SN ICS 65.020.30 CCS B 41
中华人民共和国出入境检验疫行业标准
SN/T 1247—2022 代替 SN/T 1247——2007
猪繁殖与呼吸综合征检疫技术规范Quarantine protocol for porcine reproductive and respiratory syndrome
2022-07-07发布
2023-02-01实施
发 布
中华人民共和国海关总署
SN/T 1247—2022
猪繁殖与呼吸综合征检疫技术规范
1 范围
本文件规定了猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的临床诊断、病毒分离鉴定、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）、间接免疫荧光试验（IFA）、间接酶联免疫吸附试验（间接ELISA）、反转录-聚合酶链式反应试验（RT-PCR）、实时荧光反转录-聚合酶链式反应试验（Real time RT-PCR）诊断方法。
本文件适用于猪繁殖与呼吸综合征的检疫、监测和诊断。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文本中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，凡是注日期的引用文件，仅该日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 缩略语
下列缩略语适用于本文件。PRRS
猪繁殖与呼吸综合征
PRRSV
猪繁殖与呼吸综合征病毒
CPE
致细胞病变效应磷酸盐缓冲盐水
PBS
免疫过氧化物酶单层试验
IPMA IFA
间接免疫荧光试验辣根过氧化物酶HRP RT-PCR
反转录聚合酶链式反应Real time RT-PCR
实时反转录聚合酶链式反应核糖核酸RNA DEPC
焦碳酸二乙酯Taq酶
Tag DNA聚合酶
dNTP
脱氧核苷三磷酸碱基对bp
溴化乙锭EB
SN/T 1247—2022
5 临床诊断
急性感染初期，猪群表现为食欲低下、发热、昏睡和精神不振等症状，个别猪可出现双耳、外阴、腹部、口部青紫发绀，一般持续1周～3周；发病高峰的主要特征是母猪旱产、流产、胎儿自溶和木乃伊胎及弱仔增多；仔猪断奶前死亡率增加，高峰期一般持续8周～12周；发病末期，母猪繁殖功能逐渐恢复，达到或接近病前水平。育肥猪存在不同程度呼吸系统症状，痊愈猪一般生长缓慢，体重较轻。若没有继发感染，出生前后感染的仔猪，呼吸困难、急促，同时出现眼周及眼脸水肿、结膜炎、蓝耳、食欲不振、发热、皮肤红斑、腹泻、震颤、毛发粗乱、厌食和神经症状。断乳仔猪感染PRRSV的典型临床症状表现为发热、肺炎、昏睡及精神萎靡，如果伴发细菌感染，则死亡率显著升高。剖检病死猪，可见间质性肺炎并伴有卡他性肺炎和肺水肿等特征病变，其他脏器一般不表现肉眼可见病变。可引起所有年龄段猪的高烧（40℃～42℃）。
有以上临床症状者，可以怀疑猪群有猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染，确诊需要实验室检验。
6 病毒分离鉴定
6.1 材料准备6.1.1 器材
二氧化碳培养箱、普通冰箱及低温冰箱、倒置生物显微镜、恒温水浴箱、离心机及离心管、96孔细胞培养板、微量移液器、组织研磨器、孔径0.2μm的微孔滤器及滤膜。6.1.2 试剂
RPMI 1640细胞培养液、MEM细胞培养液、犊牛血清、青霉素（10~U/mL）与链霉素（10°pg/mL）溶液、7.5%碳酸氢钠溶液等。试验用水应符合GB/T 6682要求。6.1.3 细胞
猪原代肺泡巨噬细胞培养物（PAM）、MARC-145。PAM由未感染过PRRS猪群中6周龄～8周龄的猪获取，并经批次检验合格，制备和检验方法按照附录A执行。6.1.4 样品6.1.4.1 采样
无菌采取扁桃体、肺、淋巴结和脾等组织，血清或腹水置低温保存盒内立即送检。不能立即检测者，应放-20℃冰箱中，长期保存应置于-70℃冰箱中。6.1.4.2 制备
血清和腹水可直接检测。肺、脾和扁桃体等组织可单独检测，也可混合后检测。各组织剪碎后研磨成糊状，加入 RPMI1640，制成10%的组织悬液，3 000 r/min 离心15 min，吸取上清液，加入青霉素500 IU/mL、链霉素500 pg/mL、庆大霉素500 ps/mL和两性霉素 B200 ng/mL。怀疑有细菌污染的样品，也可用0.2μm微孔滤膜过滤处理。