ICS 71. 060.99 G 14 备案号：378402013
HG
中华人民共和国化工行业标准
HG/T 4317—2012
含银抗菌溶液
Antibacterial solution containingsilver
2013-03-01实施
2012-11-07发布
中华人民共和国工业和信息化部发布 HG/T4317—2012
前言
本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国化学标准化技术委员会无机化工分技术委员会（SAC/TC63/SC1)归口。 本标准负责起草单位：张家港市华昌药业有限公司、湖南多喜爱家纺股份有限公司、晋大纳米科技
（厦门)有限公司、广东省微生物分析检测中心、深圳市爱杰特医药科技有限公司、昆明汉德纳米生物科技有限责任公司、苏州泰利三佳纳米科技有限公司、湖南工业大学、通标标准技术服务有限公司（SGS CSTC)、中国科学院理化技术研究所、中国食品药品检定研究院医疗器械中心、北京崇高纳米科技有限公司、全国卫生产业企业管理协会抗菌产业分会。
本标准主要起草人：王平、苏伟、吴继贤、郑苏江、陈虎、杨玲、谢小保、陈健、汤建新、李毕忠、汤京龙、许晓东、张峰、王健。
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含银抗菌溶液
1范围
本标准规定了含银抗菌溶液的术语和定义、要求、试验方法、检验规则、标志、标签和包装、储存、 运输。
本标准适用于以水为溶剂的含银抗菌溶液，该产品主要用于纤维织物、日用品和医疗卫生领域等。 2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T191--2008包装储运图示标志 GB/T4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验 菌落总数测定 GB/T6678化工产品采样总则 GB/T6680液体化工产品采样通则 GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法 GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB11907水质银的测定火焰原子吸收分光光度法 GB/Z21738--2008一维纳米材料的基本结构高分辨透射电子显微镜检测方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3. 1
抗菌antibacterial 采用化学或物理方法杀灭细菌或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。
4要求 4.1技术要求
含银抗菌溶液按本标准规定的试验方法检测，技术要求应符合表1要求。
表1技术要求
指标
指标项目
无色或略带颜色的透明液体
外观银含量银含量标示误差/% 银颗粒平均粒度Dso/nm 4.2抗菌性能要求 4.2.1试验标准菌株
协议 10 100
≤ ≤
革兰氏阳性菌：金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，ATCC6538或AS1.89）革兰氏阴性菌：大肠杆菌（Escherichiacoli，ATCC25922或AS1.90）
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根据产品的使用要求，可增加其他菌种作为检验菌种，但菌种应由国家级菌种保藏管理中心提供。 4.2.2抗菌效果
将含银抗菌溶液按标称浓度用蒸馏水稀释至10mg/L，按附录A的方法进行30min的接触抗菌试验，对两种菌的抗菌率均应不低于90%，判为抗菌指标合格。 5试验方法 5.1警告
本标准中使用的样品、强酸均具有腐蚀性，操作时应谨慎，避免溅出；挥发性有机溶剂有害人体健康且易燃，应注意在通风橱内进行操作，并防止与明火接触。 5.2一般规定
本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682一2008中规定的三级蒸馏水。 5.3外观
自然光下肉眼观察。 5.4银含量测定
按产品标称浓度，将样品用水稀释至1mg/L～5mg/L后，按GB11907方法测定银含量。 5.5标示误差的计算
标示误差以表示，按式（1)计算。
g=_me-mb ×100
