炼后仍被看好，如果这个阶段用适当的方法处理可解决方法不完善的地方，则可开展主要的验证，在此情况下可开展多个主要验证研究。
5验证原则
5.1 替代方法说明
对替代测试方法的说明包括：
3 GB/T34713—2017
a) 方法的科学目的说明； b) 方法的基本原理描述； c) 已知的或推测的机制原理解释； d) 训练集（化合物结构十完整的数据集）的说明： e） 测试终点说明和详细描述； f) 应用范围。
5.2替代方法终点与目的生物指标之间关系的描述
包括测试方法测量的效应的科学相关性的说明，并与特定类型的目的效应/毒性的反应机制（生物学的)或效应（相关的)有关。虽然关联可能是机制的或相关的，最好对与效应/毒性相关的生物相关性的测试方法进行评估。 5.3 替代方法的详细方案和标准操作规程（SOPs）
替代方案要足够详细，具体包括： a） 标准操作规程（SOPs）； b) 所需测试材料描述，包括适用测试所需要使用的特定细胞系或人工构造物或动物品系； c) 测试内容和测试过程描述； d) 数据分析描述； e） 数据评价标准； f) 方法运行可接受的标准，如阳性和阴性控制响应的描述 g) 测试结果适用种属列表的描述； h) 已知测试限制性的描述，包括测试能够或者不能够准确评定的材料分类描述等，
5.4 替代方法实验室内和实验室间重现性确证
需有数据表明随着时间变化，方法在实验室内和实验室间重现性和变异性。需对生物差异性影响
测试方法重现性程度说明。 5.5替代方法性能描述
替代方法运行性的说明需基于标准样品所进行的测试，而标准样品应代表测试方法所应用的物质类型。已对足够的标准样品进行了测试，测试时采用代号以排除人为偏见因素。 5.6替代方法性能的评价
替代方法的运行性应已经过评估，评估的种属与毒性测试的相关性。 替代方法应已有足够数据，能够对提议的替代方法与被替代方法的性能和可适应性比对分析。
5.7替代方法验证数据最好符合良好实验室规范（GLP)和良好细胞培养规范（GCCP）
适当时，所有支持替代方法验证的数据应遵从良好实验室规范（GLP）原则。数据采集不符合GLP
原则的，应明确说明，并说明对测试方法验证状态的潜在影响。若涉及细胞培养和检测操作，最好符合良好细胞培养规范。 5.8测试数据和结果
所有用来支持替代方法验证的测试数据，应能够进行重复和评估，包括： a）具有详细的方法草案，并且向公众开放； 4