SN ICS 65.020.30 CCS B 41
中华人民共和国出入境检验疫行业标准
SN/T 5484—2022
罗非鱼湖病毒病检疫技术规范Quarantine protocol for the Tilapia lake virus disease
2022-07-07发布
2023-02-01实施
发 布
中华人民共和国海关总署
SN/T 5484—2022
罗非鱼湖病毒病检疫技术规范
1 范围
本文件规定了罗非鱼湖病毒的分离、实时荧光 RT-PCR、套式RT-PCR 的检测方法。本文件适用于罗非鱼湖病毒病的监测、检测与检疫。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文本中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 18088 出入境动物检疫采样
3 术语、定义和缩略语
本文件没有需要界定的术语和定义。下列缩略语适用于本文件：BSA：Bovine serum albumin 牛血清白蛋白Ct：Cycle threshold 循环阈值CPE：Cytopathic effect 细胞病变效应DEPC：Diethy pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯
dNTPs：Deoxynucleoside triphosphates 三磷酸脱氧核苷酸RNA：Ribonucleic acid 脱氧核糖核酸
RT-PCR：Reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链式反应TiLV：Tilapia lake virus 罗非鱼湖病毒（参见附录A）
4 试剂和材料
4.1 水：符合GB/T 6682中二级水的规格。
4.2 DEPC水：配制方法见附录B.1或购买商品化试剂。4.3 细胞培养液：见附录B.2。4.4 细胞系：条纹鲤细胞系（E-11）。4.5 HEPES：4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
4.6 引物：用DEPC水将每条引物配制成100μmol/L储存液，置于-20℃以下冻存；使用时，取适量配制成20μmol/L工作液，避免多次冻融。具体序列如下：
a） 实时荧光RT-PCR引物与探针：
TiLV-S3-F1:5'-CGAACTGTTGCCTTTGGAAATT-3'TiLV-S3-R1:5'-TGAAGAATAAGTGGATTGCCTTTG-3'TiLV-S3-P1:5'-FAM-CCGCGCTGGCTTCCAG-BHQ1-3'