ICS 71.040.10 N 53
T/CIMA
体
标
准
团
T/CIMA 0011—2019
食品中黄曲霉毒素B1胶体金
免疫层析检测卡
Colloidal gold immunochromatographic test cassette for aflatoxin B, in food
2019-07-18发布
2019-10-01实施
发布
中国仪器仪表行业协会 T/CIMA 0011—2019
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国仪器仪表行业协会食品快检专业委员会提出，本标准由中国仪器仪表行业协会归口，本标准起草单位：北京普赞生物技术有限公司、深圳市三方圆生物科技有限公司、力德力诺生物技
术（北京)有限公司、浙江迪恩生物科技股份有限公司、谱尼测试集团股份有限公司、北京智云达科技股份有限公司、北京众检四方检验检测技术有限公司，
本标准主要起草人：邓乾民、孙清、刘冰冰、张晓梅、全绍伟、谭攀、孙晶玮、王军亮、曾建华、张鸿、 李金卿、费错、吴海芬、胡春娟、宋薇、房艳、杨柏崇、桑华春、钱瑞、张敬晗、谢艳红
1 T/CIMA 0011—2019
食品中黄曲霉毒素B，胶体金
免疫层析检测卡
1范围
本标准规定了食品中黄曲霉毒素B，胶体金免疫层析检测卡术语和定义、要求、试验方法、检验规
则、包装标志和使用说明书、包装、运输和贮存。
本标准适用于采用竞争性抑制免疫层析原理定性分析谷物及其制品、坚果及籽类、特殊膳食用食品、油脂及其制品等食品中的黄曲霉毒素B的胶体金免疫层析检测卡（以下简称“检测卡”）。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T191一2008包装储运图示标志 GB2761一2017食品安全国家标准食品中真菌毒素限量 GB/T2828.1一2012计数抽样检验程序第1部分：按接收质量限（AQL）检索的逐批检验抽样
计划
GB 5009.22 食品安全国家标准食 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件，
3.1
胶体金免疫层析法 colloidal gold immunochromatographyassay 利用竞争抑制免疫层析的原理，样本中的黄曲霉毒素B在层析的过程中与胶体金标记的特异性单
克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线（T线）上黄曲霉毒素B-蛋白偶联物的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线的颜色深浅变化或与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中黄曲霉毒素BI进行定性判定。 3.2
检测卡testcassette 由试纸条及配套卡壳组装而成。其中，试纸条由样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜（NC膜）和吸水纸
构成（见图1）。将特异性的抗原或抗体以条带状固定在硝酸纤维素膜（NC膜）上，胶体金标记试剂（多克隆抗体或单克隆抗体)吸附在金标垫或金标微孔中，当加人待检样本后，样本溶解金标垫上或金标微孔中的胶体金标记试剂并与之相互反应，通过毛细作用向前移动，移动至固定抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚焦在测试线（T线）上，可通过目视观察到显色结果。
1 T/CIMA0011—2019
金标垫
NC膜
T线 C线 吸水纸加样孔 样品流动方向
0.0
样品垫√
1
N
I 0
图1检测卡组成示意图
3.3
检测限 limitofdetection 在本文件规定的试验条件下，使检测卡呈现阳性结果时的样品中黄曲霉毒素B的最低浓度。
3.4
假阴性率 falsenegativerate 在本文件规定的试验条件下，达到实际最低检出水平时，阳性样品中检出阴性结果的最大概率（以
百分比计），具体计算见附录A。 3.5