(1)
mb
式中： m。一一实际测定的含银量； mb一一标示的含银量。
5.6银颗粒平均粒径的测定
按GB/Z21738一2008中的6.1方法制备样品，并按7.2进行粒径测试和统计。 5.7抗菌率的测定
按本标准附录A进行。 6检验规则 6.1本标准要求中规定的全部项目为出厂检验项目，应逐批进行检验。 6.2用相同材料，基本相同的生产条件，连续生产或同一班组生产的含银抗菌溶液为一批。每批不超过1吨。 6.3按GB/T6678或GB/T6680的规定确定采样单元数。将桶内产品混匀，用玻璃采样管从每桶的中部采样，所采样品总量不得少于500mL。将采得的样品混匀后，分装于两个清洁干燥的聚乙烯塑料瓶中，密封。瓶上粘贴标签，注明生产厂名称、产品名称、批号和生产日期。一瓶供分析检验用，一瓶保留三个月备查。 6.4检验结果如有指标不符合本标准要求时，应重新自两倍量的包装袋中采样进行复验，复验的结果即使有一项指标不符合本标准要求时，则整批产品为不合格。 6.5采用GB/T8170规定的修约值比较法判断检验结果是否符合本标准。 7标志、标签 7.1含银抗菌溶液产品的外包装上应有牢固清晰的标志，内容包括：生产厂名、厂址、产品名称、银含量、净含量、批号或生产日期、本标准编号及GB191一2008中规定的“怕晒”标志。 2
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7.2每批出厂的含银抗菌溶液都应附质量证明书，内容包括生产厂名、厂址、产品名称、银含量、批号或生产日期、产品质量符合本标准的证明和本标准编号。 8包装、运输、储存 8.1含银抗菌溶液应采用避光硬塑料或玻璃质地的瓶（桶）或容器包装。 8.2含银抗菌溶液在运输中应防止烈日曝晒和高温，并要经常检查，确保容器严密不漏。 8.3含银抗菌溶液应储存在通风、避光、干燥库房内。 HG/T4317—2012
附录A （规范性附录）抗菌试验方法
A.1警告
本试验所采用的细菌都是能使人感染并致病的细菌，因此必须采用一切必要的预防措施，以免除对实验室人员和周围环境及有关人员的危害。试验应由在微生物检测技术方面训练有素且有经验的人员从事。并且，试验者应高度注意消毒及无菌操作，防止试样被杂菌污染。 A.2试剂和材料 A.2.1试剂 A.2.1.1蛋白陈，生化试剂。 A.2.1.2 牛肉浸膏，生化试剂。 A.2.1.3琼脂，试剂级。 A.2.1.4氯化钠，分析纯。 A.2.1.5 氢氧化钠，分析纯。 A.2. 1.6 磷酸氢二钠，分析纯。 A.2.1.7 磷酸二氢钾，分析纯。 A.2.1.8 吐温-80，分析纯。 A.2.2材料 A.2.2.1三角烧瓶，容量为100mL，250mL，500mL。 A.2.2.2 生化培养皿（简称平血），$90mm。 A.2.2.3 刻度吸管，容量为1mL；或数字可调移液器及配套用一次性塑料吸头。 A.2.2.4 试管。 A.2.2.5 酒精灯。 A.2.2.6 接种环。 A.2.3仪器、设备 A.2.3.1 恒温振荡器（摇床），温控精度为士2℃。 A.2.3.2 生化培养箱，温控精度为士1℃。 A.2.3.3 高压蒸汽消毒器（简称灭菌锅）。 A.2.3.4 天平，感量为士0.01g。 A.2.3.5 生物安全柜，二级。 A.2.3.6 冷藏箱，5℃~10℃。 A.2.3.7 漩涡振荡器。 A.3试验培养基配制
使用下列培养基，如市售商品培养基和下文介绍的培养基组成相同，则亦可使用商品培养基。 A.3.1营养肉汤(NB)
牛肉膏5.0g，蛋白陈10.0g，氯化钠5.0g，加蒸馏水1000mL溶解后，室温下用0.1mol/L的氢氧化钠或0.1mol/L的盐酸溶液调节pH为7.0～7.2；置于121℃、103kPa下高压湿热灭菌15min。
灭菌后的营养肉汤应在5℃～10℃下保存，保存期不超过30d。 A.3.2营养琼脂(NA) 4
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牛肉膏5.0g，蛋白陈10.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g，加蒸馏水1000mL溶解后，室温下用 0.1mol/L的氢氧化钠或0.1mol/L的盐酸溶液调节pH为7.0～7.2；置于121℃、103kPa下高压湿热灭菌15min。
灭菌后的营养琼脂应在5℃～10℃下保存，保存期不超过30d。 A.3.3平板计数琼脂
