第32卷，第4期 2012年4月
光谱学与光谱分析 Spectroscopy and Spectral Analysis
Vol. 32,No. 4, pp1024-1027
April，2012
低强度激光辐照HeLa细胞诱导增殖效应的可见光谱特性
杨洪钦，王瑜华，陈江旭，郑莉琴，谢树森福建师范大学激光与光电子技术研究所，福建省光子技术重点实验室，医学光电科学与技术教育部重点实验室，福建福州350007
摘要比较研究了可见波段405，514，633和785nm低强度激光辐照HeLa细胞的促增殖效应。实验采用100和1000」·m-两种有效能量密度的可见光波辐照细胞，照射后24，48，72h采用MTT法检测细胞活性。结果表明，405，633，785nm激光均能促进HeLa细胞增殖，且呈波长和时间依赖性；633nm激光辐照对细胞促增殖效应最显著；514nm激光辐照对HeLa细胞促增殖效应较不明显。不同光剂量对细胞增殖效应不同，405，633，785nm激光辐照时能量密度为1000」·m的辐照组细胞增殖均较100·m-辐照
组明显，而514nm激光辐照时1000·m"辐照组与100J·m=辐照组细胞增殖的差异不明显，关键调低强度激光；HeLa细胞；增殖；可见光谱；MTT法
中图分类号：R318.5：Q631
引言
文献标识码：A
低强度激光可以诱发多种生物刺激效应，其中激光辐照诱发细胞增殖是低强度激光应用于临床如促进伤口食合、促进骨骼修复等[-3)。-个非常重要的生理学效应。激光辐照诱发增殖效应发生于多种类型的细胞，如成纤维细胞、成骨细胞、淋巴细胞、干细胞、内皮细胞、卫星细胞、人肺腺癌细胞(ASCT-a-1)、Hela细胞等[4。然而低强度激光诱发细胞增殖的机理至今还不明确，目前提出了儿种可能的机理，如光能量被细胞内源性的光敏物质吸收，转化为代谢能量，影响线粒体呼吸链的电子传输、产生活性氧、改变细胞内钙离子浓度等-13。低强度激光诱发细胞增殖效应与所采用的激光参数，如波长、功率、能量密度等[12-1]：
密切相关，研究报道
中激光波长大多集中在红光和近红外波段，较少系统研究整
个可见波段激光辐照的效应[15,15)。Karu
等研究了633
nmHe-Ne激光辐照HeLa细胞的增殖效应，比较了10，
100,1000J.1
n-2三种能量密度辐照下细胞生长情况，给出
了促进HeLa细胞增殖的最佳光剂量为100J，以HeLa细胞为研究对象，首先采用100，300，
。本实验 600，1000
J·m-2四种不同的能量密度，研究了633nmHe-Ne激光轻照诱导细胞增殖效应的剂量依赖关系，并与Karu小组的实
验结果进行了比较。然后选取100和1000」收稿日期：2011-09-05，修订日期：2011-11-30
"两种能量
DOI; 10. 3964/j. issn. 1000-0593(2012)04-1024-04
密度，实验测量了可见光谱范围内405，514，633和785nm 四个波长激光辐照下HeLa细胞的增殖响应，分析了同一能量密度激光辐照下细胞增殖效应的波长和时间依赖性，比较了可见光波不同能量密度对细胞活性的影响以及这种影响随波长的变化趋势。实验结果对低强度激光疗法临床研究提供了有益的数据参考和理论依据。
实验部分 1.1试剂与仪器
DMEM培养基、胎牛血清为Hyclone产品，青-链霉素、胰蛋白酶为Invitrogen产品，噻唑蓝（MTT）、二甲基亚研(DMSO)为Sigma产品，96孔板为Corning产品，采用的激光器分别为405nm半导体激光（LQC.Newport）、514nm Ar*激光(Spectra-Physics)、633 nm He-Ne 激光(Melles Gri ot)、785nm率导体激光(LQC.Newport)。酶标仪为Mithras LB 940。
1.2细胞培养
HeLa细胞源于宫颈瘤细胞，常规培养于含10%胎牛血清，100U·mL-1青霉素、100U·mL-1链霉素的DMEM 培养液中，100%湿度，5%CO;、37℃条件下培养，每两至三天换液传代。实验取对数生长期的细胞，采用含5%胎牛血清的DMEM培养液配制成1.5×10*个·mL-的单细胞
基金项目：国家自然科学基金项目(60978071)），福建省自然科学基金项目（2010J01322)，损建省教育厅B类项目(JB10021，JB11023)和长江
学者和创新团队发展计划(IRT1115)资助
作者简介：杨洪钦，1974年生，福建师范大学副教授万方数据
e-mail: hqyang@fjnu. edu cn