NY/T 3655-2020
饲料中N-羟甲基蛋氨酸钙的测定
Determination of N-Hydroxymethyl methionine calcium in feeds
2020-07-27发布
2020-11-01实施
3.3.2 电子天平;感量 0.0001 g、感量0.001 g。
3.3.3 离心机;转速不低于5 000 r/min.
3.3.4 高效液相色谱仪∶配紫外检测器或二极管阵列检测器。
3.3.5 涡旋混合仪。
3.3.6 恒湿水浴;可控温度达80℃.
3.4 样品
按照GB/T 20195 制备样品，全部通过0.28 mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，备用。
3.5 试验步骤
3.5.1 试样提取
平行做2份实验。准确称取2g（精确到0.001g》，置于50 mL离心管中，准确加入盐酸溶液（3.2.5）20 mL涡旋30 s.超声提取30 min.然后于离心机上500r/min离心5min.取上清液备用。
3.5.2 净化
固相萃取柱依次用3 mL甲醇、3 mL水活化，抽干，取5mL上清液（3.5.1），过柱。收集流出液至10 mL试管内，涡旋混匀，备用。
3.5.3 衍生
准确吸取试液（3.5.2》1 mL加人10mL.具塞棕色玻璃管中，分别加入碳酸盐缓冲液（3.2.6）2 mL，2，4-二硝基氯苯溶液（3.2.4）0.1 mL.用涡旋混合仪灌匀，置于80℃恒温水浴锅中，避光反应1h.取出.冷却至蜜温，用水稀释至10 mL.混匀。过 0.45 μm 滤膜，上机测定。
另准确移取2ug/mL5 μg/mL、10 地g/mL、25gg/mL50 ug/mL、100 μg/mL、200μg/mL.标准工作液（3.2.9）各1 mL.从分别加入碳酸盐缓冲液开始，按上述方法衍生.过0.45 μm 滤膜，上机测定。
3.5.4 测定
3.5.4.1 高效液相色谱参考条件
色谐柱;Cs柱，柱长150 mm。内径 4.6 mm，粒度 5.0 gm，或性能相当者。
柱温∶30℃。
流动相∶乙酸钠溶液（3.2.7）乙腈=9010。
流速;0.50mL./min。
进样量∶20μL 检测波长∶350nm。
3.5.4.2 测定
依次测定 N-羟甲基蛋氨酸钙标准系列溶液和试样溶液。以保留时间定性，试样中待测物质保留时间与标准溶液中对应保留时间偏差在主2.5%之内。以色谐峰面积定量，作单点或多点校准。多点校准时.其标准曲线相关系数应大于或等于0.99;单点校准时，试样溶液中待测物的响应值应与标准溶液中待测物的响应值接近（差异在土30%之内）。试样溶液中待调物的响应值应在标准曲线的线性范围之内，若超出线性范围∶需将其稀释后重新测定。N羟甲基蛋氨酸钙标准溶液的高效液相色谱图参见附录A