NY/T 3195-2018
热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程橡胶树棒孢霉落叶病
Technical code of practice for resistance identification to diseases and insects of tropical crops germpalsm一Corynespora leaf fall disease of rubber tree
2018-06-01实施
2018-03-15发布
前 言
本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由农业部农垦局提出。
本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。
本标准起草单位;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。
4.3.2 粗毒素提取液制备
从培养7d的 cas2亚型和 cas5 亚型多主棒孢病原菌菌落边缘打取3个直径5 mm 的菌饼，接种于装有150mL的改良Fries 3号培养液（培养液的配方见4.3.1）中，（25±1）℃恒温箱12h光暗交替静置培养12 d。将培养的菌液先用2层无菌纱布过滤;滤液于室温5000r/min 离心 10 min;上清液先用0.45 μm的针筒式微孔滤膜过滤器过滤;再用0.22 μm针筒式微孔滤膜过滤器过滤，最后一次滤液即为多主棒孢粗毒素提取液。制备好的粗毒素提取液于 4℃冰箱保存备用。
5 抗病性鉴定
5.1 病原菌菌饼接种鉴定
5.1.1 鉴定设计
鉴定时设"IAN873"为抗病对照品系，"PR107"为感病对照品系。
每个品系选取5片无病斑、完整的橡胶树淡绿期小叶，每片小叶作为1个重复，每个重复设4个接种点，其中1个接种点为空白对照。
5.1.2 接种
用无菌的牙签在接种点处轻轻刺伤，将病原菌菌饼有菌丝的一面贴于叶片接种点的伤口处，对照则用空白PDA培养基贴于伤口处，用无菌的滤纸片蘸无菌水贴于菌饼上，叶片按品系贴好标签，置于（28±1）℃保湿培养。24 h后去除菌饼，继续保湿培养。
5.1.3 数据统计
接种处理3d后进行调查。采用十字交叉法量取发病叶片病斑的直径，单位为厘米（cm），计算每张小叶和品系平均值。
5.2 粗毒素生物萎蔫法鉴定
5.2.1 鉴定设计
鉴定时设"IAN873"为抗病对照品系，"PR107"为感病对照品系。
每个品系选取12片橡胶树淡绿期小叶，每2片小叶作为1个重复，其中4个重复用于粗毒素处理，2个用空白培养基处理做对照。
5.2.2 接种
用消毒的手术剪刀将选取叶片的叶柄去除，称重后，迅速转移到含有 20 mL. 粗毒素的50 ml.离心管中.以空白改良 Fries 3号培养基作为对照。叶柄端期下插入粗毒素提取液中，处理的橡胶树叶片置于（25±1）℃的恒温箱中12 h光暗交替培养。