酵母粉2.5g，胰蛋白陈5.0g，葡萄糖1.0g，琼脂15.0g，加蒸馏水1000mL溶解后，室温下用0.1 mol/L的氢氧化钠或0.1mol/L的盐酸溶液调节pH为7.0～7.2，置于121℃、103kPa下高压湿热灭菌15min。
灭菌后的平板计数琼脂应在5℃～10℃下保存，保存期不超过30d。 A.3.4磷酸盐缓冲溶液（(PBS,0.03mol/L，pH=7.2)
磷酸二氢钾1.36g，磷酸氢二钠2.83g，加蒸馏水至1000mL溶解。置于121℃、103kPa下高压湿热灭菌15min。
灭菌后的PBS应在5℃～10℃下保存，保存期不超过30d。 A.3.5生理盐水
氯化钠8.5g，加蒸馏水至1000mL溶解。为便于细菌分散，可加人少量表面活性剂如0.3%的吐温-80。置于121℃、103kPa下高压湿热灭菌15min。
灭菌后的生理盐水应在5℃～10℃下保存，保存期不超过30d。 A.4分析步骤 A.4.1菌种保藏
将标准菌种用接种环接种在营养琼脂（NA)斜面培养基或其他适合的培养基上，置于培养箱中，在 37℃士1℃下培养24h～48h，然后于冰箱中在5℃～10℃下保藏。一个月内将其接种到新的斜面（以此类推），但接种次数从菌种中心得到的细菌算起不应超过14代。如保存时间达到或超过一个月，不可进行继代培养。 A.4.2菌种的活化
将斜面保藏菌转接到NA平板或斜面培养基上，置于培养箱中，在37℃士1℃下培养24h士1h，每天转接1次，连续转接不超过2周。试验时应采用连续转接2次后（第314代）的24h内转接的新鲜细菌培养物。 A.4.3接种菌液的制备
用接种环从活化好的新鲜细菌培养物上取少量新鲜细菌，加到PBS稀释液中，依次10倍梯度稀释，选取菌液浓度梯度为（1～5）×106CFU/mL的梯度作为试验用菌液。
若配好的接种液不能立刻使用，则应在5℃下保存，4h内使用。 A.4.4试样稀释制备
根据样品的标称浓度用无菌蒸馏水稀释至10mg/L，注意观察是否产生变色和沉淀，并在报告中注明。 A.4.5试验操作
取1mL菌液（A.4.3)加人到49mL含银抗菌溶液的稀释液（A.4.4)中，轻轻播摇匀，制备1：50的样品匀液。开始计时，静置作用30min。立即分别取1：50的样品匀液1mL至2个平血，倾注人计数琼脂，转动平血，使其充分均匀，待培养基凝固后翻转平板，35℃土2℃培养计数。同时吸取1：50的样品匀液1mL于盛有9mL生理盐水的无菌试管中，混匀后制成1：500的样品匀液，依此程序制备10 倍系列稀释样品匀液，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平Ⅲ。及时倾注入计数琼脂，转动平皿，使其充分均匀，待培养基凝固后翻转平板，35℃土2℃培养24h 至48h计数。
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对照样品选用PBS溶液，0min和30min的重复上述操作。 每个样品做3个平行。
A.4.6计数
对培养后的平板，按照GB/T4789.2的规定进行活菌计数。 注意：请稀释3个梯度计数，若稀释后的梯度计数出现偏差，不成梯度比例，以较小的稀释度数据
为准。
活菌数N(CFU)按公式(A.1)计算：
N=CDV
(A.1)
式中： C-一菌落数均值，单位为CFU/mL； D-稀释倍数； V.. 一用于稀释的稀释液的体积，单位为毫升（mL）。 对三个平行试样的活菌数取算术平均值，保留二位有效数字。
A.4.7结果计算 A.4.7.1试验成立条件
只有下述2个条件全部成立，试验被判定有效。反之，则试验无效，须重新进行试验。 1）对照样品PBS溶液加菌后0接触时间的活菌数满足如下条件：
(A.2)
（L最大一L最小）L平均≤0.2
式中： L最大一 活菌数的最大对数值； L最小一 活菌数的最小对数值； L平均 一三个试样的活菌数对数的平均值。 2）对照样品PBS溶液加菌后0min接触时间的活菌数平均值应为（2.0～10.0)X104CFU。
A.4.7.2抗菌率的计算
抗菌率R(%)按公式（A.3)计算：
(A.3)
R=(Nc-Ns)/N.X100
式中： N。一一作用30min后对照样品PBS的菌落数均值，单位为CFU； Ns——作用30min后试样的菌落数均值，单位为CFU。
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