假阳性率 false positive rate 在本文件规定的试验条件下，达到实际最低检出水平时，阴性样品中检出阳性结果的最大概率（以
百分比计），具体计算见附录A。 3.6
灵敏度 sensitivity 在本文件规定的试验条件下，达到实际最低检出水平时，检出阳性结果的阳性样品数占总阳性样品
数的百分比，具体计算见附录A。 3.7
特异性 specificity 在本文件规定的试验条件下，达到实际最低检出水平时，检出阴性结果的阴性样品数占总阴性样品
数的百分比，具体计算见附录A。
4要求
4.1 1工作条件
检测卡在下列条件下应能正常使用： a）环境温度：15℃～30℃。 b）工作环境洁净，操作时避免阳光直射。
4.2 2外观
检测卡表面光滑平整，颜色均匀一致，纤维膜面无露底、起泡、麻点、起皱、刷痕等缺陷；点样孔应洁净。
2 T/CIMA0011—2019
4.3 性能指标 4.3.1试纸条宽度
试纸条宽度应不小于3.0mm。 4.3.2 层析速度
层析速度应不低于10mm/min。 4.3.3检测限
检测卡测量婴幼儿米粉、小麦、大豆油和花生样品中黄曲霉毒素B，检测限应符合GB2761一2017
的限量要求。婴幼儿米粉、小麦、大豆油和花生添加浓度为1倍限量值和2倍限量值时结果应全呈阳性，1/2限量值时为阴性，添加浓度具体要求见表1。
表1 不同样品添加黄曲霉毒素B，浓度值
添加浓度/（μg/kg)
样品婴幼儿米粉小麦大豆油花生
1/2限量值 0.25
1倍限量值
2倍限量值
0.5 5 10 20
1 10 20 40
2.5 5 10
4.3.4 假阴性率
假阴性率应不大于1%。 4.3.5 假阳性率
假阳性率应不大于10%。 4.3.6 灵敏度
灵敏度应不小于99%。 4.3.7 特异性
特异性应不小于90%。 4.3.8 重复性
重复性应为100%。 4.3.9 稳定性
在37℃下放置60d，或者50℃下放置25d，检测卡应符合4.3.1～4.3.8的要求， 4.3.10 批间差异性
取3个批号检测卡，检测浓度分别为0.5uμg/kg的婴幼儿米粉、5μg/kg的小麦、10ug/kg的大豆
3 T/CIMA 0011—2019
油、20ug/kg的花生，反应结果应一致，显色应均一。
5试验方法
5.1 试剂与材料 5.1.1试剂
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水，乙腈（CHCN）：色谱纯。 甲醇（CH:OH）：分析纯。
5.1.2仪器和设备
主要有： a) 天平：分度值0.0001g。 b）离心机：不低于4000r/min。 c) 氮吹仪。 d）涡旋振荡器。 e） 计时器。 f) 移液器。 g) 游标卡尺：精度为0.02mm。
5.1.3标准物质
黄曲霉毒素B1，分子式C1,H12O，CAS编号1162-65-8，或等同可溯源物质。 5.1.4标准溶液配制 5.1.4.1黄曲霉毒素B，标准储备液（1mg/mL）
准确称取黄曲霉毒素B标准品10.0mg，置于10mL容量瓶中，加入适量乙睛超声溶解后，用乙稀释至刻度，摇勾，制成浓度为1mg/mL的黄曲霉毒素B标准储备液。一20℃避光保存，有效期 1年。 5.1.4.2黄曲霉毒素B，标准中间液（10μg/mL）
准确量取黄曲霉毒素B，标准储备液（1mg/mL）1mL，置于100mL容量瓶中，用乙腊稀释至刻度，摇匀，制成浓度为10ug/mL的黄曲霉毒素B标准中间液。一20℃避光保存，有效期6个月。 5.1.4.3黄曲霉毒素B，标准液（0.1μg/mL）
准确量取黄曲霉毒素B：标准中间液（10μg/mL）1mL，置于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1ug/mL的黄曲霉毒素B，标准液。一20℃避光保存，有效期3个月。 5.1.5质控溶液制备 5.1.5.1阴性质控溶液（0.1ng/mL）
准确量取黄曲霉毒素B：标准液（0.1μg/mL)100μL，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1ng/mL的黄曲霉毒素阴性质控溶液。现用现配，
4